さまざまな自己免疫疾患における 自己抗体検出キットの開発 大阪大学 微生物病研究所 免疫化学分野 教授 荒瀬 尚 1 自己免疫疾患と自己抗体 • ほとんどの自己免疫疾患では、自己抗原に対 する特定の自己抗体が産生される。 • 自己抗体は病態に密接に関与している。 • 自己抗体の抗体価の測定は、自己免疫疾患 の診断に必須である。 2 従来技術とその問題点 • 自己免疫疾患における自己抗体の検出には、 精製タンパク質やリコンビナントタンパク質が 用いられてきたが、感度が十分でなかったり、 特異性が低い場合がある。 • 自己抗体に対する真の標的抗原を用いれば、 感度、特異性が改善されるはずである。 3 新技術の特徴・従来技術との比較 • 自己免疫疾患の自己抗体の標的分子が、 MHCクラスII分子と会合したミスフォールドタ ンパク質であることを発見。 – Proc. Natl. Acad. Sci. USA in press • MHCクラスII分子と会合したミスフォールドタ ンパク質に対する自己抗体を調べると、従来 の測定方法と比べて、感度や特異性が非常 に高い。 4 ミスフォールド蛋白質/MHCクラスII分子複合体が 自己抗体の標的分子である 自己抗体 Y 炎症・感染 自己応答性 B細胞 自己抗体 IFN-γ α Proc. Natl. Acad. Sci. USA in press β MHCクラスII α β MHCクラスII ミスフォールド 蛋白質 ERAD タンパク分解 5 ミスフォールド蛋白質/MHCクラスII分子複合体 に対する自己抗体の検出方法 自己抗原 + MHCクラスII + GFP 遺伝子導入 293T細胞 患者血清 + 蛍光標識抗ヒトIg抗体 フローサイトメトリーによる 自己抗体の結合解析 6 関節リウマチ • 関節に対する自己免疫疾患 • 日本人の約1%が罹患 • 患者の約8割でリウマチ因子や抗CCP抗体が陽性になる。 • リウマチ因子は変性したIgGに対する自己抗体であるが、生理 的に変性したIgGがどのように作られるかが不明である。 • RF陽性の健常人は、RF陰性の健常人と比べて、関節リウマチ になる可能性が26倍高い (Nielsen et al. BMJ 2012)。 7 関節リウマチ患者の自己抗体は IgG/MHCクラスII複合体を認識する without MHCクラスII with MHCクラスII IgM RF sIgG sIgG H HLA-DR IgM RF mIgG H+L + Ig αβ mIgG MHCクラスII IgG 自己抗体 • IgGが重鎖が軽鎖を伴わずHLA-DRに提示される。 • リウマチ因子はHLA-DRに提示されたIgGは認識するが膜 型IgGは認識しない。 Igαβ X IgG/MHCクラスII複合体は関節リウマチの 自己抗体の特異的標的抗原である 全身性 エリテマトーデス 抗リン脂質抗体 症候群 健常人 リウマチ因子 (抗IgG Fc抗体) 関節リウマチ 抗IgG/MHCクラスII分子複合体抗体価 • • • 従来用いられてきたリウマチ因子は関節リウマチに特異的でない。 抗CCP抗体価もRAの診断に用いられているが、病状はリウマチ因子の方が 良い指標である。 抗IgG/MHCクラスII分子複合体は関節リウマチの診断に有用である。 9 特定のMHCクラスIIのアリル(型)は多くの 自己免疫疾患の感受性に最も強く関与している HLA-Class II 関節リウマチ 10 卵白リゾチーム/HLA-DR 複合体 IgG/HLA-DR複合体に対する 自己抗体の結合性 IgG/MHCクラスII複合体に対する自己抗体が 関節リウマチの感受性に関与している 関節リウマチ感受性 関節リウマチ感受性 • IgG/HLA-DR複合体が関節リウマチの原因分子である可能性が 考えられる 想定される用途 • 今まで検出困難だった自己抗体の検査キット の開発 • 今までより特異性の高い自己抗体の検査キッ トの開発 • 本検出方法を用いた新たな自己免疫疾患治 療薬のスクリーニング 12 実用化に向けた課題 • 現在、自己抗原とMHCクラスII分子との複合 体は、自己抗原とMHCクラスIIを発現させた 細胞でしか合成できないため、現状では自己 抗体の検出には、細胞を用いる必要がある。 • 実用化に向けて、自己抗原/MHCクラスII分 子複合体をプレートやビーズに固相化したの ものを用いて自己抗体を検出するシステムの 作製が必要である。 13 企業への期待 • 臨床検査薬の開発技術を持つ企業との共同 研究が望ましい。 • 自己免疫疾患の標的分子であるミスフォール ド蛋白質/MHCクラスII複合体を標的にした 新たな治療薬の開発に興味のある企業には、 本技術の導入が有効と思われる。 14 本技術に関する知的財産権 • 発明の名称 : 自己抗体の検出方法、自己免疫疾患の罹患の可能 性を試験する方法、自己抗体の検出試薬および自 己免疫疾患用の試験試薬 • 出願番号 • 出願人 • 発明者 : PCT/JP2014/050796 : 大阪大学 : 荒瀬尚、荒瀬規子、 谷村憲司、金暉 15 お問い合わせ先 大阪大学免疫学フロンティア研究センター 免疫化学研究室 教授 荒瀬 尚 TEL:06-6879-8291 FAX:06-6879-8290 e-mail:[email protected] 大阪大学産学連携本部 知的財産部 産学連携教授 小此木 研二 TEL:06-6879-4859 FAX:06-6879-4205 e-mail:[email protected] 16
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