28pmB114 1細胞 ダイ レク ト質量分析法 に よる細胞 内脂 質解析 ○水野 初 1,2,植 田 俊樹 1,津山 尚宏 1,伊達 沙智子 2,原 田 ( l 広島大院医歯薬 ,2理研 QBi C) 隆範 1,升 島 努 J,2 【目的】細胞現象 メカニズムを理解す るためには､その細胞 内で起 こる分子変化 を リアル タイ ムで追跡す ることが重要である｡我 々は ビデオ顕微鏡 に よる細胞 の 状態変化 の観察 と同時にその瞬間の細胞 内成分 を採取 し､そのまま質量分析 によ る分子 同定 ･ 検 出ができる 1細胞 ダイ レク トMSの開発 を行 ってきた｡本研究では､ シグナル伝達 な ど細胞現象 の発現 と密接 な関わ り合 いを持つ脂質分子 について､ 本方法 を用いた網羅的分析お よび細胞 内分布 について解析 した｡ 【 方法 】 ビデオ顕微鏡観察下で､分析対象 とす る細胞一つ を選択 し､細胞全体 ま た は 細 胞 内 特 定 部 位 を ､ マ イ ク ロサ ク シ ョン に よ りナ ノ ス プ レー チ ップ ( Ce l l o mi xt i p,HUMANI X) 内に トラップ し､イオ ン化溶媒 を加 え電圧 を印加 して 細胞成分 をスプ レー ･ イオ ン化 させ ､高分解能質量分析計 ( LTQOr bi t r a pXL, The mo r Fi s he rSc i e nt i f i c )にて検 出 ･同定 を行 った｡検 出モー ドは測定対象分子の物性 に合 わせ てポジテ ィブ ･ネガテ ィブ両方 を用いた｡得 られた ピー クは精密質量お よび MS/ MSによ り同定 した｡ さらに大量細胞 を用いた LCMS解析 も同時に行い､細 胞 内脂質分子の網羅的解析お よび同定 を行 った 【 結果 ･考察 】マ ス ト細胞モデル ( RBL2H3) を用 いた 1細胞脂質分析 の結果 ､ ポジテ ィブイオ ンモー ドではホスファチジル コ リンやェ タノールア ミン､スフィ ンゴ ミエ リンな どの リン脂質が検 出 された｡ またネガテ ィブイオ ンモー ドではホ スファチジルセ リン､イ ノシ トールや ホス フアチ ジン酸 な どが検 出 された｡ これ / MS解析 によ り､それぞれ に特徴的なフラグメン トピー クが確認 らの ピー クは MS できた｡現在､ これ らリン脂質 の細胞 内分布や ､細胞種 ごとの脂質プ ロファイル 解析 を進 めている｡ ｡
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