で困った時の逆相カラムガイド

C18（ODS）で困った時の逆相カラムガイド
が贈る
C18（ODS）
で困った時の
逆相カラムガイド
A3
S
For the Customer, and for Society.
It’s our Commitment.
S
ま
フィールドを拡げること・・
クオリティを高めること・・
お客様の信頼を得るため、
お客様の満足のため
C
島津ジーエルシーは常に変わり続けます。
一
F
この一冊も、日々の業務の中で頂いたお客様の声を元に作成しました。
“ もう少し分離をなんとかしたい ”、
“ 逆相モードで極性化合物の分析をしたい ”など・
・
・
M
お困りの際にご参照いただければ幸いです。
本紙掲載カラムはアメリカを拠点にグローバル展開している
Phenomenex社の製品です。
2
Synergi Fusion-RP
Synergi Fusion-RP（フュージョン）は、疎水基（C18）
と、極性基をもったカラムです（Fig.1）。
また、図のように極性基がシリカ表面でなくシリカから離れた位置に修飾されているのも大きな特長です。
Synergi Fusion-RP構造図(Fig.1)
C18
C18
C18
C18
極性基
C18カラムでは分離できない分析が可能に！
！
一般的なC18カラムでは分離できない分析がFusionを使用する事により可能となります。
Fusionは充てん剤の表面積が高く
（400m 2/g）、ユニークな固定相（Fig.1）を持つため、分析の幅が広がります。
OH
H2N
CH3
H
N
C10H15NO
CH3
C9H13NO
CH3
OH
2.Phenylpropanolamine
3.Pseudoephedrine
（塩酸フェニルプロパノールアミン）
（塩酸プソイドエファドリン）
抗ヒスタミン剤の分析(Fig.2)
1
2 3
Synergi Fusion
Columns : Synergi 4µ Fusion-RP
他社C18カラム
他社C16+極性基カラム
Dimensions : 150 x 4.6mm
Mobile Phase : 20mM Potassium Phosphate, pH2.5 / Methanol (70:30)
Flow Rate : 1.0mL/min
Detection : UV @ 210nm
Sample : 1. Phenylephrine（フェニレフリン）
2. Phenylpropanolamine（塩酸フェニルプロパノールアミン）
3. Pseudoephedrine（塩酸プソイドエフェドリン）
0
1
2
3
4
5
1
3
0
1
2
min
2
3
4
他社C18カラム
5
min
2&3
1
0
1
2
他社C16+極性基カラム
3
4
5
min
る
3
A3
Synergi Fusion-RP
混合サンプル（極性、疎水性）をバランスよく保持します！
！
一般的なC18カラムは、極性物質は保持が弱く、疎水性物質の保持は強くなります。
Fusionも基本的には同じですが、独特な固定相（Fig.1）を持つ為、一般的なC18カラムに比べ極性物質の保持
は強く、疎水性物質の保持は弱くなります（Fig.3）。
一般的なC18カラムとSynergi Fusion-RPの保持力の差
（Fig.3）
I
N
O
OH O
O
Columns : Synergi 4µ Fusion-RP
一般的なC18カラム
Dimensions : 150 x 4.6mm
Mobile Phase : 20mM Potassium Phosphate,
pH2.5 / Acetonitrile (75:25)
Flow Rate : 1.0mL/min
Detection : UV @ 210nm
Sample : 1. Maleic acid（マレイン酸）
2. Chlorpheniramine（クロルフェニラミン）
3. Triprolidine（トリプロリジン）
4. Diphenhydramine（ジフェンヒドラミン）
OH
1.Maleic acid
4. Diphenhydramine
（マレイン酸）
1
（ジフェンヒドラミン）
3
2
Synergi Fusion
4
2
4
6
8
10
12
min
一般的なC18カラム
1
3
2
0
14
4
2
4
6
8
10
12
14
min
LC/MSでブリードが低く高感度に分析できます！
！
FusionはFig.4のように移動相条件が水リッチな状態、有機溶媒リッチな状態どちらでもブリードが低くなります。
この事により、より高感度な分析が可能となります。
一般的なC18カラムとSynergi Fusion-RPのLC/MSブリード比較
（Fig.4）
x107
0.6
TIC: Total Ion Current
Columns : Synergi 4µ Fusion-RP
一般的なC18カラム
Dimensions : 150 x 4.6mm
Mobile Phase : A: 0.1% CH3COOH in Water
B: 0.1% CH3COOH in Methanol
Gradient Rate : 95:5 (A/B) linear to 5:95 over 8 min
hold for 5 min.
Flow Rate : 0.5 mL/min
Detection : Ion Source: ESI
Scan Rate: 13000 m/z/s
Scan Range: 50-1000
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
x106
0
4
1
2
3
4
5
6
7
8
9
min
Synergi Hydro-RP
Synergi Hydro-RP（ハイドロ）は、疎水基（C18）
と極性基をもったカラムです。極性基はシリカ表面に修飾され
ています（Fig.5）。
持
Synergi Hydro-RP構造図(Fig.5)
極性基
n
min
一般的なC18カラムではできない分析条件（有機酸の分析）
！
！
逆相モードで有機酸を分析する場合、移動相条件を100%水系にする必要があります（Fig.6）。
一般的なC18カラムで水100%を使用した場合は再現性がとれなくなります（Fig.7）。
ム
min
Synergi Hydro-RPによる有機酸の分析 (Fig.6)
。
Column
Dimensions
Order NO.
Mobile Phase
Flow Rate
Temperature
Detection
Sample
: Synergi 4µ Hydro-RP
: 250 x 4.6mm
: 00G-4375-E0
: 20mM Potassium Phosphate, pH2.9
: 0.7mL/min
: 22ºC
: UV @ 220nm
: 1. Oxalic acid（シュウ酸）
2. Tartaric acid（酒石酸）
3. Glycolic acid（グリコール酸）
4. Formic acid（ギ酸）
5. Pyruvic acid（ピルビン酸）
6. Malonic acid（マロン酸）
7. Acetic acid（酢酸）
8. Maleic acid（マレイン酸）
9. Citric acid（クエン酸）
n
5
A3
Synergi Hydro-RP
一般的なC18カラムではできない分析条件！
！
100%水に対する安定性の比較 (Fig.7)
一般的なC18カラム
Synergi Hydro-RP
Day 1
Day 1
0
0
2
4
6
8
10
12
2
4
6
8
10
12
Day 2
Day 2
0
0
2
4
6
8
10
12
14
2
min
4
6
8
10
12
Mobile phase : 20mM Potassium phosphate
Sample : Nucleotides
不純物からの分離！
！
目的物質（1.Atenolol）の極性が高く、不純物ピークも極性の場合、一般的なC18カラムで分析すると、不純物
ピークに目的物質のピークが被ってしまいます。
Synergi Hydro-RPを使用すれば極性基により、極性物質を保持できるので不純物ピークから目的物質を分離する
ことが可能です（Fig.8）。
OH
O
O
H2N
H
N
CH3
CH3
1.Atenolol
（アテノロール）
Synergi Hydro-RPによる極性物質の保持 (Fig.8)
Synergi Hydro-RP
Dimensions : 150 x 4.6mm
Mobile Phase : A=10mM Triethylammonium formate pH 6.0
B=Acetonitrile with 10mM
Triethylammonium formate
Gradient : A/B (85:15) to A/B (35:65) in 15 minutes
Flow Rate : 1.5mL/min
Temperature : Ambient
Detection : UV @ 230nm
Injection : 1µL of beta-blockers mix each at 0.8µg/µL
Sample : 1. Atenolol（アテノロール）
2. Pindolol（ピンドロール）
3. Nadolol（ナドロール）
4. Acebutolol（アセブトロール）
5. Metoprolol（メトプロロール）
6. Labetalol（ラベタロール）
6
一般的なC18カラム
Synergi Max-RP
Synergi Max-RP（マックス）は、C12をシリカに修飾しています。C18よりも高密度にシリカに修飾できるため
（Fig.9）、測定物質とシリカ表面との相互作用が少なくなります（Fig.10）。その為、塩基性化合物のテーリングの
抑制、立体的構造の選択性などが期待されます。
Synergi Max-RP構造図(Fig.9)
C12
Synergi Max-RPと測定物質の反応イメージ(Fig.10)
C12
C12
C12
C12
C12
C12
塩基性化合物のテーリングを抑える！
！
一般的なC18カラムで塩基性物質を測定すると、シリカ表面の残存シラノールと反応しテーリング現象を起こす
場合があります（Fig.11）。Synergi Max-RPは、測定物質とシリカ表面との反応は起きにくいので、塩基性物質
のテーリングが抑えられます（Fig.11）。
N
H
O
Synergi Max-PRによる塩基性物質の分析 (Fig.11)
OH
Synergi Max
4.Propranolol
（プロプラノロール）
一般的なC18カラム
Dimensions : 50 x 4.6mm
Mobile Phase : A= Water with 0.1% Formic acid
B= Acetonitrile with 0.1% Formic acid
Gradient : A/B (95:5) to 100%
B in 5min
Flow Rate : 1.5mL/min
Detection :UV @ 254nm
Injection : 5µL
Temperature : 30°C
Sample : 1. Thiourea (0.25µg),（チオ尿素）
2. Codeine (1µg),（コデイン）
3. Chlorpheniramine (2µg),（クロルフェニラミン）
4. Propranolol (6µg),（プロプラノロール）
5. Desipramine (0.5µg),（デシプラミン）
6. Ibuprofen (6µg),（イブプロフェン）
7
A3
Synergi Max-RP
ギ酸、酢酸、TFAを移動相に使用する！
！
Synergi Max-RPは、LC/MSで使用される、ギ酸、酢酸、TFAに対応できます（Fig.12）。
ギ酸、酢酸、TFA を移動相に使用する(Fig.12)
Column
Dimensions
Order No.
Mobile Phase
0.1% Formic acid
Gradient
Flow Rate
Detection
Injection
Temperature
Sample
0.1% Acetic acid
0.1% TFA
: Synergi 4µ Max-RP
: 50 x 4.6mm
: 00B-4337-E0
: A= Water with 0.1% TFA,
Formic acid, or Acetic acid
B = Acetonitrile with 0.1% TFA,
Formic acid, or Acetic acid
: A/B (95:5) to 100% B in 5min
: 1.5mL/min
: UV @ 254 nm
: 5µL
: 30°C
: 1. Thiourea (0.25µg),（チオ尿素）
2. Codeine (1µg),（コデイン）
3. Chlorpheniramine (2µg),（クロルフェニラミン）
4. Propranolol (6µg),（プロプラノロール）
5. Desipramine (0.5µg),（デシプラミン）
6. Ibuprofen (6µg),（イブプロフェン）
わずかな構造の差で分離する！
！
Synergi Max-RPは、官能基（C12）が高密度に修飾されている為、立体的な構造の差を見分けることができます
（Fig.13）。
HO
O
CH2OH
O
CH2OH
CH3
OH
CH3
OH
CH3
CH3
1.8
1.7
1.6
1.5
1.4
1.3
(×1,000,000)
402.15 (1.00)
361.10 (1.00)
343.05 (1.00)
325.00 (1.00)
434.10 (1.00)
393.10 (1.00)
373.10 (1.00)
355.05 (1.00)
476.10 (1.00)
435.10 (1.00)
415.10 (1.00)
494.10 (1.00)
453.10 (1.00)
413.10 (1.00)
446.15 (1.00)
405.10 (1.00)
q
1: Prednisolone
2: Dexamethasone
3: Betamethasone
4: Triamcinolone acetonide
5: Fluocinolone acetonide
6: Hydrocortisone acetate
w
e
1.2
y
1.1
1.0
0.9
r
0.8
0.7
0.6
t
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0
0.0
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
6.0
7.0
8.0
9.0
10.0
※島津アプリケーションニュースNo.C43Aより。
8
11.0
12.0
13.0
14.0
15.0
16.0
17.0
18.0
19.0
20.0
F
O
Dexamethasone
C22H29FO5
Exact Mass: 392.20
Mol. Wt.: 392.46
（デキザメタゾン）
Synergi Max-RPによる6種のステロイド系
抗炎症薬の選択イオン検出（SIM）(Fig.13)
CH3
CH3
F
O
HO
Betamethasone
C22H29FO5
Exact Mass: 392.20
Mol. Wt.: 392.46
（べタメタゾン）
Column : Phenomenex Synergi MAX-RP
(2.0 mm I.D. × 150 mmL.)
Mobile phase : 0.1% formic acid-water / acetonitrile (70:30)
Flow rate : 0.3 mL/min
Column oven temperature : 40 ˚C
Injection volume : 2 µL
Probe voltage :+4.5 kV (APCI-Positive mode)
Nebulizer gas flow : 2.5 L/min
Drying gas pressure : 0.04 MPa
Probe temperature : 350 ˚C
CDL temperature : 200 ˚C
Block heater temperature : 200 ˚C
CDL & Q-array voltage : using default values
Interval : 0.8 sec / 16 chs
SIM : m/z 402.1,361.1,343.1,325.1 for prednisolone
m/z434.1, 393.1, 373.1, 355.1 for betamethasone & dexamethasone
m/z 476.1, 435.1, 415.1 for triamcinolone acetonide
m/z 494.1, 453.1, 413.1 for fluocinolone acetonide
m/z 446.1, 405.1 for hydrocortisone acetate
ン）
Synergi Polar-RP
Synergi Polar-RP（ポーラー）は、芳香族を極性基（エーテル）を含め修飾し、シリカ表面は極性エンドキャッピング
されています（Fig.14）。
Synergi Polar-RP構造図(Fig.14)
極性基
フェニルエーテルの極性で分離する！
！
一般的なC8、C18カラムでは基本的に疎水性の差で分離します。
Fig.6のような分析の場合、極性の差も見分ける事ができないと未分離となります。
Polarは極性の差を見分ける事ができます（Fig.15）。
HO
O
O
H
H
N
H
す
NH2
H
S
N
NH2
CH3
CH3
O
COOH
COOH
2.Cefadroxil
3.Cephalexin
（セファドロキシル）
（セファレキシン）
Synergi Polar-RPによる極性選択性の増大(Fig.15)
1
0)
sone
S
N
H
N
O
H
Columns :
Luna®
5µm C8(2) 150x4.6mm
Synergi™ 4µm Polar-RP®150x4.6mm
Mobile phase : 65:35 10mM Ammonium acetate pH 3.5:Methanol
Flow rate : 1 mL/min
Components : 1. Cephradine（セファラジン）
2. Cefadroxil（セファドロキシル）
3. Cephalexin（セファレキシン）
4. Cefaclor（セファクロル）
5. Cefazolin（セファゾリン）
160
140
120
100
80
60
40
20
0
4
Synergi Polar-RP
3
2
0
1
2
3
5
4
5
6
min
2-4
1
Luna C8(2)
175
5
150
125
100
75
50
25
0
0
1
2
3
4
5
6
min
9
A3
Synergi Polar-RP
フェニルエーテルの極性で分離するpart2！
！
Synergi Polar-RPによる極性選択性の増大part2(Fig.16)
OH
OH
H
N
HO
Synergi Polar
H
N
O
CH3
CH3
HN
OH
1. Metaproterenol
2.Pindolol
（メタプロテレノール）
（ピンドロール）
他社C18カラム
OH
H
N
O
H
H3CO
CH3
CH3
3.Metoprolol
他社C18カラム
（メトプロロール）
Dimensions : 150 x 4.6mm
Mobile Phase : 20mM Potassium phosphate
pH 3 /Methanol (50:50)
Flow Rate : 1.0mL/min
Detection : UV @ 230nm
Injection : 2µL
Temperature : 22°C
Sample : 1. Metaproterenol (0.4µg),（メタプロテレノール）
2. Pindolol (0.6µg),（ピンドロール）
3. Metoprolol (0.15µg), （メトプロロール）
4. Alprenolol (0.3µg),（アルプレノロール）
5. Propranolol (0.04µg),（プロプラノール）
6. Ethylparaben (0.4µg),（エチルパラベン）
他社C18カラム
100%リン酸バッファーでの酸性化合物の分離！
！
ギ酸などの有機酸はアルキル基系の固定相ではほとんど保持されません。しかし、水系の移動相を使用する事に
より保持できます。さらに、微妙な極性の差を見分ける事により下記の分析は成立します（Fig.17）。
Synergi Polar-RPによる100%リン酸バッファーでの酸性化合物の分離(Fig.17)
H
O
O
C
C
OH
Synergi Polar
OH
1. Formic acid
2. Acetic acid
（ギ酸）
（酢酸）
Dimensions : 150 x 4.6mm
Mobile Phase : 20mM Potassium phosphate pH2.5/
Methanol (97:3)
Flow Rate : 1.0mL/min
Detection : UV @ 220nm
Temperature : 25°C
Sample : 1. Formic acid（ギ酸）
2. Acetic acid（酢酸）
10
他社C18カラム
他社C16+極性基カラム
Luna PFP
（2）
Luna PFP（2）は、ペンタフルオロフェニルプロピルを官能基として持っています（Fig.18）。
この官能基は微妙な電気的な差を見分けることができるので、異性体を分離できる可能性があります（Fig.19）。
また、ハロゲン化合物にも特異的な反応を示します（Fig.20）。
Luna PFP
（2）の構造図(Fig.18)
F
F
F
F
F
異性体（o-,m-,p-）を分離する！
！
一般的なC18カラムでは異性体を分離するのは困難な場合があります（Fig.19）。
LunaPFP
（2）
によるo-,m-,pの分離 (Fig.19)
Positional Isomers of Methylacetophenone on Luna 3 µm PFP(2)
Column
Dimension
Part No.
Mobile Phase
Flow Rate
Temperature
Detection
Sample
Positional Isomers of Methylacetophenone on Luna 3 µm C18(2)
App ID 16298
: 16298Luna 3 µm PFP(2)
: 150 x 4.6 mm
: 00F-4447-E0
: Water/ Methanol (50:50)
: 1 mL/min
: 22 °C
: UV @ 254 nm
: 1. o-Methylacetophenone
（o-メチルアセトフェノン）
2. p-Methylacetophenone
（p-メチルアセトフェノン）
3. m-Methylacetophenone
（m-メチルアセトフェノン）
Column
Dimension
Part No.
Mobile Phase
Flow Rate
Temperature
Detection
Column
2
3
1
: Luna 3 µm C18(2)
: 150 x 4.6 mm
: 00F-4251-E0
: Water/ Methanol (50:50)
: 1 mL/min
: 22 °C
: UV @ 254 nm
: 1. p-Methylacetophenone
（p-メチルアセトフェノン）
2. o-Methylacetophenone
（o-メチルアセトフェノン）
3. m-Methylacetophenone
（m-メチルアセトフェノン）
App ID 16299
1
3
2
事に
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
0
min
2
4
6
8
10
12
14
16
18
min
異性体（3,4-,3,5-、Dichloro-,Dibromo-）を分離する！
！
LunaPFP
（2）
によるハロゲン選択性 (Fig.20)
olar
ラム
ラム
: Luna 3 µm PFP(2)
: 150 x 4.6 mm
: 00F-4447-E0
: A: 0.1 % Formic acid in Water
B: 0.1 % Formic acid in Acetonitrile
Gradient
: A/B (60:40) to (50:50) in 10 min
Flow Rate
: 1 mL/min
Temperature : 22 °C
Detection
: UV @ 254 nm
Sample
: 1.2,3-Dimethylphenol 6.2,5-Dichlorophenol
2.2,5-Dimethylphenol 7.2,6-Dichlorophenol
3.2,6-Dimethylphenol 8.3,4-Dichlorophenol
4.3,4-Dimethylphenol 9.3,5-Dichlorophenol
5.3,5-Dimethylphenol 10.2,4-Dibromophenol
Luna PFP
（2）
Column
Dimension
Part No.
Mobile Phase
5
1
一般的なC18カラム
16297
5
4
3
2
1
9
4
23
9 & 10
8
6
6
7
8
7
10
0
2
4
6
8
10
12
14 min
0
2
4
6
8
10
12
14 min
11
A3
Luna Phenyl-Hexyl
J
π-π相互作用および疎水性相互作用を利用した分析
疎水性相互作用とπ-π相互作用を利用して分離するので、芳香族化合物の選択性が
向上します。
移動相溶媒がアセトニトリルの場合、
メタノールの場合とで選択性が変化します。
メタノールを移動相に使用することでπ-π相互作用を利用しやすくなります。
固
選
ペ
π-π相互作用により芳香族化合物の選択性が向上！
！
C18
β：Luna® 5 µm Phenyl-Hexyl, 150x4.6mm
Luna 5 µm C8(2), 150x4.6mm
Luna 5 µm C18(2), 150x4.6mm
移動相
: 50:15:35 Methanol:Acetonitrile:
20mM Ammonium Formate pH 3.5
流速
: 1.0 mL/min
分析対象物 : 1. Rhodamine 123
2. Rhodamine B Base
3. Rhodamine 6G
カラム
C8
酸
Phenyl-Hexyl
メ
Ju
Rhodamine123
Luna Phenyl-Hexylを使用することで芳香族化合物の選択性が向上します。
分離度が大きくなるのでカラムサイズを短くしても分離が維持されたまま高速化が図れます。
π-π相互作用、疎水性相互作用の働きで分離を改善!！
1+2
ODSカラム
3
5
6
溶出順序が
逆転します
5.Indomethacin
1
2
6.Ibupurofe
: ODSカラム150×4.6 5μ
Luna™ Phenyl-Hexyl150×4.6 5μ
移動相
: 50:50 Acetonitrile:
20mM Potassium phosphate pH 2.5
流速
: 1.0 mL/min
分析対象物 : 酸性芳香族化合物
1. Indoprofen
2. Ethyl paraben
3. Naproxen
4. Diflunisal
5. Indomethacin
6. Ibuprofen
R
Luna Phenyl-Hexyl
6
4
5
分離が改善
12
ペ
カラム
4
3
高
脱
1.Indoprofen
2.Ethyl paraben
ODSでは分離が難しい化合物どうしの分離改善や、化合物によっては溶出順序が入れ替わるので、
タ
固定相を変えてドラスティックな変化を出したい場合にも有効です。
P
Jupiter Proteo 90Å
高効率カラムでペプチドマッピングや類似ペプチドの分析
固定相にC12を採用することで結合密度を高めてあり、疎水性相互作用（ODSとほぼ同等）に加えて立体的な
選択性も加わります。類似ペプチドの分析や、ペプチドマッピングに適したカラムです。
β-ラクトグロブリンのトリプシン消化物
App ID 14394
ペプチドマッピング例1
（Fig.21）
Columns
Dimensions
Part No.
Mobile Phase
App ID 14395
Gradient
Flow Rate
Temperature
Detection
Sample
酸化型β-ラクトグロブリンのトリプシン消化物
:
:
:
:
Jupiter 4 µm Proteo 90 Å
250 x 4.6 mm
00G-4396-E0
A) 0.012 % TFA in Water
B) 0.01 % TFA in Acetonitrile
: A/B (95:5) for 5 min, then to A/B
(60:40) in 55 minutes
: 1 mL/min
: 22°C
: UV @ 210 nm
: Top Chromatogram – β-Lactoglobulin
tryptic digest
Bottom Chromatogram – Oxidized
β-Lactoglobulin tryptic digest
メチオニンの持つ硫黄の酸化が原因でタンパク質自信の酸化はごく一般的に起こります。
Jupiter Proteoを使用しペプチドマッピングを行うことで酸化ペプチドを保持時間で確認できます。
高効率カラムが僅かな差を見分けます！
RNaseのトリプシン消化物
App ID 14392
ペプチドマッピング例2
（Fig.22）
Columns
Dimensions
Part No.
Mobile Phase
脱アミド化RNaseのトリプシン消化物
App ID 14393
Gradient
Flow Rate
Temperature
Detection
Sample
:
:
:
:
Jupiter 4 µm Proteo 90 Å
250 x 4.6 mm
00G-4396-E0
A) 0.012 % TFA in Water
B) 0.01 % TFA in Acetonitrile
: A/B (95:5) for 5 min, then to A/B
(60:40) in 55 min
: 1 mL/min
: 22 °C
: UV @ 210 nm
: Top Chromatogram – RNase tryptic
digestBottom Chromatogram –
Deamidated RNase tryptic digest
タンパク質中でのアスパラギンからアスパラギン酸、グルタミンからグルタミン酸といった変化がありますが、こういった僅かな差もJupiter
Proteoで検出できます。
13
A3
Jupiter Proteo 90Å
J
類似ペプチドの分離（Fig.23）
Jupiter Proteoは分子量10kDa以下のペプチドであれば僅かアミノ酸1∼2残基違いのものの分離が可能です。
5種類の類似ペプチドの分析例を以下に記します。
他社カラムと比較して分離の改善がなされています。
分
固
ま
Jupiter® 4 µm Proteo 90 Å
A社ODSカラム
B社ODSカラム
C社ODSカラム
App ID 14427
5
1
App ID 14428
4
App ID 14429
3
2
App ID 14426
疎水性度が非常に似かよったペプチドの分離
J
Columns : Jupiter 4 µm Proteo 90 Å
A社ODSカラム
B社ODSカラム
類
C社ODSカラム
Dimensions : 250 x 4.6 mm
Part No. : 00G-4167-E0
Mobile Phase : A) 0.1 % TFA in Water
B) 0.085 % TFA in Acetonitrile
Gradient : A/B (95:5) to A/B (55:45) in
20 minutes
Flow Rate : 1 mL/min
Temperature : 22 °C
Detection : UV @ 214 nm
Sample : 1. NH2-Arg-Gly-Gly-Ala-Gly-Gly-LeuGly-Leu-Gly-Lys-Amide
2. Ac-Arg-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Leu-GlyLeu-Gly-Lys-Amide
3. Ac-Arg-Gly-Ala-Gly-Gly-Gly-Leu-GlyLeu-Gly-Lys-Amide
4. Ac-Arg-Gly-Val-Gly-Gly-Gly-Leu-GlyLeu-Gly-Lys-Amide
5. Ac-Arg-Gly-Val-Val-Gly-Gly-Leu-GlyLeu-Gly-Lys-Amide
化
インスリンとインスリン劣化体の分離（Fig.24）
劣化物との分離（インスリン）
mAU
J
App ID 14914
400
15 min @ 60 ºC
200
0
2
4
6
8
10 min
App ID 14915
mAU
30 min @ 60 ºC
200
0
2
4
6
8
高
Columns
Dimensions
Part No.
Mobile Phase
Gradient
Flow Rate
Detection
Sample
: Jupiter 4 µm Proteo 90 Å
: 250 x 4.6 mm
: 00G-4396-E0
: A) 0.1 % TFA in Water
B) 0.085 % TFA in 95:5 Acetonitrile/Water
: A/B (80:20) to A/B (20:80) in 15 minutes
: 1 mL/min
: UV @ 220 nm
: Human Insulin
劣化の過程をモニタリング！
10 min
14917
App ID 14917
mAU
60 min @ 60 ºC
200
0
2
14
4
6
8
10 min
分
溶
Ju
Jupiter 300シリーズ
タンパク質分析用逆相HPLCカラム
分子量10kDa以上のタンパク質分析のために開発された細孔径300Åの逆相カラムです。
固定相はC4、C5、C18があり、目的タンパク質の疎水性度に合わせて固定相を選べます。
また生体試料中の微量タンパク測定向けのキャピラリーカラムもあります。
Jupiter 300ÅC18の分析例
（Fig.25）
類似タンパク質の分離
App ID 8715
Columns
Dimensions
Part No.
Mobile Phase
0
2
4
6
8
10
12
14 min
:
:
:
:
Gradient :
Flow Rate
Temperature
Detection
Sample
:
:
:
:
Columns
Dimensions
Part No.
Mobile Phase
:
:
:
:
Jupiter 300 5 µm C18 300 Å
250 x 4.6 mm
00G-4053-E0
A) 0.1 % TFA in Water
B) 0.1 % TFA in Acetonitrile
A/B (75:25) to A/B (45:55) in
15 min (2 % B/min)
1 mL/min
Ambien
UV @ 220 nm
1. Equine Cytochrome c
2. Bovine Cytochrome c
3. Canine Cytochrome c
化学的および構造的に似かよったタンパク質の分離を改善します。
Jupiter 300ÅC4の分析例
（Fig.26）
高分子タンパク質の分離
3
1
Gradient :
2
App ID 14761
4
Flow Rate
Temperature
Detection
Injection Volume
Sample
:
:
:
:
:
Jupiter 300 5 µm C4 300 Å
150 x 4.6 mm
00F-4167-E0
A) 0.1 % TFA in Water
B) 0.08 % TFA in Acetonitrile
A/B: (95:5) to A/B: (20:80) in
20 minutes
1 mL/min
22 ˚C
UV @ 280 nm
25 µL
1. Bovine Serum Albumin
2. Glutamic Dehydrogenase
3. β-Galactosidase
4. Ovalbumin
分子量が大きく、吸着性の高いタンパク質を分析する際にC18を使用するとピークがブロードになったり、
溶出してこないなどの問題が起こります。
Jupiter 300ÅC4を使用することで高分子・高吸着性タンパクの分離が可能になります。
15
A3
Clarity Oligo-RP & Clarity Oligo-WAX
G
オリゴヌクレオチド分析用カラム
Clarityはオリゴヌクレオチドの分析、分取・精製を目的に開発されたHPLCカラムです。
DNA、RNA、ラベル化オリゴやチオリン酸塩などあらゆるオリゴに対応します。
Clarity Oligo-RP
（Fig.27）
充
が
ま
お
・ Twinテクノロジー基材を用いることでpH1∼12の範囲で使用可能
・ 60残基までのオリゴに対応
1残基違いのオリゴを分離精製！
！
mAU
20 nt
Columns
Dimensions
Part No.
Mobile Phase
21 nt
50
App ID 15935
40
30
Gradient
20
Flow Rate
Detection
Sample
10
0
0
5
10
15
20
25
30
35
40
min
: Clarity 3 µm Oligo-RP C18
: 50 x 4.6 mm
: 00B-4441-E0
: A: 10 mM TPAC
B: Methanol
: A/B (75:25) to A/B (55:45) in
80 min (50 min run time)
: 1 mL/min
: UV @ 260 nm
: 1. 20 nt RNA with sequence
CUGUAAUCUCUUGUCUATT (2.5µg)
2. 21 nt RNA with sequence
UCUGUAAUCUCUUGUCUATT (2.5µg)
幅
p
Clarity Oligo-RP 3μ
（Fig.28）
・ 3μの粒子を採用することでさらにカラム効率が向上
ラベル化オリゴもGC含量の差で分離できます！
！
Columns
Dimensions
Part No.
Mobile Phase
3
mAU
300
2
1
App ID 15990
200
Gradient
Flow Rate
Detection
Temperature
Sample
100
0
0
10
20 min
: Clarity 3 µm Oligo-RP
: 50 x 4.6 mm ID
: 00B-4441-E0
: A: 50 mM TEAA / 5 % Acetonitrile
B: Methanol
: A/B (90:10) to A/B (60:40) in 20 min
: 1mL/min
: UV @ 260 nm
: ambient
: 1. FAM-DNA (25 nt) GC% 72 %
2. FAM Labeled DNA (25 nt) GC% 56 %
3. FAM Labeled DNA (25 nt) GC% 20 %
酸
Clarity Oligo-WAX
（Fig.29）
・細孔径が360Åと大きく高分子オリゴに対応
目的オリゴを夾雑物（未反応物質、N-1 impuritiesなど）
から分離精製！
！
Columns
Dimensions
Part No.
Mobile Phase
20 nt
mAU
140
120
App ID 16395
100
80
60
40
20
0
0
16
10
20
min
Gradient
Flow Rate
Detection
Temperature
Sample
: Clarity 10 µm Oligo-WAX
: 150 x 4.6 mm ID
: 00F-4451-E0
: A: 20 mM Tris pH 8.0 / 10 % Acetonitrile
B: 20 mM Tris pH 8.0 / 10 % Acetonitrile /
1.2 M NaCl
: 100 % A to 100 % B in 20 min
: 2.2 mL/min
: UV-Vis Abs. - Diode Array 260 nm
: ambient
: 1. Desalted DNA 20 nt
イ
Gemini-NX
不活性度およびpH耐久性を考慮したODSカラム
充填基材であるシリカの表面にSi-CH2-CH2-Si（エチレン架橋）を導入したことにより、アルカリ条件下での耐久性
が格段に上がりました。また、基材表面の不活性度が向上し、アミン類の吸着を抑制しテーリングを防ぎます。
また、オクタデシル基の結合様式が通常のカラムと異なり
（2本足、3本足で結合）酸性側での耐久性が向上して
おります。
アルカリ条件下における
シリカの溶出を防ぎます
Si
OH -
幅広いpH（1∼12）で使用できます。
OH -
O
Si
O
CH 2
CH 2
Multi Functionalにより酸性側
での耐久性が向上しております
Si
H+
O
OH -
Si
O
H+
O
H+
エチレン架橋
O
O
120%
100%
pH10.5における耐久性試験
Percent Efficiency
80%
Gemini-NX
60%
Column A
Column B
Column C
Column D
Column E
Column F
Gemini-NX
40%
20%
0%
0
100
200
300
400
500
600
Time of exposure (hour)
アルカリ条件下におけるカラムライフが格段に向上しています！
！
酸性条件下における塩基性化合物分析（Fig.30）
/
イオン化した状態の塩基性化合物もほとんど吸着することなく、シャープなピークを得られます。
17
A3
Gemini-NX
中性条件におけるアミトリプチリンの分析（Fig.31）
アミトリプチリンに対して良好なピーク形状を示します。
アルカリ条件下におけるβ-ブロッカーの分析（Fig.32）
Gemini®-NX 5µm C18
A社カラム 5µm C18
9
2
9
2
6
8
}
4
5
}
0
10
7
10
20
3
min
1
H2N
HO
8
10
20
min
Sample : 1.Bisoprolol Contaminant
2.Sotalol
3.Atenolol
4.Labetolol (Diastereoisomeric Pair)
5.Nadolol (Diastereoisomeric Pair)
6.Pindolol
7.Metoprolol
8.Bisoprolol
9.Propranolol
10.Alprenalol
HO
H3C
H
N
CH3
4.Labetalol
N
H
O
OH
HO
OH
5.Nadolol
アルカリ条件下で揮発性緩衝液を使用した場合にも良好なピーク形状を示します。
18
10
7
Conditions for all columns : 150 x 4.6 mm
Dimensions : A: 10 mM Ammonium Bicarbonate pH 10.5
Mobile Phase B: Acetonitrile
Gradient : A/B (85:15) to (70:30) in 15 min to (50:50)
in 5 min, Hold for 5 min
Flow Rate : 1.5 mL/min
Temperature : Ambient
Detection : UV @ 230 nm
O
6
4,5
0
App ID 16642
1
App ID 16641
3
CH3
CH3
SecurityGuard
フェノメネックスはセキュリティガードを通して、みなさまに
“使いやすさ”
と
“ほぼ完全なカラムの保護手段”
をご提供
いたします。この画期的なカラムガードシステムはかつてなかったメリットをお届けいたします。
特長
セキュリティガードのメリット
ほぼすべてのカラムに取り付けできます。
・ほぼすべての HPLCカラムに取り付けることができます。
・一般的な充てん剤であれば相当数のラインアップをご用意していますので、
事実上ほぼすべてのアプリケーションに対応できます。
クロマトグラムへの影響がありません。
・わずか4㎜長のカートリッジで、分離能、
リテンションタイム、背圧にほぼ影響無く高価な
分析カラムを保護することができます。
・手締め式ジョイントで耐圧は約350㎏／㎠です。
汚れが見え、換え時がわかります。
・カートリッジ式の充てん剤を直接見られるため、正確にカートリッジの交換時期を知ることが出来ます。
ホルダーは3種類です。
・単価の低いカートリッジを交換するだけで、
高価な分析カラムを汚れから守ることが出来ます。
・同じホルダーの中にカートリッジを2個取り付けることにより2倍の保護効果が得られます。
サンプル接触面は不活性です。
・バイオコンバチブルの流路であるため不活性であり、
一般分析だけではなく、
バイオクロマトグラフィや金属不純物を嫌う分析にもご利用いただけます。
インジェクタより
バイオコンバチブル流路です。
レンチは使わず手締めしてください。
分析カラム
アドバンテージ1 豊富な固定相をもち、
またクロマトグラムへの影響がありません。
セキュリティガードはHPLCカラムに使用されるほぼすべての固定相をラインアップにもち、それぞれクロマトグラムに影響を及ぼすことなく、
ご利用いただけます。下記の比較表をご覧ください。比較表はセキュリティガードC18カートリッジを装着した場合と、装着しない場合の両方で
実施しています。分析カラムは有名ブランドを用い、分析条件は統一して行いました。
クロマトグラムへの影響はありません
SecurityGuard なし
SecurityGuard なし
SecurityGuard あり
SecurityGuard あり
他社カラム 1 ®
他社カラム 2 ®
アドバンテージ2 世界共通のフィッティング
セキュリティガードは世界の有名ブランドのHPLCカラム
ほぼすべてに取付け可能です。
アドバンテージ3 いつ交換すればいいのだろう？
こんな煩わしさから開放されます。
目で確かめることにより、
カートリッジの交換時期が容易にわかります。
他社のガードカートリッジにはこのような便利な機能はありません。
セキュリティガードはほぼすべてのカラムに接続することが
可能です。
斬新な規格によりホルダーが適当な深さに落ち着くように調節
されます。ほぼすべてのエンドフィッティングに適用します。
使用後
使用前
4mmカートリッジ
※本カタログ掲載の分析カラムには、全て対応できます。
※カートリッジ（充てん剤）のラインナップは別紙参照ください。
19
C18（ODS）で困った時の逆相カラムガイド
販売店
東日本営業課
〒111- 0053 東京都台東区浅草橋 5 - 20 - 8 CS タワー 5 F
TEL : 03 -5835 - 0120
FAX : 03 -5835 - 0124
西日本営業課
〒 533- 0033 大阪市東淀川区東中島 1 - 18 - 22 新大阪丸ビル別館 9 F
TEL : 06 -6328 -2255
FAX : 06 -6328 -2277
https://solutions.shimadzu.co.jp/glc
[email protected]
ご担当者名
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