日本SPF豚研究会Web SPF Swine, 8(2), 30-33 (1978) """l.lllmmlllljJg および ConvenHona 豚農場由来大腸菌の薬剤耐性柏崎守 * 現在，抗生物質をほじめとする各種抗菌剤が発育促進や感染病の予防および治療を目的として家畜に応用されている。その結果として耐性菌が増加し，公衆衛生上の問題も含めてその弊害が指摘されるに至り，今や耐性菌対策は世界各国の共通な問題となっているところで， SPF 6)0 豚農場では Conventional 豚農場に比較して各種感染病の発生頻度がぎねめて少ないことほ周知の事実である。このため，結果的に抗菌剤の使用頻度や使用量がある程度制限される傾向にある。これに対し， ConventionaI 豚農場では各種感染病が多発する傾向がみられ，その防除対策として抗菌剤の投与を行 5 場合が多い。このような豚集団に対する抗菌剤の使用状況の相違が，耐性菌の出現にどのょ宮原盤材式が実施されていた 4)0 すなわち，ここでは厳重な環境規制が実施され，さらに閉鎖的に繁殖から肥育まで一貫した豚の生産方式が採用されている。 SPF 豚の飼育頭数はそれぞれ約 1,000 および 1,500 頭ほどで，これら豚集団に対して定期的な SPF 検定が実施されてぎたが 5), 過去数年間に注目すべき疾病の侵入は認められていない。一方，抗菌剤の使用状況を聞取り調査したところ，飼料はすべて市販のぺレット製品が使用されており，これに抗菌剤を特別に添加するようなことはしていなかった。また，注射やその他の方法による投薬も外傷や去勢時の特殊な場合を除きほとんど行われたことがないと、、つ -。一方，他の2 養豚場は一般の豚を飼育するい 5 に影響しているかを知ることほ今後の耐性菌わゆる Conventional 対策を考える際の重要な参考資料となろそれぞれ神奈川および栃木県下にあり，いずれも市場からの子豚導入を主体としてもっぱら肥育が行われていた。両 ConventionaI豚農場とう。そこで，ここでは抗菌剤の使用状況が明らかに異なる SPF および Conventional 豚農場を豚農場と呼ばれるもので，選び，両養豚場由来大腸菌について各種抗菌剤に対する感受性試験を行い，耐性菌の出現頻度，も常時約 2,000 頭ほどの豚が飼育されていたが，特別な環境規制は実施されておらず，また耐性パターンおよび R プラス ; ッドの検出率を衛生状態は不良で，各種疾病の発生が多く，とくに呼吸器および消化器に関連した感染病が常在化していた。このため，これら疾病の防除対策として各種抗菌剖の飼料添加がしばしば行われており，さらに注射による投薬も汎用される比較調査した。その成績について述べる。材料および方法 l) 調査養豚場調査対象としたのほ 4 養豚場で，このうち 2 養豚場はいわかる SPF 豚農場と呼ばれるものである。両 SPF 豚農場はいずれも千葉県下にあって，畜産目的に沿った SPF 豚の飼育管理方 * 農林水産省家畜衛生試験場 "* 千葉県養豚試験場 SPF S 後 zw れ e, 8, 30 一33 (1977) 傾向にあった。 2) 糞便の採取各養豚場において体重 20∼60kg の一見健康な肥育豚を無作為に選び，排費直後の糞便 5 ∼ lo9 をビニール袋に個体別に採取した。糞便は日本SPF豚研究会Web SPF Swine, 8(2), 30-33 (1978) 約 4 。C に冷蔵して 6 時間以内に実験室へし。ただちに培養に供試した。寒天平板稀釈法によって実施した 2)。各抗菌剤倍段階に稀釈して用いた。なお，耐性限界値は最小発育阻止濃度の分布状況から SA で 200/4g/m< またはそれ以上，その他の抗菌剤でほ 25pg/Imz またほそれ以上とした。搬入は2 め大腸菌の分離を生理食塩水 gm/ で 10 倍に稀釈し，その 1 白金耳をマッコンキ一寒天培地平板に接種した。平板培地を 37 。C で約 18 時間培養後，大腸菌類似の発育集落 3 ∼ 5 個を選び，常法に従って同定しため。大腸菌と同定された菌株ほ羊流動培地に培養。保存し，以後の実験に供試した。このようにして， 1970 年 12 月に 2SPF 豚農場において 4B 頭から 216 株，また 1971 年 1 月糞便 1 に2 9 ConventionaI 6) 耐性伝達試験先に報告した方法に従い，混合培養法で調べた3)。受容菌として用いた大腸菌 K-12 の派生株 ML-l410 (NA 成」， SPF 供試抗菌剤抗菌剤はアンピシリン P), (TC), テトラサイク @ >, (KM), コリスチ、キシン (SA) CABPC), (CL), およびチリ CC カナマイノンスルフモノ / (NA) ジクス酸績および ConventionaI 豚農場由来大腸菌における各抗菌剤に対する耐性の出現頻度ほ，表 l に示したとおりである。この表から明らかなように， SPF 豚農場由来大腸菌の半数以上はいずれの性試抗菌剤に対しても感受性を示したが， ConventionaI 豚農場由来のもので感ストレプクロラムフェニコール R プラス ; ッドについてほ調べられていない。豚農場において 50 頭からトマイシン (SM), 耐性の伝達が認すべて 37 。C で行った関係上，温度感受性 191 株の大腸菌をそれぞれ分離した。 4) 耐性 ) へ，められるものを R プラスミッドによる耐性と判定した。なお，本調査における耐性伝達試験はの8 受性を示したのほごく少数で，大部分の大腸菌ほいずれかの抗菌剤に対して耐性を示した。また，両養豚場由来大腸菌とも TC に対して耐種類を供試した。の感受性試験家畜の耐性菌研究会の定める方法に準拠し，性を示すものが最も高率に認められ，表@ SM, KM, SA などに対する耐性も比較的多く認められた。しかし， CL および NA に対し抗菌剤別にみた耐性および感受性大場菌の出現頻度てはすべての大腸菌が感受性を示した。耐性株数抗菌剤 AB SM SpF* P C 0 ( 一) 49 (22.7) 2 ( 0.9) C P 81 (37.5) 44 (20.4) TC KM C@ L S A 一) 20@ (@9.3) 0 ( NA 0 ( 一) : て / 表 2 および 3 ほ， SPF (膠) Conven. * SPF 豚農場 216 木ネ 8 ( 4.2) 135 (70.7) 28 (14.7) 185@ (96.9) *"Conventional Conventional 合わせによって 1 ∼ 4 剤耐性まで認められ，その耐性パターンは 13 種類におよんでいた。 93 (48.7) のうち， TC 一) 144 (75.4) 0 ( 一) 0 ( Ⅰ および豚農場由来耐性大腸菌における耐性パターンをそれぞれ示したものである。 SPF 豚農場由来耐性大腸菌では，各抗菌剤に対する耐性の組みやついで多いのが KM SM この学割耐性が最も多く，。 TC や SM 。 TC 。 KM の2 剤耐性であり， 4 剤耐性の大腸菌はごく少数みられたにすぎなかった。これに対し，ConventionaI 豚農場に由来した耐性大腸菌のそれはさらに複雑化していた。すなわち，各抗菌剤 ∼3 2 (1.0) 供試株数さらに gI の組み合わせで 1 ∼ 5 剤耐性，合計 17 種類の豚農場一 31 一 ( 9 ) かげ田な表のはか， SM ， SM ， SA 。。 KM 。 TC や SM 。 SA 。 TC ーンのうち， SM よびR プラスミッドの検出率* 剤少ごょ 02 32 Ⅰ 工Ⅰ 上うハんリり 1Ⅰ りⅠ とり 1l Ⅰハし， SM AA SS CMM A TKK S PCC C C A C M A A CTT T T S T K S S SM の 3 ∼ 4 剤耐性が大部分を占め， 5 剤耐性も少 R 。株数(膠)*" 株数(老) 耐性バターン耐性パターンが認められた。しかもこれらパタ豚農場由来大腸菌の耐性パターンお SPF 表2 SPF Swine, 8(2), 30-33 (1978) 日本SPF豚研究会Web ら菌ヒほヰ @ っのが汎にくの種ににのげのち率く同歯原菌よし添そさ迷おのとち々た対がが 121 94 Ⅰ 5 れ株まの含︶は性な対場豚すのれすなまがで曲のたと農いはすで関のるる対す株数、し@ 召アきめ含︶場ノ 32 スミ I-5 ウソ︵フン計 R 一性タ受パよン歯日本SPF豚研究会Web SPF Swine, 8(2), 30-33 (1978) 要 SPF 約および ConventionaI について，豚農場由来大腸菌数種の抗菌剤 (ABPC, SM, CP, TC, KM, CL, SA および NA) に対する感受性を調べ，また耐性菌については R プラスミッドの検出を行い，つぎの成績を得た。 1) SPF 豚農場由来 216 株小工13 株 (52%) は感受性を示した。これに対し， Conve 肛 tional 豚農場由来 191 株のうち感受性を示したのは 2 株 (1%) のみであった。 2) 耐性パターンをみると， SPF 豚農場からは学割耐性のものが多く検出されたのに対し， Conventional 豚農場からは多剤耐性菌が多く検出される傾向にあ 3) SPF および Conventional った。豚農場由来耐性菌のうち， R プラスミッドにるものほよそれぞれ 103 株中 25 株 (24%) および 189 株中 83 株 (43%0) であった。 l) 文献 S. T. :Cowan and Cowan, SteeI,s Manual for identification of medicaI ed. Cambridge University bacteria, Press. 2nd EngIand, (1974) 坂崎利一調 : 医学細菌同定の手びき，第 2 版，近代出版，東京(1974) 2) 家畜の耐性菌研究会: 家畜由来の細菌に対する抗生物質等の薬剤の最小発育阻止濃度測定法につ 90-92 (1976) Kashiwazaki, M., Namioka, S. and Terakad0 ， N. : Distributi0n0ftransferabIe dFu ㌻ esis ぬnce fac 。rs @ fecal EsC んバ 0% いて．日歓会誌，29, 3) で士再う。 from Quart. 4) Ⅰ九万口 healthy pigs. Nat. Inst. Anim. l2, 17 ∼22 (1972) 宮原強 : 千葉県 SPF 豚実用化システムの概要および実用化状況について．SPF 33-39 の Ⅰ Hlth Swine, 4, (1973) 波同氏郎 :SPF 検定法．SPF Swin ㏄ on the 2, 15 ∼ 18 (1971) 6) Report of Joint Committee Antibiotics in AnimaI rinary Medecine t 33 and use of Vete- Stationary 寺門誠致 : 抗生物質の飼料添加と耐性菌につい，．一 : He Malesty,s (1969) で Office, London, 7) Husbandry SPF SWne ， (1971) ( 11 )