製品コード GT500 GlycoTAG ® Reagent Kit 説明書 v201011 キットは GlycoTAG ® を用いて糖質をピリジルアミノ化（PA 化）するためのキットです。試料中の糖鎖の還元末端残基または単糖に 2- アミノピリジンを還元アミノ化反応で結合させ、蛍光誘導体（PA- 糖鎖または PA- 単糖）にします。（下図参照） PA- 糖鎖、 PA- 単糖は糖質分析用 HPLC カラム PALPAK ™シリーズを用いて高感度な HPLC 分析が行えます。 2-Aminopyridine CH2OH CH2OH O O O H 2N OH O CH2OH O AcOH OH OH NHAc N O OH シッフ化 NHAc O CH2OH OH CH=N OH NHAc Reducing Sugar O 還元 NHAc Schiﬀ Base CH2OH O (CH3)2NH•BH3 N OH O CH2OH OH + CH2-NH2 OH NHAc NHAc N PA-Sugar I．キットの内容本製品は、Lot. 025A より、キットの内容を変更いたしましたのでご注意ください。 Methanol および Toluene は、本製品には含まれておりませんので、別途ご用意ください。 1．2-Aminopyridine（ミニチューブ A に分注済） 600 mg 2．Borane-Dimethylamine Complex（ミニチューブ B に分注済） 120 mg 3．Acetic Acid 3.0 ml 4．Triethylamine 1.0 ml 5．Biantennary Sugar Chain 1 nmol/100 μl 6．PA-Biantennary Sugar Chain 50 pmol/50 μl 7．PA-Monosacchaide Standard （ PA-GlcNAc、PA-GalNAc、PA-Man、PA-Fuc、PA-Gal） 50 pmol each/50 μl A．Coupling Reagent 用ミニチューブ（試薬 1．入） 2本 B．Reduction Reagent 用ミニチューブ（試薬 2．入） 4本 C．Triethylamine-Methanol 4.0 ml D．Methanol 用試薬瓶 E．Toluene 用試薬瓶 II．キット以外に必要なもの Methanol Toluene 5 ml（21929-81、ナカライテスク） 6 ml（34130-21、ナカライテスク）タカラバイオ（株）http://www.takara-bio.co.jp/ 2 製品コード GT500 III．保存 − 20℃ ＊適切に保存し、受取り後 2 年を目途にご使用ください。 IV．使用方法 ● 試薬 A の調製およびセット 1 ）ミニチューブ A に Methanol 150 μl を加えて十分に攪拌し、溶解する。注 1：Methanol は蒸発しやすいので、分注等は手早く行ってください。 2 ）試薬 3．Acetic Acid 100 μl を加えて均一に攪拌する。調製後、試薬は約 475 μl になる。 3 ）装置付属の専用試薬瓶に入れて装置の試薬部 A にセットし、専用のフタをのせる。注 2：調製した試薬は− 20℃で保存してください。調製した試薬をミニチューブのまま保存する場合は、必ず付属の試薬瓶より取り出して密栓し、 − 20℃で保存してください。注 3：常温で試薬 A が凝固している場合は使用できません。 ● 試薬 B の調製（用時調製）およびセット 1 ）ミニチューブ B に試薬 3．Acetic Acid 300 μl を加えて均一に溶解する。 2 ）試薬 4．Triethylamine 45 μl を加え、均一に攪拌する。（若干の発熱と発煙を伴います。） 3 ）装置付属の専用試薬瓶に入れて装置の試薬部 B にセットし、専用のフタをのせる。注 4：調製後 24 時間以上を経過したものは使用しないでください。 ● 試薬 C、D、E のセット D．Methanol 用試薬瓶に Methanol（特級）を 4 ml 分注する。 E．Toluene 用試薬瓶に Toluene（特級）を 6 ml 分注する。試薬瓶 C、D、E のフタをはずして装置の試薬部 C、D、E にセットし、専用のフタをのせる。 V．コントロール実験試薬 5．Biantennay Sugar Chain 10 μl（100 pmol）を GlycoTAG ® 専用バイアルに入れ、乾燥後、装置にセットし、FILE 1（TaKaRa oligo）を用いて反応させる。バイアルに 100 μl の蒸留水を加えてサンプルを溶解し、HPLC にて分析する。試薬 6． PA-Biantennary Sugar Chain と比較して PA 化収率をチェックする。 VI．注意・このキットは 12 サンプル連続 PA 化反応が 2 回行えるようになっていますが、分けて使用された場合や開封後の保存状態により、24 サンプル反応できなくなることがありますのでご注意ください。・装置にセットされている試薬は密封されていませんので、長期間放置しておくと蒸発等の影響を受け、液量、組成が変化します。使用されないときは、必ず試薬瓶のフタをして密封状態で保存してください。・本製品は研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。・タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。タカラバイオ（株）http://www.takara-bio.co.jp/ 3 製品コード GT500 201011