JP 2005-528373 A 2005.9.22
(57)【 要 約 】
本発明は、ワクチン抗原に対する免疫応答を増進するため、免疫プロトコルにおいて、Ｆ
ｌｔ３リガンド（Ｆｌｔ３−Ｌ）を用いる方法に関する。態様には、被験者をワクチンで
免疫する前にＦｌｔ３リガンドを投与することが含まれ、ここでワクチンは、１以上のア
ジュバント中に配合された、少なくとも１つの抗原を含んでなる。Ｆｌｔ３リガンド免疫
プロトコルを用いて、疾患および感染を治療し、そして防止する方法もまた提供する。抗
原およびアジュバントのｉｎ ｖｉｖｏ評価にＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルを用いる
方法もまた提供する。
(2)
JP 2005-528373 A 2005.9.22
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者を免疫する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法。
【請求項２】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワ
クチン投与に続いて投与する、請求項１の方法。
10
【請求項３】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投
与に続いて投与する、請求項１の方法。
【請求項４】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８
および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよ
びガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリ
ーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパ
ク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ
配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１の方法。
20
【請求項５】
アジュバントが、ＡＤＪＵＭＥＲ
T M
（ポリホスファゼン）；リン酸アルミニウムゲル；
藻類グルカン類；アルガミュリン（ａｌｇａｍｍｕｌｉｎ）；水酸化アルミニウムゲル（
ミョウバン）；高タンパク質吸着性（ａｄｓｏｒｂｅｎｃｙ）水酸化アルミニウムゲル；
低粘性水酸化アルミニウムゲル；ＡＦまたはＳＰＴ（スクアレン（５％）、Ｔｗｅｅｎ８
０（０．２％）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ１２１（１．２５％）、リン酸緩衝生理食塩水ｐ
Ｈ７．４のエマルジョン）；ＡＶＲＩＤＩＮＥ
０５
T M
T M
（プロパンジアミン）；ＢＡＹ Ｒ１０
（（Ｎ−（２−デオキシ−２−Ｌ−ロイシルアミノ−ｂ−Ｄ−グルコピラノシル）
−Ｎ−オクタデシルドデカノイルアミド・ヒドロアセテート）；ＣＡＬＣＩＴＲＩＯＬ
（１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３）；リン酸カルシウムゲル；ＣＡＰ
T M
T M
（リン酸
30
カルシウムナノ粒子）；コレラ・ホロトキシン、コレラ毒素Ａ１−プロテインＡ−Ｄ断片
融合タンパク質、コレラ毒素Ｂサブユニット；ＣＲＬ１００５（ブロック・コポリマーＰ
１２０５）；サイトカイン含有リポソーム；ＤＤＡ（ジメチルジオクタデシルアンモニウ
ムブロミド）；ＤＨＥＡ（デヒドロエピアンドロステロン）；ＤＭＰＣ（ジミリストイル
・ホスファチジルコリン）；ＤＭＰＧ（ジミリストイル・ホスファチジルグリセロール）
；ＤＯＣ／ミョウバン複合体（デオキシコール酸ナトリウム塩）；フロイントの完全アジ
ュバント；フロイントの不完全アジュバント；ガンマ・イヌリン；Ｇｅｒｂｕアジュバン
ト（以下の混合物：ｉ）Ｎ−アセチルグルコサミニル−（Ｐｌ−４）−Ｎ−アセチルムラ
ミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−グルタミン（ＧＭＤＰ）、ｉｉ）ジメチルジオクタデシルアン
モニウムクロリド（ＤＤＡ）、ｉｉｉ）亜鉛Ｌ−プロリン塩複合体（ＺｎＰｒｏ−８））
40
；ＧＭ−ＣＳＦ；ＧＭＤＰ（Ｎ−アセチルグルコサミニル−（ｂ１−４）−Ｎ−アセチル
ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン）；Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ（１−（２−メチ
プロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）；ＩｍｍＴｈｅｒ
T M
（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−イソＧｌｕ−
Ｌ−Ａｌａ−グリセロールジパルミテート）；ＤＲＶ類（脱水−再水和小胞から調製した
免疫リポソーム）；インターフェロン−γ；インターロイキン−１β；インターロイキン
−２；インターロイキン−７；インターロイキン−１２；ＩＳＣＯＭＳ
体）；ＩＳＣＯＰＲＥＰ ７．０．３．
T M
T M
（免疫刺激複合
；リポソーム；ＬＯＸＯＲＩＢＩＮＥ
アリル−８−オキソグアノシン）；ＬＴ経口アジュバント
T M
T M
（７−
（大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）
不安定内毒素プロトキシン）；組成物いずれかの微小球体および微小粒子；ＭＦ５９
T M
；
50
(3)
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（スクアレン・水エマルジョン）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ ＩＳＡ ５１
ロイントアジュバント）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ ＩＳＡ ７２０
ント）；ＭＰＬ
T M
T M
T M
（精製不完全フ
（代謝可能油アジュバ
（３−Ｑ−デスアシル−４’−モノホスホリル脂質Ａ）；ＭＴＰ−ＰＥ
およびＭＴＰ−ＰＥリポソーム（（Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル
−Ｌ−アラニン−２−（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−（ヒドロキシ−
ホスホリルオキシ））エチルアミド、一ナトリウム塩）；ＭＵＲＡＭＥＴＩＤＥ
T M
ｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＣＨ３）；ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥ
びＤ−ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥ
T M
（Ｎａ
T M
およ
（Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ｔｈｒ−Ｄ−イソＧｌｎ−
ｓｎ−グリセロールジパルミトイル）；ＮＡＧＯ（ノイラミニダーゼ−ガラクトースオキ
シダーゼ）；組成物いずれかのナノ球体またはナノ粒子；ＮＩＳＶ類（非イオン性界面活
性剤小胞）；ＰＬＥＵＲＡＮ
T M
10
（β−グルカン）；ＰＬＧＡ、ＰＧＡおよびＰＬＡ（乳酸
およびグリコール酸のホモポリマーおよびコポリマー；ミクロ粒子／ナノ粒子）；ＰＬＵ
ＲＯＮＩＣ Ｌ１２１
T M
；ＰＭＭＡ（ポリメチルメタクリレート）；ＰＯＤＤＳ
T M
（オロ
テイノイド（ｏｒｏｔｅｉｎｏｉｄ）微小球体）；ポリエチレンカルバメート誘導体；ポ
リｒＡ：ポリｒＵ（ポリアデニル酸−ポリウリジル酸複合体）；ポリソルベート８０（Ｔ
ｗｅｅｎ８０）；渦巻き型タンパク質（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｃｈｌｅａｔｅｓ）（Ａｖ
ａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ， Ｉｎｃ．、アラバマ州アラバスター）；ＳＴＩ
ＭＵＬＯＮ
T M
（ＱＳ−２１）；Ｑｕｉｌ−Ａ（Ｑｕｉｌ−Ａサポニン）；Ｓ−２８４６３
（４−アミノ−オテック，−ジメチル−２−エトキシメチル−ｌＨ−イミダゾ［４，５−
ｃ］キノリン−１−エタノール）；ＳＡＦ−１
T M
（Ｓｙｎｔｅｘアジュバント配合物）；
20
センダイ・プロテオリポソームおよびセンダイ含有脂質マトリックス；Ｓｐａｎ−８５（
トリオレイン酸ソルビタン）；Ｓｐｅｃｏｌ（Ｍａｒｃｏｌ ５２、Ｓｐａｎ ８５およ
びＴｗｅｅｎ ８５のエマルジョン）；スクアレンまたはＲｏｂａｎｅ（登録商標）（２
，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチルテトラコサンおよび２，６，１０，１５，
１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２テトラコサヘキサエン）；
ステアリルチロシン（オクタデシルチロシンヒドロクロリド）；Ｔｈｅｒａｍｉｄｅ（登
録商標）（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−イソ
Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−ジパルミトキシプロピルアミド）；スレオニル−ＭＤＰ（Ｔｅｒｍ
ｕｒｔｉｄｅ
T M
または［ｔｈｒ１］−ＭＤＰ；Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−スレオニル−
Ｄ−イソグルタミン）；Ｔｙ粒子（Ｔｙ−ＶＬＰまたはウイルス様粒子）；Ｗａｌｔｅｒ
30
Ｒｅｅｄリポソームからなる群より選択される、請求項１の方法。
【請求項６】
抗原が癌抗原である、請求項１の方法。
【請求項７】
癌抗原が、黒色腫−メラニン細胞分化抗原（ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ Ａ；ｇｐ１０
０／ｐｍｅｌ−１７；チロシナーゼ；チロシナーゼ関連タンパク質−１；チロシナーゼ関
連タンパク質−２；メラニン細胞刺激ホルモン受容体）；癌−精巣抗原（ＭＡＧＥ−１；
ＭＡＧＥ−２；ＭＡＧＥ−３；ＭＡＧＥ−１２；ＢＡＧＥ；ＣＡＧＥ、ＮＹＥＳＯ−１）
；突然変異抗原（β−カテニン；ＭＵＭ−１；ＣＤＫ−４；カスパーゼ−８；ＫＩＡ ０
２０５；ＨＬＡ−Ａ２−Ｒ１７０１）；および癌で過剰発現される、非突然変異共有抗原
40
（α−フェトプロテイン；テロメラーゼ触媒タンパク質；Ｇ−２５０；ＭＵＣ−１；癌胎
児抗原；ｐ５３；Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ）、非突然変異タンパク質（ｇｐ１００；ＭＡＧＥ
−１；ＭＡＧＥ−３；チロシナーゼ；ＮＹ−ＥＳＯ−１）に由来するエピトープ、および
突然変異タンパク質（トリオースリン酸イソメラーゼ；ＣＤＣ−２７；ＬＤＬＲ−ＦＵＴ
）に由来するエピトープからなる群より選択される、請求項６の方法。
【請求項８】
抗原がウイルス抗原である、請求項１の方法。
【請求項９】
ウイルス抗原が、レトロウイルス科（例えばヒト免疫不全ウイルス、例えばＨＩＶ−１
（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶまたはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、またはＨＩＶ−ＩＩＩと
50
(4)
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も称される；および他の単離体、例えばＨＩＶ−ＬＰ））； ピコルナウイルス科（例え
ばポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒト・コクサッキーウイルス
、ライノウイルス、エコーウイルス）；カリチウイルス科（Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ）
（例えば胃腸炎を引き起こす株）；トガウイルス科（例えばウマ脳炎ウイルス、風疹ウイ
ルス）；フラビウイルス科（例えばデング熱ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）
；コロナウイルス科（例えばコロナウイルス）；ラブドウイルス科（例えば水疱性口内炎
ウイルス、狂犬病ウイルス）；フィロウイルス（例えばエボラウイルス）；パラミクソウ
イルス科（例えばパラインフルエンザウイルス、おたふく風邪ウイルス、麻疹ウイルス、
呼吸器合胞体ウイルス）；オルトミクソウイルス科（例えばインフルエンザウイルス）；
ブニヤウイルス科（例えばハンタンウイルス、ブンガウイルス（ｂｕｎｇａ ｖｉｒｕｓ
10
）、フレボウイルスおよびナイロウイルス（Ｎａｉｒｏ ｖｉｒｕｓ））；アレナウイル
ス科（出血熱ウイルス）；レオウイルス科（例えばレオウイルス、オルビウイルスおよび
ロタウイルス）；ビルナウイルス科；ヘパドナウイルス科（Ｂ型肝炎ウイルス）；パルボ
ウイルス科（パルボウイルス）；パポバウイルス科（パピローマウイルス、ポリオーマウ
イルス）；アデノウイルス科（大部分のアデノウイルス）；ヘルペスウイルス科（単純ヘ
ルペスウイルス（ＨＳＶ）１および２、水痘・帯状ヘルペスウイルス、サイトメガロウイ
ルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス類）；ポックスウイルス科（天然痘ウイルス、ワクシ
ニアウイルス、ポックスウイルス）；およびイリドウイルス科（例えばアフリカ・ブタ熱
ウイルス）；非Ａ非Ｂ肝炎のウイルス病原体；ノーウォークウイルスおよび関連ウイルス
、並びにアストロウイルス（ａｓｔｒｏｖｉｒｕｓ））からなる群より選択される、請求
20
項８の方法。
【請求項１０】
抗原が細菌抗原である、請求項１の方法。
【請求項１１】
細菌抗原が、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉｓ）
、ライム病ボレリア（Ｂｏｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、レジオネラ・ニュー
モフィリア（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、マイコバクテリウム
属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）種（例えばヒト型結核菌（Ｍ． ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓ
ｉｓ）、鳥型結核菌（Ｍ． ａｖｉｕｍ）、Ｍ．イントラセルラレ（Ｍ． ｉｎｔｒａｃ
ｅｌｌｕｌａｒｅ）、Ｍ．カンサシ（Ｍ． ｋａｎｓａｉｉ）、Ｍ．ゴルドネ（Ｍ． ｇ
30
ｏｒｄｏｎａｅ））、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）
、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉ
ａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、単球症リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙ
ｔｏｇｅｎｅｓ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（
Ａ群連鎖球菌）、ストレプトコッカス・アガラクティエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群連鎖球菌）、連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）
（ビリダンス群）、糞便連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、
ウシ連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｂｏｖｉｓ）、連鎖球菌属（嫌気性種）、
肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、病原性カンピロ
バクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）種、腸球菌属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）
40
種、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、炭疽菌（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｒａｃｉｓ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、コリネバクテリウム種、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏ
ｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、ウエルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｒｓ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）、エン
テロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、肺炎
桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａ
ｓｔｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ
）種、フソバクテリウム・ヌクレアツム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔ
ｕｍ）、ストレプトバチルス・モニリフォルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍ
50
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ｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｉｕ
ｍ）、トレポネーマ・ペルテヌエ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐｅｒｔｅｎｕｅ）、レプトス
ピラ属（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、およびイスラエル放線菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｉｓｒａｅｌｌｉ）からなる群より選択される、請求項１０の方法。
【請求項１２】
抗原が感染性単細胞生物由来である、請求項１の方法。
【請求項１３】
抗原が、住血吸虫類；トリパノソーマ類；リーシュマニア属（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）
種；フィラリア性線形動物；トリコモナス症；肉胞子虫症；無鉤条虫（Ｔａｅｎｉａ ｓ
ａｇｉｎａｔａ）、有鉤条虫（Ｔａｅｎｉａ ｓｏｌｉｕｍ）、クリプトコッカス・ネオ
10
フォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、煙色コウジ菌（Ａ
ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉ
ｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃ
ｉｄｉｏｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、旋毛虫症、皮膚ブラストミセス（Ｂｌａｓｔｏｍｙ
ｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、トラコーマ・クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、鵞口瘡カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、熱
帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、三日熱マラリア原
虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ）、四日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ
ｍａｌａｒｉａｅ）、およびトキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉ
ｉ）からなる群より選択される、請求項１２の方法。
20
【請求項１４】
癌を有する被験者において癌を治療する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）癌抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法。
【請求項１５】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワ
クチン投与に続いて投与する、請求項１４の方法。
【請求項１６】
30
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投
与に続いて投与する、請求項１４の方法。
【請求項１７】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８
および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよ
びガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリ
ーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパ
ク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ
配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１４の方法。
【請求項１８】
40
被験者において、ウイルス感染を防止し、そして／または治療する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）ウイルス抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法。
【請求項１９】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワ
クチン投与に続いて投与する、請求項１８の方法。
【請求項２０】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投
50
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与に続いて投与する、請求項１８の方法。
【請求項２１】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８
および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよ
びガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリ
ーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパ
ク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ
配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１８の方法。
【請求項２２】
被験者において、細菌感染を防止し、そして／または治療する方法であって：
10
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）細菌抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法。
【請求項２３】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワ
クチン投与に続いて投与する、請求項２２の方法。
【請求項２４】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投
与に続いて投与する、請求項２２の方法。
20
【請求項２５】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８
および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよ
びガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリ
ーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパ
ク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ
配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項２２の方法。
【請求項２６】
被験者において、抗原に対する免疫応答を増進する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
30
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法。
【請求項２７】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワ
クチン投与に続いて投与する、請求項２６の方法。
【請求項２８】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投
与に続いて投与する、請求項２６の方法。
【請求項２９】
40
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８
および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよ
びガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリ
ーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパ
ク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ
配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項２６の方法。
【請求項３０】
被験者において、抗原に対する抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞免疫応答を増進する方法で
あって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
50
(7)
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（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法。
【請求項３１】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワ
クチン投与に続いて投与する、請求項３０の方法。
【請求項３２】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投
与に続いて投与する、請求項３０の方法。
【請求項３３】
10
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８
および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよ
びガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリ
ーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパ
ク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ
配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３１の方法。
【請求項３４】
被験者において、抗原に対する抗原特異的Ｔヘルパー免疫応答を増進する方法であって
：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
20
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法。
【請求項３５】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワ
クチン投与に続いて投与する、請求項３４の方法。
【請求項３６】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投
与に続いて投与する、請求項３４の方法。
【請求項３７】
30
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８
および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよ
びガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリ
ーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパ
ク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ
配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３４の方法。
【請求項３８】
被験者において、抗原に対する免疫応答を評価する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；
40
（ｃ）抗原を被験者に投与し、ここで、抗原は、場合によってアジュバントとともに配
合可能である；そして
（ｄ）抗原に対する被験者の免疫応答を評価する
工程を含んでなる、前記方法。
【請求項３９】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワ
クチン投与に続いて投与する、請求項３８の方法。
【請求項４０】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投
与に続いて投与する、請求項３８の方法。
50
(8)
JP 2005-528373 A 2005.9.22
【請求項４１】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８
および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよ
びガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリ
ーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパ
ク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ
配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３８の方法。
【請求項４２】
１以上のアレルギーを有する被験者において、アレルギーを治療する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
10
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）アレルギーワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法。
【請求項４３】
Ｆｌｔ３リガンドを、アレルギーワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして
／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項４２の方法。
【請求項４４】
補助分子を、アレルギーワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／または
ワクチン投与に続いて投与する、請求項４２の方法。
【請求項４５】
20
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８
および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよ
びガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリ
ーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパ
ク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ
配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項４２の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
30
本出願は、これによって、米国仮出願第６０／４２７，８３５号、２００２年１１月１
９日出願、および米国仮出願第６０／３６８，２６３号、２００２年３月２６日出願の優
先権を請求し、これらの出願の開示は本明細書に依存され、そして援用される。
【０００２】
発明の分野
本発明は、抗原に対する免疫応答を増進するため、免疫プロトコルにおいて、Ｆｌｔ３
リガンドを用いる方法に関する。態様には、抗原およびアジュバントを含んでなるワクチ
ンで被験者を免疫する前に、Ｆｌｔ３リガンドを投与することが含まれる。Ｆｌｔ３リガ
ンド免疫プロトコルを用いて、疾患および感染を治療し、そして防止する方法を提供する
。抗原およびアジュバントのｉｎ ｖｉｖｏ評価にＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルを用
40
いる方法もまた提供する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
ワクチン接種の目的は、適切なレベルの抗原特異的抗体、および抗原との再度の接触に
際して迅速に拡大可能なエフェクター細胞の初回抗原刺激を受けた（ｐｒｉｍｅｄ）集団
を確立することによって、有効な免疫を提供することである。ワクチン接種は、感染性疾
患による死亡または能力障害を防止する効率的な手段であり、そして多くのワクチンがヒ
トへの投与に関して承認を得ており、これらには、特定のアデノウイルス、麻疹ウイルス
、おたふく風邪ウイルスおよび風疹ウイルス、およびポリオウイルスの生ウイルスワクチ
50
(9)
JP 2005-528373 A 2005.9.22
ン、ジフテリアおよび破傷風トキソイドワクチン、並びにヘモフィルス属（Ｈａｅｍｏｐ
ｈｉｌｕｓ）ｂおよび髄膜炎菌多糖ワクチンが含まれる（Ｈｉｎｍａｎら， Ｐｒｉｎｃ
ｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ
ｓ， 第３版中；Ｇ．Ｌ． Ｍａｎｄｅｌｌ， Ｒ．Ｇ． ＤｏｕｇｌａｓおよびＪ．Ｅ
． Ｂｅｎｎｅｔｔ監修， Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ Ｉｎｃ．，
ニューヨーク州ニューヨーク；２３２０−２３３３；表２）。ワクチン接種が、感染性
疾患を治療し、そして防止するのに成功したことから、腫瘍性疾患を治療するかまたは防
止する際のワクチン利用に関して興味が高まっている。当該技術分野において、腫瘍が腫
瘍特異的抗原を発現しうることが発見されたため、腫瘍抗原由来のＭＨＣクラスＩ制限ペ
プチドを利用する免疫戦略が発展してきた。しかし、臨床試験は限定された成功しか収め
10
ておらず、そして免疫戦略が最適ではなかったことは明らかである。
【０００４】
免疫プロトコルでしばしば困難なのは、ワクチン抗原が、強い免疫応答を促進するのに
十分な免疫原性を所持せず、そしてしたがって同一抗原による続く攻撃に対して十分なレ
ベルの防御を促進しないことである。さらに、特定の抗原は、弱い細胞仲介応答または抗
体応答しか誘発しない可能性がある。特定の疾患に応じて、強い細胞仲介応答および／ま
たは体液性免疫応答が望ましい可能性がある。研究者は、ワクチンの免疫原性を増加させ
るため、多様な化合物を用いて、何十年も実験を行ってきた。アジュバントは、免疫応答
を増進するか、増大させるか、または増強する物質であり、そしていくつかの場合では、
１種類の免疫応答を別のものより促進するのに使用可能である。さらに、特定の新規組換
20
え抗原の比較的弱い免疫原性は、より強力であるためにアジュバントを必要としてきた。
ワクチンアジュバントは、定量的および定性的両方で免疫応答に影響を及ぼす、異なる作
用様式を有する。こうした作用様式には、Ｔ細胞を可動化し、デポとして作用し、そして
リンパ球が流入領域リンパ節（ｄｒａｉｎｉｎｇ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ）に位置しつづ
けるように、リンパ球循環を改変することが含まれる。これらはまた、抗原を免疫部位に
集中させ、それによって抗原特異的Ｔ細胞およびＢ細胞が、抗原提示細胞と、より効率的
に相互作用するのを可能にするようにも働きうる。これらはまた、Ｔ細胞の増殖および分
化を刺激し、そして異なるＩｇアイソタイプの産生を増進させるなど、Ｂ細胞に対する影
響を有する可能性もある。アジュバントはまた、抗原提示細胞、特に樹状細胞およびマク
ロファージのふるまいを刺激して、そしてこれらに影響を及ぼし、これらがＴ細胞および
30
Ｂ細胞に抗原を提示するのをより有効にしうる。不運なことに、ヒトでの使用には、アジ
ュバントはほとんど認可されておらず、そしてＦＤＡ認可を受けたアジュバントは、免疫
増強効果が比較的低い。
【０００５】
抗原搬送およびワクチン学における進歩にもかかわらず、癌および感染性疾患のための
効率的なワクチン療法を発展させるには、いまだに多くの難問がある。本明細書に記載す
る態様は、これらの必要性に取り組む。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
40
発明の概要
本発明の態様は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルおよび該プロトコルを用いる方法に
関する。
【０００７】
１つの態様において、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルは、被験者を免疫する方法であ
って：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなり、そしてここでＦｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投
50
(10)
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与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与し、そしてここで補助分子を、ワ
クチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与し
、そしてここで補助分子は、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２
、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−
アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、Ｔ
ＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４
０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパ
ク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、前記方法に関
する。
【０００８】
10
さらなる態様は、被験者において、ワクチン抗原に対する免疫応答を増進する方法に関
する。
他の態様は、被験者において、抗原特異的エフェクター細胞の数を増加させる方法に関
する。
【０００９】
さらなる態様は、被験者において、抗原特異的ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞および／また
はＣＤ４＋ Ｔヘルパー細胞の数を増進する方法に関する。
さらなる態様は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルを用いて、癌を防止し、そして／ま
たは治療することに関する。
【００１０】
20
他の側面において、態様は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルを用いて、ウイルス感染
を防止し、そして／または治療することに関する。
さらなる態様は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルを用いて、細菌感染を防止し、そし
て／または治療することに関する。
【００１１】
さらなる態様は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルを用いて、単細胞生物による感染を
防止し、そして／または治療することに関する。
さらに他の態様において、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルを用いて、動物モデルまた
は試験被験者において、ワクチンの有効性、抗原の免疫原性を試験するか、または曝露モ
デルにおいて、抗原および／またはワクチンに対する防御免疫応答を評価することが可能
30
である。
【００１２】
さらなる態様は、アレルゲン特異的免疫療法と組み合わせてＦｌｔ３リガンドを投与す
ることを含んでなる、アレルギー患者の治療に関する。
発明の詳細な説明
本発明の態様は、Ｆｌｔ３リガンドのユニークな特性を利用して、免疫プロトコルにお
いてＦｌｔ３リガンドを用いる方法を含む。以下により詳細に定義する、Ｆｌｔ３リガン
ド免疫プロトコルは、少なくとも部分的に、Ｆｌｔ３リガンドを被験者に投与し、そして
被験者をワクチンで免疫することを含んでなる。Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの態様
は、驚くべき、そして前例のない、ワクチン接種に対する免疫応答の増大および延長を示
40
した。この増進した免疫応答は、抗原特異的であり、そして少なくとも部分的に、限定さ
れるわけではないが、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞およびＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞などの抗
原特異的エフェクター細胞数の増加に特徴付けられる。したがって、本発明の１つの態様
は、ｉｎ ｖｉｖｏで抗原提示細胞を増加させ、そして／または可動化するために、有効
量のＦｌｔ３リガンドを使用し、そして抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンで
被験者を免疫することを提供する。
【００１３】
他の側面において、本発明の態様は、造血前駆細胞および幹細胞から多数の中間細胞種
を生成するための、Ｆｌｔ３リガンドのｉｎ ｖｉｖｏ使用に関する。Ｆｌｔ３リガンド
（本明細書および当該技術分野において、Ｆｌｔ３−ＬまたはＦＬとも称される）は、造
50
(11)
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血幹細胞および前駆細胞に影響を及ぼすことが知られる。Ｆｌｔ３リガンドは、下流細胞
+
または中間細胞、例えばＣＤ３４ 骨髄前駆細胞および幹細胞由来の骨髄性前駆細胞、単
球性細胞、マクロファージ、Ｂ細胞および樹状細胞の生成を強力に刺激することが示され
てきている。これらの中間細胞種は、多数では、ｉｎ ｖｉｖｏで天然に見出されず、そ
してＦｌｔ３リガンドを投与することによって生成可能である。さらに、Ｆｌｔ３リガン
ドは、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば被験者の末梢血あるいは他の組織または臓器、例えば脾
臓、肝臓、肺およびリンパ節において、樹状細胞を増加させるかまたは可動化することが
示されてきている。被験者の樹状細胞量を増加させることによって、こうした細胞は、そ
れ自体、Ｔ細胞およびＢ細胞などのエフェクター細胞に抗原を提示するのに使用可能であ
る。全細胞数中のこうした増進は、宿主において、抗原に対する免疫応答を増大させるこ
10
とが可能である。したがって、Ｆｌｔ３リガンドを用いて、被験者のリンパ球が仲介する
（例えばＴ細胞およびＢ細胞が仲介する）か、または骨髄性細胞が仲介する、抗原に対す
る免疫応答をブーストすることが可能であり、それによって被験者のＴ細胞へのより効果
的な抗原提示を可能にする。全体の応答は、より強くそして改善された免疫応答であり、
そして抗原に対するより有効な免疫である。
【００１４】
したがって、樹状細胞、マクロファージ、単球、Ｂ細胞等の、被験者の抗原提示細胞（
ＡＰＣ）の量および特性を調節し、そしてこれらのＡＰＣを、アジュバントの背景で提示
される抗原（すなわちワクチン）に曝露することによって、驚くほど堅固な抗原特異的免
疫応答が生成される。
20
【００１５】
Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルは、疾患、障害または感染の防止および／または治療
のため、被験者にＦｌｔ３リガンド、ワクチン、場合によって１以上の補助分子とともに
、他の付随する分子および／または配合物（例えば希釈剤、キャリアー、賦形剤等）を投
与することを指す。上述のＦｌｔ３リガンド、ワクチンおよび他の構成要素は、いかなる
投薬量、順序、頻度および時間的な並べ方でも投与可能である。当業者は、これらのパラ
メーターを変化させて治療を最適化することが、当該技術分野で日常的に行われることを
認識するであろう。したがって、本出願の目的のため、投薬量、順序、頻度および時間的
な並べ方のこうした順列および組み合わせはすべて、本明細書に記載する方法に含まれる
。さらなる態様はまた、「初回抗原刺激および追加免疫（ｐｒｉｍｅ ａｎｄ ｂｏｏｓ
30
ｔ）」技術などの免疫措置において、Ｆｌｔ３リガンドを用いることも含み、ここで、抗
原を発現する生ウイルスベクターまたは抗原をコードするＤＮＡに基づくワクチン（裸ま
たはプラスミド）いずれかで被験者を免疫し、そして続いて、１以上のアジュバント中に
配合した１以上の抗原で追加免疫する。Ｆｌｔ３リガンドは、初回抗原刺激および追加免
疫措置の前、または措置中、または措置後のいかなるときにも投与可能である。
【００１６】
本明細書に提示する研究によって、免疫前にマウスをＦｌｔ３リガンドで処置した際に
生じる、抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の劇的な拡大が立証される。例えば、抗原特異的Ｃ
Ｄ８＋ Ｔ細胞は、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中に配合した抗原で免疫す
る前にＦｌｔ３リガンドを投与されたマウスにおいて、Ｆｌｔ３リガンドを投与されない
40
マウスより、およそ３４倍高く、そしてＰＢＳ中に配合した抗原しか投与されなかったマ
ウスより、１１４倍高かった。免疫５日後、抗原特異的ＣＴＬは、流入領域リンパ節中の
6
すべての細胞の２５∼４０％を構成するまでに拡大し、これは約２．５∼９ｘ１０ 細胞
に等しかった。ｐＧＭ−ＣＳＦおよび／またはＣＤ４０−Ｌなどの補助分子をさらに添加
すると、ＣＤ８＋ Ｔ細胞拡大がさらに増大し、そして延長された。
【００１７】
Ｆｌｔ３リガンド前処置、およびデポ様効果を有するものなどのアジュバント中に配合
した抗原での免疫を組み合わせると、抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）生成に劇的
な効果があった。とりわけ、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルによって拡大したＣＤ８＋
Ｔ細胞は、標準的ＣＴＬアッセイによって測定した際、機能する、抗原特異的エフェク
50
(12)
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ター細胞であった。
【００１８】
際立ったことに、免疫前にＦｌｔ３リガンドを投与された群、および場合によって補助
分子を投与された群は、非常に増大した免疫応答を有し、流入領域リンパ節から直接単離
したＴ細胞集団でＣＴＬ活性が測定され、すなわち、抗原特異的ＣＴＬ活性を明らかにす
るためにｉｎ ｖｉｔｒｏで再刺激する必要はなかった。これらの結果によって、Ｆｌｔ
３リガンドで前処置され、そして続いてワクチン接種されたマウスで生成される抗原特異
的ＣＤ８＋ ＣＴＬ免疫応答は、ウイルス感染に対する急性応答において生成されるもの
と同程度に強力であったことが立証される。
【００１９】
10
さらに、免疫前にＦｌｔ３リガンドを投与された被験者は、標準的増殖アッセイおよび
ＩＦＮγ検出アッセイによって測定した際、生物学的に機能性である、抗原特異的ＣＤ４
＋ Ｔヘルパー細胞を有意により高いレベルで有した。
【００２０】
別の一連の研究において、Ｆｌｔ３リガンド前処置を受けた群は、ワクチン配合物中で
使用したアジュバント、すなわち不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、水酸化アル
ミニウム（ミョウバン）またはＱｕｉｌ−Ａサポニン（Ｑｕｉｌ−Ａ）、に関わらず、一
貫してより高い免疫応答を有した。これらの知見によって、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロト
コルが、多様なアジュバント中に配合した抗原に対する免疫応答を増進し、そしてＦｌｔ
３リガンド免疫プロトコルが、抗原／アジュバント単独での免疫よりも免疫応答を増進す
20
ることが立証される。さらに、Ｆｌｔ３リガンド前処置を受け、そしてミョウバンまたは
Ｑｕｉｌ−Ａ中に配合した抗原をワクチン接種されたマウスは、時間に渡って、より高い
割合のＣＤ４＋トランスジェニックＴ細胞を維持し、これによって、Ｆｌｔ３リガンド免
疫プロトコルが、増大した免疫応答を延長させることが立証される。総合すると、これら
の結果によって、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルが、標準的ワクチン接種技術よりも、
抗原特異的エフェクター細胞応答の度合いおよび期間両方を増加させることが立証される
。
【００２１】
さらなる研究によって、Ｆｌｔ３リガンドでの前処置、すなわちワクチン投与前のＦｌ
ｔ３リガンドの投与は、免疫プロトコルのある範囲に渡って有効であったことが示される
30
。とりわけ、Ｆｌｔ３−Ｌ免疫プロトコルは、ペプチド抗原およびタンパク質抗原どちら
に対しても、ＣＤ８＋ ＣＴＬエフェクター細胞応答を生成するのに有効であった。他の
研究において、免疫後にＩＬ−１５などの補助分子を投与すると、マウスをＦｌｔ３リガ
ンドで前処置した際の、抗原特異的ＣＤ８＋ ＣＴＬ拡大および機能がさらに増大された
。免疫直後にＩＬ−１５または抗４−１ＢＢなどの補助分子で処置すると、メモリーＴ細
胞プールのサイズが増大することがさらに示されている。
【００２２】
別の態様において、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコル、並びに疾患および／または感染
を治療し、そして／または防止する関連方法は、デポ様特性および炎症誘発特性を所持す
るアジュバント、例えばエマルジョンまたはゲルに基づくアジュバントであって、限定さ
40
れるわけではないが、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）を含む、前記アジュバン
トを有するワクチンを含んでなる。デポ様特性を有するアジュバントの１つの利点は、こ
うしたアジュバントがなければ、体から迅速に一掃されるであろう小さい抗原の場合に、
非常に有効であることである。理論に縛られることなく、抗原を最初のデポに局在化させ
、そして抗原を流入領域リンパ節に散在させる傾向があるアジュバントは、流入領域リン
パ節において、抗原および樹状細胞の相互作用を増進し、そして続いてＴ細胞を活性化す
るため、有効である可能性がある。さらに、常在樹状細胞は、免疫部位で、または免疫部
位近傍で、抗原を内在化し、そして流入領域リンパ節に移動して、そしてＴ細胞が豊富な
領域に抗原を提示するか、またはエキソソームによって、抗原をリンパ節中の他の樹状細
胞に分散させ、これが続いてエキソソームを内在化し、そしてＴ細胞に抗原を提示する可
50
(13)
JP 2005-528373 A 2005.9.22
能性がある。
【００２３】
本明細書記載の方法を用いて、疾患、障害または感染性疾患を治療しそして／また防止
する、さらなる利点には、少なくとも部分的に、免疫原性が弱い抗原、例えば非常に精製
された抗原または組換え抗原などの免疫原性の増進；用いる抗原量の潜在的な減少；より
頻度の低い追加免疫；有効性の改善；細胞仲介免疫および／または体液性免疫の優先的な
刺激；および免疫応答の潜在的な標的化、例えば粘膜免疫のためのパイアー斑の精選細胞
の標的化が含まれる。
【００２４】
用語「被験者」は、本明細書において、哺乳動物を指す。例えば、本発明に意図される
10
哺乳動物には、ヒト；霊長類；イヌ、ネコなどのすべての種類のペット；ヒツジ、ウシ、
ヤギ、ブタ、ウマ等の家畜動物；マウス、ラット、ウサギ、モルモットなどの一般的な実
験動物；それとともに、動物園におけるような捕獲された動物または自由な野生動物が含
まれる。本明細書全体を通じて、用語、宿主は、被験者と交換可能に用いられる。
【００２５】
抗原提示細胞またはＡＰＣは、本明細書において、細胞表面上で、ＭＨＣ分子と会合し
た、タンパク質抗原のペプチド断片を提示する細胞である。ＡＰＣのあるものは、抗原特
異的Ｔ細胞を活性化することが可能である。ＡＰＣの例には、限定されるわけではないが
、樹状細胞、マクロファージ、単球、Ｂ細胞等が含まれる。
【００２６】
20
エフェクター細胞は、本明細書において、サイトカインおよび／またはケモカインを分
泌し、微生物を殺し、感染細胞または癌性細胞を認識し、そして場合によって殺し、それ
とともに抗体を分泌するなど、免疫応答中のエフェクター機能を行う細胞である。例には
、限定されるわけではないが、Ｔ細胞（細胞傷害性、ヘルパー、腫瘍浸潤）、Ｂ細胞、Ｎ
Ｋ細胞、好中球、マクロファージおよび樹状細胞が含まれる。
【００２７】
本明細書において、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに単
数形を指示しない限り、複数の対象を含む。したがって、例えば、「免疫（ａｎ ｉｍｍ
ｕｎｉｚａｔｉｏｎ）」への言及には、複数のこうした免疫が含まれ、そして「細胞（ｔ
ｈｅ ｃｅｌｌ）」への言及には、１以上の細胞および当業者に知られるその同等物への
30
言及が含まれるなどである。本明細書で用いるすべての技術用語および科学用語は、明ら
かに異なって示されない限り、本発明が属する当該技術分野の一般的な当業者に、一般的
に理解されるのと同一の意味を有する。
【００２８】
本発明は、記載する特定の方法論、プロトコル、細胞株、動物種または属、構築物、お
よび試薬には限定されないと理解されるものとし、これは、こうしたものが多様でありう
るためである。また、本明細書において用いる専門用語は、特定の態様を記載する目的の
みのものであり、そして本発明の範囲を限定することは意図されず、本発明の範囲は、付
随する請求項によってのみ限定されるであろう。
【００２９】
40
Ｆｌｔ３リガンド
本明細書において、用語Ｆｌｔ３リガンドは、本明細書に援用される米国特許第５，５
５４，５１２号および米国特許第６，２９１，６６１号に記載されるポリペプチド類を指
す。本明細書に記載する方法で使用可能なＦｌｔ３リガンドの型には、限定されるわけで
はないが、ネズミおよびヒトＦｌｔ３リガンドが含まれる。ヒトＦｌｔ３リガンドｃＤＮ
Ａは、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション、米国メリーランド州ロックビル
（ＡＴＣＣ）に、１９９３年８月６日に寄託され、そして寄託番号ＡＴＣＣ ６９３８２
を割り当てられ、そしてマウスＦｌｔ３リガンドｃＤＮＡは、同じ日に寄託され、そして
寄託番号ＡＴＣＣ ６９２８６を割り当てられた。寄託はブダペスト条約の条件下で行わ
れた。Ｆｌｔ３リガンドは、Ｉｍｍｕｎｅｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ワシントン州シ
50
(14)
JP 2005-528373 A 2005.9.22
アトルから商業的に入手可能である。Ｆｌｔ３リガンドは、上に引用する文書に記載され
る方法にしたがって作成可能である。限定されるわけではないが、ポリエチレングリコー
ルなどの１以上の水可溶性ポリマーを添加することによって、Ｆｌｔ３リガンドを修飾し
て、生物学的利用能および／または薬物動態学的半減期を増加させることが可能である。
別の態様において、本明細書に記載する免疫プロトコルにおいて、Ｆｌｔ３リガンドの生
物学的効果を模倣するＦｌｔ３結合タンパク質が使用可能である。例えば、ＷＯ９５／２
７０６２は、Ｆｌｔ３に対するアゴニスト性抗体、Ｆｌｔ３リガンドの受容体を記載し、
これらから、多様なＦｌｔ３結合タンパク質が調製可能である。
【００３０】
Ｆｌｔ３リガンドの特に好ましい型は、Ｆｌｔ３リガンドの生物学的に活性な可溶性型
10
であり、そして特に、細胞外ドメイン、または細胞外ドメインの１以上の断片を含んでな
る型である。Ｆｌｔ３リガンドの可溶性型は、発現される細胞から分泌されることが可能
なポリペプチドである。こうした型では、ポリペプチドが発現される細胞から完全に分泌
されるように、ポリペプチドの細胞内ドメインおよび膜貫通ドメインの一部またはすべて
が欠失している。本発明のポリペプチドの細胞内ドメインおよび膜貫通ドメインは、配列
情報からこうしたドメインを決定するための既知の技術にしたがって、同定可能である。
可溶性Ｆｌｔ３リガンドにはまた、細胞から分泌されることが可能であるとの条件で膜貫
通領域の一部を含み、そして好ましくはＦｌｔ３受容体に結合する能力を保持し、そして
その生物学的効果を達成するポリペプチドも含まれる。可溶性Ｆｌｔ３リガンドには、少
なくとも１つのＦｌｔ３リガンドポリペプチドの細胞外部分を含んでなるオリゴマーまた
20
は融合ポリペプチド、およびＦｌｔ３リガンドポリペプチド活性を有するこれらのポリペ
プチドいずれかの断片が、さらに含まれる。
【００３１】
ヒトＦｌｔ３リガンドは、配列番号１のアミノ酸２８∼Ｘａａからなる群より選択され
るアミノ酸配列を含んでなることが可能であり、ここでＸａａはアミノ酸１６０∼２３５
である。別の態様は、配列番号１のアミノ酸２７∼Ｘａａからなる群より選択されるアミ
ノ酸配列を含んでなり、ここでＸａａはアミノ酸１６０∼２３５である。ネズミＦｌｔ３
リガンドは、配列番号２のアミノ酸２８∼Ｙａａからなる群より選択されるアミノ酸配列
を含んでなることが可能であり、ここでＹａａはアミノ酸１６３∼２３１である。可溶性
ヒトＦｌｔ３リガンドの態様には：配列番号１の残基２７∼１６０（包括的）、配列番号
30
１の残基２８∼１６０（包括的）、配列番号１の残基２７∼１７９（包括的）、配列番号
１の残基２７∼１８２（包括的）、配列番号１の残基２８∼１８２（包括的）、配列番号
１の残基２７∼２３５（包括的）および配列番号１の残基２８∼２３５（包括的）のアミ
ノ酸配列が含まれる。可溶性ネズミＦｌｔ３リガンドの態様には：配列番号２の残基２８
∼１６３（包括的）のアミノ酸配列、配列番号２の残基２８∼１８８（包括的）のアミノ
酸配列および配列番号２の残基２８∼２３１（包括的）のアミノ酸配列が含まれる。
【００３２】
もちろん、本明細書記載の方法では、実質的に類似であり、そして匹敵する生物学的活
性を保持するＦｌｔ３リガンド変異体が使用可能である。用語「実質的に類似」は、好ま
しくは天然アミノ酸配列に少なくとも８０％同一であり、最も好ましくは少なくとも９０
40
％同一である変異体アミノ酸配列を意味する。２つのアミノ酸または２つの核酸配列の同
一性パーセントは、視覚的検査および数学的計算によって決定可能であるし、またはより
好ましくは、コンピュータプログラムを用いて配列情報を比較することによって、比較を
行う。典型的な好ましいコンピュータプログラムは、遺伝学コンピュータグループ（ＧＣ
Ｇ；ウィスコンシン州マディソン）ウィスコンシンパッケージ、バージョン１０．０プロ
グラム、「ＧＡＰ」（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら， １９８４， Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒ
ｅｓ． １２：３８７）である。「ＧＡＰ」プログラムの好ましいデフォルトパラメータ
には：（１）ヌクレオチドに関する単一（ｕｎａｒｙ）比較マトリックス（同一に対し１
および非同一に対し０の値を含む）、並びにＳｃｈｗａｒｔｚおよびＤａｙｈｏｆｆ監修
，Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃ
50
(15)
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ｔｕｒｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄ
ａｔｉｏｎ， ｐｐ．３５３−３５８， １９７９に記載されるような、Ｇｒｉｂｓｋｏ
ｖおよびＢｕｒｇｅｓｓ， Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １４：６７４５， １
９８６の加重アミノ酸比較マトリックス；または他の匹敵する比較マトリックスのＧＣＧ
実行；（２）アミノ酸配列の各ギャップに対する３０のペナルティおよび各ギャップ中の
各記号に対しさらに１のペナルティ、またはヌクレオチド配列の各ギャップに対する５０
のペナルティおよび各ギャップ中の各記号に対しさらに３のペナルティ；（３）末端ギャ
ップに対するペナルティなし；および（４）長いギャップに対する最大ペナルティなし、
が含まれる。配列比較の当業者に使用される他のプログラム、例えばＮａｔｉｏｎａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅウェブサイトｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉ
10
ｈ．ｇｏｖ／ｇｏｒｆ／ｗｂｌａｓｔ２．ｃｇｉを介しての使用に利用可能なＢＬＡＳＴ
Ｎプログラム、バージョン２．０．９、またはＵＷ−ＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムな
どもまた、使用可能である。ＵＷ−ＢＬＡＳＴ ２．０の標準的デフォルトパラメータ設
定は、以下のインターネットサイト：ｓａｐｉｅｎｓ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／ｂｌａｓｔ
／ｂｌａｓｔ／＃Ｆｅａｔｕｒｅｓに記載される。さらに、該ＢＬＡＳＴアルゴリズムは
、ＢＬＯＳＵＭ６２アミノ酸スコア化マトリックスを用い、そして使用可能な、場合によ
るパラメーターは、以下のとおりである：（Ａ）組成上の複雑さが低いクエリー配列のセ
グメント（ＷｏｏｔｔｏｎおよびＦｅｄｅｒｈｅｎ（Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ ａｎｄ Ｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ， １９９３）のＳＥＧプログラムによって決定されるようなもの；また
、ＷｏｏｔｔｏｎおよびＦｅｄｅｒｈｅｎ， １９９６， Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃ
20
ｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌｌｙ ｂｉａｓｅｄ ｒｅｇｉｏｎ ｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ｄａｔａｂａｓｅ， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ． ２６６：５５４−７１も参
照されたい）、または短い周期の内部反復からなるセグメント（Ｃｌａｖｅｒｉｅおよび
Ｓｔａｔｅｓ（Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， １９９３）のＸＮ
Ｕプログラムによって決定されるようなもの）をマスクするフィルターの包含、および（
Ｂ）データベース配列に対するマッチを報告する、統計的有意性の閾値、またはＥスコア
（ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９０）の確率論モデルによって、マッチが
単なる偶然によって見出されると予期される確率；マッチに割り当てられた統計的有意性
がこのＥスコア閾値より高ければ、該マッチは報告されないであろう）；好ましいＥスコ
ア閾値は０．５であり、または優先性を増加させるため、０．２５、０．１、０．０５、
30
０．０１、０．００１、０．０００１、１ｅ−５、１ｅ−１０、１ｅ−１５、１ｅ−２０
、１ｅ−２５、１ｅ−３０、１ｅ−４０、１ｅ−５０、１ｅ−７５、または１ｅ−１００
である。
【００３３】
Ｆｌｔ３リガンド変異体は、保存的置換配列、すなわち、規定のアミノ酸残基が、類似
の物理化学的特性を有する残基で交換されるものを含んでなることが可能である。保存的
置換の例には、１つの脂肪族残基の別のものでの置換、すなわちＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ
、またはＡｌａの互いの置換、あるいは１つの極性残基の別のものでの置換、例えばＬｙ
ｓおよびＡｒｇ間；ＧｌｕおよびＡｓｐ間；またはＧｌｕおよびＡｓｎ間の置換が含まれ
る。他のこうした保存的置換、例えば類似の疎水性特性を有する全領域の置換が周知であ
40
る。天然存在変異体もまた、本発明に含まれる。こうした変異体の例は、選択的ｍＲＮＡ
スプライシング事象から生じるか、または天然タンパク質のタンパク質分解切断から生じ
る、天然生物学的特性が保持されているタンパク質である。
【００３４】
当業者は、既知の技術を用いて、Ｆｌｔ３リガンドペプチドまたはＦｌｔ３リガンドＤ
ＮＡ配列中のさらなる修飾を行うことが可能である。ポリペプチド配列中の目的の修飾に
は、選択したアミノ酸の改変、置換、交換、挿入または欠失が含まれることが可能である
。例えば、１以上のシステイン残基を欠失させるかまたは別のアミノ酸と交換して、分子
のコンホメーションを改変することが可能であり、この改変は、フォールディングまたは
再生に際して、正しくない分子内ジスルフィド架橋の形成を防ぐことを伴いうる。こうし
50
(16)
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た改変、置換、交換、挿入または欠失のための技術は、当業者に周知である（例えば米国
特許第４，５１８，５８４号を参照されたい）。別の例として、Ｆｌｔ３リガンド細胞外
ドメインのＮ−グリコシル化部位を修飾して、グリコシル化を妨げてもよく、これによっ
て哺乳動物および酵母発現系における炭水化物減少類似体（ａｎａｌｏｇ）の発現が可能
になる。真核ポリペプチドのＮ−グリコシル化部位はアミノ酸トリプレットＡｓｎ−Ｘ−
Ｙにより特徴付けられ、ここでＸはＰｒｏ以外のいかなるアミノ酸でもよく、そしてＹは
ＳｅｒまたはＴｈｒである。これらのトリプレットをコードするヌクレオチド配列に対す
る適切な置換、付加または欠失の結果、Ａｓｎ側鎖での炭水化物残基の付着が防止される
であろう。例えば、Ａｓｎが異なるアミノ酸によって交換されるように選択される、単一
のヌクレオチドの改変は、Ｎ−グリコシル化部位を不活性化するのに十分である。あるい
10
は、ＳｅｒまたはＴｈｒを別のアミノ酸、例えばＡｌａと交換可能である。ポリペプチド
のＮ−グリコシル化部位を不活性化するための既知の方法には、米国特許第５，０７１，
９７２号およびＥＰ ２７６，８４６に記載されるものが含まれる。本発明の範囲内のさ
らなる変異体には、グリコシル基、脂質、リン酸基、アセチル基等の他の化学部分と共有
コンジュゲートまたは凝集コンジュゲートを形成することによって修飾され、誘導体を生
成しうるポリペプチドが含まれる。共有誘導体は、アミノ酸側鎖上の官能基に、あるいは
ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に、化学部分を連結することによって、調製可能であ
る。好ましくは、こうした改変、置換、交換、挿入または欠失は、Ｆｌｔ３リガンドの生
物学的活性を減少させない。１つの例は、天然型と本質的に同一の結合親和性で結合する
変異体である。結合親和性は、例えば米国特許第５，５１２，４５７号に記載されるよう
20
に、そして本明細書に示すように、慣用法によって測定可能である。
【００３５】
さらなるＦｌｔ３リガンド誘導体には、Ｎ末端またはＣ末端融合体としての組換え培養
における合成によるなどの、他のポリペプチドまたはポリペプチドと該ポリペプチドの共
有または凝集コンジュゲートが含まれる。融合ポリペプチドの例を、オリゴマーと関連し
て以下に論じる。さらに、融合ポリペプチドは、精製および同定を容易にするため付加す
るペプチドを含んでなることが可能である。こうしたペプチドには、例えば、ポリ−Ｈｉ
ｓまたは米国特許第５，０１１，９１２号およびＨｏｐｐら， Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｙ ６：１２０４， １９８８に記載される抗原性同定ペプチドが含まれる。こうし
たペプチドの１つはＦＬＡＧ（登録商標）ペプチドであり、該ペプチドは抗原性が高く、
30
そして特異的なモノクローナル抗体が可逆的に結合するエピトープを提供し、発現した組
換えポリペプチドの迅速なアッセイおよび容易な精製を可能にする。４Ｅ１１と称される
ネズミハイブリドーマは、米国特許第５，０１１，９１２号に記載されるように、特定の
二価金属陽イオンの存在下でＦＬＡＧ（登録商標）ペプチドに結合するモノクローナル抗
体を産生する。４Ｅ１１ハイブリドーマ細胞株は、寄託番号第ＨＢ９２５９号でアメリカ
ン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託されている。ＦＬＡＧ（登録商標）ペプチ
ドに結合するモノクローナル抗体は、Ｅａｓｔｍａｎ Ｋｏｄａｋ Ｃｏ．， Ｓｃｉｅ
ｎｔｉｆｉｃ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ、コネティカット州
ニューヘブンより入手可能である。
【００３６】
40
本明細書記載の方法で使用可能なＦｌｔ３リガンドのさらなる態様には、Ｆｌｔ３リガ
ンド、Ｆｌｔ３リガンドの１以上の断片、または本明細書に開示するとともに、上に列挙
する米国特許に開示される、Ｆｌｔ３リガンドの誘導体または変異体型のいずれかを含有
するオリゴマーまたは融合ポリペプチドが含まれる。特定の態様において、オリゴマーは
可溶性Ｆｌｔ３リガンドポリペプチドを含んでなる。オリゴマーは、二量体、三量体、ま
たはより高次のオリゴマーを含む、共有結合または非共有結合多量体型であることが可能
である。別の態様において、Ｆｌｔ３リガンドオリゴマーは、ポリペプチドに融合してい
るペプチドであって、オリゴマー化を促進する特性を有する前記ペプチド部分間の共有ま
たは非共有相互作用を介して連結されている、多数のＦｌｔ３リガンドポリペプチドを含
んでなる。以下により詳細に記載するように、付着するポリペプチドのオリゴマー化を促
50
(17)
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進することが可能なペプチドの中に、ロイシンジッパーおよび抗体由来の特定のポリペプ
チドがある。
【００３７】
免疫グロブリンに基づくオリゴマー。可溶性Ｆｌｔ３リガンドおよびその断片を、免
疫グロブリンのＦｃ部分に、直接、またはリンカー配列を通じて、融合させることが可能
である。Ｆｌｔ３リガンドを二価型にするため、こうした融合は、ＩｇＧ分子のＦｃ部分
に対しての融合であることが可能である。他の免疫グロブリンアイソタイプもまた用いて
、こうした融合体を生成することが可能である。例えば、ポリペプチド−ＩｇＭ融合は、
本発明のポリペプチドの十価型を生成するであろう。本明細書において、用語「Ｆｃポリ
ペプチド」には、抗体のＦｃ領域のＣＨドメインのいずれかまたはすべてを含んでなるＦ
10
ｃ領域で構成される、ポリペプチドの天然型および突然変異タンパク質（ｍｕｔｅｉｎ）
型が含まれる。二量体化を促進するヒンジ領域を含有する、こうしたポリペプチドの一部
切除（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）型もまた含まれる。好ましいＦｃポリペプチドは、ヒトＩｇ
Ｇ１抗体由来のＦｃポリペプチドを含んでなる。１つの代替物として、免疫グロブリン由
来のポリペプチドを用いて、オリゴマーを調製する。抗体由来ポリペプチドの多様な部分
（Ｆｃドメインを含む）に融合している特定の異種ポリペプチドを含んでなる融合ポリペ
プチドの調製は、例えば、Ａｓｈｋｅｎａｚｉら（ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８８：１０５３５
， １９９１）；Ｂｙｒｎら（Ｎａｔｕｒｅ， ３４４：６７７， １９９０）；並びに
ＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈおよびＡｒｕｆｆｏ（“Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｍ
ｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｆｕｓｉｏｎ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ”， Ｃｕｒｒｅ
20
ｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ中， Ｓｕｐｐｌ．４， １０
．１９．１−１０．１９．１１ページ， １９９２）に記載されている。免疫グロブリン
に基づくオリゴマーの調製法および使用法は、当該技術分野に周知である。Ｆｌｔ３リガ
ンドの１つの態様は、Ｆｌｔ３リガンドを抗体由来のＦｃポリペプチドに融合することに
よって生成される２つの融合ポリペプチドを含んでなる二量体に関する。Ｆｌｔ３リガン
ド／Ｆｃ融合ポリペプチドをコードする遺伝子融合体を適切な発現ベクターに挿入する。
組換え発現ベクターで形質転換した宿主細胞でＦｌｔ３リガンド／Ｆｃ融合ポリペプチド
を発現し、そして抗体分子によく似た形で集合させ、その結果、Ｆｃ部分間に鎖間ジスル
フィド結合が形成され、二価分子を生じるのを可能にする。ＰＣＴ出願ＷＯ ９３／１０
１５１に記載される１つの適切なＦｃポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１抗体のＦｃ領域のＮ
30
末端ヒンジ領域から天然Ｃ末端に渡る一本鎖ポリペプチドである。別の有用なＦｃポリペ
プチドは、米国特許第５，４５７，０３５号およびＢａｕｍら（ＥＭＢＯ Ｊ． １３：
３９９２−４００１， １９９４）に記載されるＦｃ突然変異タンパク質である。この突
然変異タンパク質のアミノ酸配列は、アミノ酸１９がＬｅｕからＡｌａに変化し、アミノ
酸２０がＬｅｕからＧｌｕに変化し、そしてアミノ酸２２がＧｌｙからＡｌａに変化して
いることを除けば、ＷＯ ９３／１０１５１に示される天然Ｆｃ配列のものと同一である
。該突然変異タンパク質は、Ｆｃ受容体に対し、減少した親和性を示す。Ｆｃ部分を含ん
でなる上述の融合ポリペプチド（およびそれから形成されるオリゴマー）は、ポリペプチ
ドＡまたはポリペプチドＧカラム上のアフィニティークロマトグラフィーによる容易な精
製という利点を提供する。他の態様において、本発明のポリペプチドを、抗体重鎖または
40
軽鎖の可変部に対して置換することが可能である。融合ポリペプチドが抗体の重鎖および
軽鎖両方で作成されている場合、４つものＦｌｔ３リガンド細胞外領域を持つオリゴマー
を形成することが可能である。
【００３８】
ペプチドリンカーに基づくオリゴマー。あるいは、オリゴマーは、ペプチドリンカー
（スペーサーペプチド）を含み、または含まず、多数のＦｌｔ３リガンドを含んでなる融
合ポリペプチドである。適切なペプチドリンカーの中には、米国特許第４，７５１，１８
０号および第４，９３５，２３３号に記載されるものがある。適切な慣用的技術いずれか
を用いて、所望のペプチドリンカーをコードするＤＮＡ配列を、本発明のＤＮＡ配列間に
、そして該配列と同じ読み枠で挿入することが可能である。例えば、リンカーをコードす
50
(18)
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る、化学的に合成したオリゴヌクレオチドを、配列間に連結することが可能である。特定
の態様において、融合ポリペプチドは、ペプチドリンカーによって分離された、２∼４の
可溶性Ｆｌｔ３リガンドポリペプチドを含んでなる。適切なペプチドリンカー、他のポリ
ペプチドとの組み合わせ、およびその使用は、当業者に周知である。
【００３９】
ロイシンジッパー。Ｆｌｔ３リガンドのオリゴマーを調製するための別の方法は、ロ
イシンジッパーの使用を伴う。ロイシンジッパードメインは、該ドメインが見られるポリ
ペプチドのオリゴマー化を促進するペプチドである。ロイシンジッパーは、元々、いくつ
かのＤＮＡ結合ポリペプチドで同定され（Ｌａｎｄｓｃｈｕｌｚら， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１７５９， １９８８）、そして以来、多様な異なるポリペプチドで見出されて
10
きている。既知のロイシンジッパードメインの中には、二量体化または三量体化する天然
存在ペプチドおよび誘導体がある。ジッパードメイン（本明細書において、オリゴマー化
ドメインまたはオリゴマー形成ドメインとも称する）は、しばしば、他のアミノ酸が組み
入れられた４または５のロイシン残基を持つ、７アミノ酸反復を含んでなる。ロイシンジ
ッパーの使用およびロイシンジッパーを用いたオリゴマーの調製は、当該技術分野に周知
である。
【００４０】
Ｆｌｔ３リガンドは、全能造血幹細胞および前駆細胞の増殖とともに、リンパ系および
骨髄系経路の細胞系譜数に影響を及ぼす。広い範囲のコロニー刺激因子、インターロイキ
ンおよび可溶性トロンボポエチンとともに、拘束された前駆細胞および原始的前駆細胞の
20
増殖およびコロニー形成を促進する相乗効果が立証されている。マウスにＦｌｔ３リガン
ドをｉｎ ｖｉｖｏ投与すると、造血前駆細胞の有意な拡大が生じる。特に、Ｆｌｔ３リ
ガンドは、骨髄（５倍）および脾臓（１００倍）で前駆細胞数に有意な増加を引き起こす
とともに、これらの組織における未成熟Ｂ細胞数を増加させる。処置後、末梢血において
、造血前駆細胞数の２００∼５００倍の増加が報告されている。Ｆｌｔ３リガンドは、単
独で、そして他のサイトカイン（ＩＬ−３、ＩＬ−６またはＩＬ−７）と組み合わせて、
最も原始的な胸腺前駆細胞からのＴ細胞発展を優先的に刺激することが示されてきている
。さらに、ｉｎ ｖｉｔｒｏ研究によって、Ｆｌｔ３リガンドが、胎児肝臓、骨髄または
胸腺ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞前駆体の拡大を誘導するとともに、前駆細胞からのＣ
Ｄ５６＋ ＮＫ細胞の生成を同時刺激する（ＩＬ−１５のみと、またはＩＬ−６／ＩＬ−
30
７／ＩＬ−１５の組み合わせと）ことが示されている。Ｆｌｔ３リガンドはまた、ＮＫ細
胞活性、ＮＫ細胞増殖応答、およびリンパ球活性化キラー（ＬＡＫ）細胞の生成を増加さ
せることも示されてきており、これによって、抗癌療法および抗ウイルス療法におけるＦ
ｌｔ３リガンドの潜在的な役割が示唆される。Ｆｌｔ３リガンドの概説には、“Ｆｌｔ３
−ｌｉｇａｎｄ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｎ Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅａｃ
ｔｉｖｉｔｙ” Ｃｙｔｏｋｉｎｅ， ｖｏｌ．１２， ｎｏ．２， ｐｐ ９７−１０
０（２０００）を参照されたい。
【００４１】
Ｆｌｔ３リガンドの投与（ｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏ両方）によって、造
血幹細胞および前駆細胞の標的化された拡大が引き起こされ、多数の組織部位で、樹状細
40
胞（ＤＣ）の全身の拡大が生じる。樹状細胞は、別個の形態および広い組織分布を持つ異
種性細胞集団を含んでなる。樹状細胞系および免疫におけるその役割は、Ｓｔｅｉｎｍａ
ｎ， Ｒ．Ｍ．， Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ９：２７１−２９６（
１９９１）に概説されており、そして該文献は本明細書に援用される。樹状細胞は、ＭＨ
Ｃ制限Ｔ細胞を感作するのに高い能力を有し、そしてＴ細胞発展および寛容中の自己抗原
、並びに免疫中の外来（ｆｏｒｅｉｇｎ）抗原両方の抗原を、ｉｎ ｓｉｔｕでＴ細胞に
提示するのに非常に有効である。
【００４２】
本明細書において、樹状細胞またはＤＣは、リンパ組織または非リンパ組織に見られる
、形態学的に類似の細胞種の多様な集団のメンバーいずれかを指す。ＤＣは、一種の「プ
50
(19)
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ロフェッショナル」抗原提示細胞であり、そしてＭＨＣ制限Ｔ細胞を感作する高い能力を
有する。細胞系譜および成熟段階に応じて、ＤＣは、機能、または表現型、特に細胞表面
表現型によって、認識可能である。これらの細胞は、独特の形態、食作用能／エンドサイ
トーシス能、高レベルの表面ＭＨＣクラスＩＩ発現、およびＴ細胞、特に未刺激Ｔ細胞に
抗原を提示する能力によって特徴付けられる（Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕら， Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １８：７６７−８１１， ２０００およびＵＳＰＮ ６
，２７４，３７８、前記文献は、こうした細胞の説明に関して、本明細書に援用される）
。例示目的のみのため、本明細書に記載するＤＣは、ベール様の突起、および細胞表面マ
+
+
+
+
ーカーＣＤ１ａ 、ＣＤ４ 、ＣＤ８６ 、またはＨＬＡ−ＤＲ の発現によって特徴付け可
+
能である。成熟ＤＣは、典型的にはＣＤ１１ｃ であり、一方、ＤＣの前駆体には、表現
-
10
-
型ＣＤ１１ｃ 、ＩＬ−３Ｒα低を有するもの；およびＣＤ１１ｃ ＩＬ−３Ｒα高であ
るものが含まれる。ｉｎ ｖｉｖｏで、マウスにおいて、ＧＭ−ＣＳＦで処置すると、Ｃ
Ｄ１１ｂ高、ＣＤ１１ｃ高 ＤＣが優先的に拡大され、一方、Ｆｌｔ３リガンドは、ヒト
+
-
において、ＣＤ１１ｃ ＩＬ−３Ｒα低 ＤＣおよびＣＤ１１ｃ ＩＬ−３Ｒα高 Ｄ
Ｃ前駆細胞を拡大することが示されている。機能的には、抗原提示の決定に関する、いか
なる好適なアッセイによって、樹状細胞を同定することも可能である。こうしたアッセイ
には、試験抗原の提示によって、初回抗原刺激されたＴ細胞または未刺激Ｔ細胞を刺激す
る能力を試験し、その後、Ｔ細胞増殖、ＩＬ−２の放出などを決定することが含まれる可
能性がある。
【００４３】
20
ワクチン
ワクチンは、本明細書において、１以上のアジュバント、希釈剤、キャリアー等と配合
され、組み合わされ、混合され、これらに取り込まれ、そして／またはこれらとマトリッ
クス化された１以上の抗原を含んでなり、適切な経路いずれかによって被験者に投与され
て、該抗原に対する防御免疫応答および／または改善免疫応答を誘導する。ワクチンは、
疾患の防止用であることが可能であり、そして感染または疾患開始前に投与することが可
能である。あるいは、ワクチンは、被験者が疾患または感染と診断された後に、療法目的
で被験者に何回投与することも可能である。抗原を１以上のハプテンと複合体化すること
が可能である。ワクチンは、天然、誘導体化、合成、組換えまたは非組換え抗原を含んで
なることが可能である。さらに、ワクチンには、１以上の抗原をコードするポリヌクレオ
30
チド配列を含有する生ウイルスベクターが含まれる。生ウイルスベクターの例には、レト
ロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、アルファウイル
ス、セムリキ森林ウイルスおよびシンビス（ｓｉｎｂｉｓ）ウイルスが含まれる。さらに
、ワクチンは、１以上の抗原をコードするポリヌクレオチド配列とともに、必要なプロモ
ーター、エンハンサーおよび他の必要な制御要素を含有するポリヌクレオチドワクチン（
一般的に、ＤＮＡワクチンと称される）などの非ウイルスベクターを含んでなることが可
能である。ポリヌクレオチドワクチンは、裸のポリヌクレオチドおよび／またはリポソー
ムに取り込まれたポリヌクレオチドおよび／または粒子仲介遺伝子輸送であることが可能
である。ポリヌクレオチドワクチンの搬送を容易にするのに使用可能な他の剤には、ポリ
ペプチド、ペプチド、多糖コンジュゲート、脂質等が含まれる。ポリヌクレオチドは、Ｄ
40
ＮＡおよび／またはＲＮＡであることが可能である。生ウイルスベクターおよびポリヌク
レオチドワクチンを、当該技術分野に周知のキャリアーまたは希釈剤と配合することが可
能である。
【００４４】
以下は、いずれかの組み合わせで用いて、１以上のワクチンを形成可能である、アジュ
バントおよび抗原の態様であり、ワクチンは続いて、本明細書に記載するＦｌｔ３リガン
ド免疫プロトコルおよび治療法／防止法のあらゆる態様において使用可能である。
【００４５】
Ａ．Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルで使用するアジュバントの態様
用語、アジュバントは、本出願の目的のため、ワクチンに取り込まれた際に、抗原に対
50
(20)
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する宿主の免疫応答を加速し、延長し、増進し、増大させ、そして／または増強するよう
に一般的に作用する、抗原とは異なる物質いずれかを指す。宿主の免疫応答には、抗原特
異的体液性免疫応答および細胞仲介免疫応答が含まれる。宿主の免疫応答にはまた、必ず
しも抗原特異的でないが、ＮＫ細胞、好中球、抗原提示細胞等の数の増加および／または
活性化など、抗原に対する防御免疫応答および／または改善免疫応答に関与する、免疫応
答も含まれる。アジュバントを記載するのに用いられる、当該技術分野のさらなる用語に
は、免疫調節剤、免疫増強剤および免疫増進剤が含まれる。本明細書において、アジュバ
ントには、用語、免疫調節剤、免疫増強剤および免疫増進剤に含まれるこうした組成物す
べてが含まれる。Ｆｌｔ３リガンド自体、免疫応答を増強する際の、そして特に癌に対す
る防御免疫応答を増強する際の役割がよく立証されているため、アジュバントとみなされ
10
ることが理解される。しかし、明確にし、そして混乱を避けるため、Ｆｌｔ３リガンドは
、本明細書において、アジュバントとは呼ばれないであろう。
【００４６】
アジュバントは、１以上の機構によって、その生物学的影響を発揮すると考えられ、こ
の機構には、抗原の表面領域を増加させ；体における抗原の保持を延長し、こうしてリン
パ系が抗原にアクセスする時間を与え；抗原の放出を遅らせ；抗原をマクロファージに標
的化し；抗原取り込みを増加させ；抗原プロセシングを上方制御し；サイトカイン放出を
刺激し；Ｂ細胞スイッチングおよび成熟を刺激し、そして／または免疫抑制細胞を取り除
き；マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞およびＴ細胞を活性化し；または別の方式で免疫
系の細胞の非特異的活性化を誘発することが含まれる（例えばＷａｒｒｅｎら， １９８
20
６ Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４：３６９を参照されたい）。一般的に言って
、アジュバントは、非常に異質の化合物群を含んでなるが、当業者は、従来、油エマルジ
ョン（例えばフロイントのアジュバント）、ミネラル化合物（例えばミョウバン）、細菌
産物（例えば百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ））、リポソームお
よび免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）などの、いくつかの広いカテゴリーを認識してきた。
【００４７】
Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルで使用可能な、それとともに、治療法および／または
防止法で使用可能な、１以上のワクチンを作成するのに使用しうるアジュバントの例には
、限定されるわけではないが：ＡＤＪＵＭＥＲ
T M
（ポリホスファゼン）；リン酸アルミニ
ウムゲル；藻類グルカン類；アルガミュリン（ａｌｇａｍｍｕｌｉｎ）；水酸化アルミニ
30
ウムゲル（ミョウバン）；高タンパク質吸着性（ａｄｓｏｒｂｅｎｃｙ）水酸化アルミニ
ウムゲル；低粘性水酸化アルミニウムゲル；ＡＦまたはＳＰＴ（スクアレン（５％）、Ｔ
ｗｅｅｎ８０（０．２％）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ１２１（１．２５％）、リン酸緩衝生
理食塩水ｐＨ７．４のエマルジョン）；ＡＶＲＩＤＩＮＥ
Ｙ Ｒ１００５
T M
T M
（プロパンジアミン）；ＢＡ
（（Ｎ−（２−デオキシ−２−Ｌ−ロイシルアミノ−ｂ−Ｄ−グルコピ
ラノシル）−Ｎ−オクタデシルドデカノイルアミド・ヒドロアセテート）；ＣＡＬＣＩＴ
ＲＩＯＬ
T M
T M
（１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３）；リン酸カルシウムゲル；ＣＡＰ
（リン酸カルシウムナノ粒子）；コレラ・ホロトキシン、コレラ毒素Ａ１−プロテイン
Ａ−Ｄ断片融合タンパク質、コレラ毒素Ｂサブユニット；ＣＲＬ１００５（ブロック・コ
ポリマーＰ１２０５）；サイトカイン含有リポソーム；ＤＤＡ（ジメチルジオクタデシル
40
アンモニウムブロミド）；ＤＨＥＡ（デヒドロエピアンドロステロン）；ＤＭＰＣ（ジミ
リストイル・ホスファチジルコリン）；ＤＭＰＧ（ジミリストイル・ホスファチジルグリ
セロール）；ＤＯＣ／ミョウバン複合体（デオキシコール酸ナトリウム塩）；フロイント
の完全アジュバント；フロイントの不完全アジュバント；ガンマ・イヌリン；Ｇｅｒｂｕ
アジュバント（以下の混合物：ｉ）Ｎ−アセチルグルコサミニル−（Ｐｌ−４）−Ｎ−ア
セチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−グルタミン（ＧＭＤＰ）、ｉｉ）ジメチルジオクタ
デシルアンモニウムクロリド（ＤＤＡ）、ｉｉｉ）亜鉛Ｌ−プロリン塩複合体（ＺｎＰｒ
ｏ−８））；ＧＭ−ＣＳＦ；ＧＭＤＰ（Ｎ−アセチルグルコサミニル−（ｂ１−４）−Ｎ
−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン）；Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ（１−
（２−メチプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）；Ｉｍｍ
50
(21)
Ｔｈｅｒ
T M
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（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−イ
ソＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−グリセロールジパルミテート）；ＤＲＶ類（脱水−再水和小胞か
ら調製した免疫リポソーム）；インターフェロン−γ；インターロイキン−１β；インタ
ーロイキン−２；インターロイキン−７；インターロイキン−１２；ＩＳＣＯＭＳ
疫刺激複合体）；ＩＳＣＯＰＲＥＰ ７．０．３．
Ｅ
T M
T M
T M
（免
；リポソーム；ＬＯＸＯＲＩＢＩＮ
（７−アリル−８−オキソグアノシン）；ＬＴ経口アジュバント
T M
（大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）不安定内毒素プロトキシン）；組成物いずれかの微小球体および微小粒子；Ｍ
Ｆ５９
T M
；（スクアレン・水エマルジョン）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ ＩＳＡ ５１
製不完全フロイントアジュバント）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ ＩＳＡ ７２０
油アジュバント）；ＭＰＬ
T M
T M
T M
（精
（代謝可能
（３−Ｑ−デスアシル−４’−モノホスホリル脂質Ａ）；Ｍ
10
ＴＰ−ＰＥおよびＭＴＰ−ＰＥリポソーム（（Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグ
ルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−（ヒ
ドロキシ−ホスホリルオキシ））エチルアミド、一ナトリウム塩）；ＭＵＲＡＭＥＴＩＤ
Ｅ
T M
ＮＥ
（Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＣＨ３）；ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩ
T M
およびＤ−ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥ
T M
（Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ｔｈｒ−Ｄ−イ
ソＧｌｎ−ｓｎ−グリセロールジパルミトイル）；ＮＡＧＯ（ノイラミニダーゼ−ガラク
トースオキシダーゼ）；組成物いずれかのナノ球体またはナノ粒子；ＮＩＳＶ類（非イオ
ン性界面活性剤小胞）；ＰＬＥＵＲＡＮ
T M
（β−グルカン）；ＰＬＧＡ、ＰＧＡおよびＰ
ＬＡ（乳酸およびグリコール酸のホモポリマーおよびコポリマー；ミクロ粒子／ナノ粒子
）；ＰＬＵＲＯＮＩＣ Ｌ１２１
Ｓ
T M
T M
；ＰＭＭＡ（ポリメチルメタクリレート）；ＰＯＤＤ
20
（オロテイノイド（ｏｒｏｔｅｉｎｏｉｄ）微小球体）；ポリエチレンカルバメート
誘導体；ポリｒＡ：ポリｒＵ（ポリアデニル酸−ポリウリジル酸複合体）；ポリソルベー
ト８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）；渦巻き型タンパク質（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｏｃｈｌｅａ
ｔｅｓ）（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ， Ｉｎｃ．、アラバマ州アラバス
ター）；ＳＴＩＭＵＬＯＮ
T M
（ＱＳ−２１）；Ｑｕｉｌ−Ａ（Ｑｕｉｌ−Ａサポニン）；
Ｓ−２８４６３（４−アミノ−オテック，−ジメチル−２−エトキシメチル−ｌＨ−イミ
ダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール）；ＳＡＦ−１
T M
（Ｓｙｎｔｅｘアジュバ
ント配合物）；センダイ・プロテオリポソームおよびセンダイ含有脂質マトリックス；Ｓ
ｐａｎ−８５（トリオレイン酸ソルビタン）；Ｓｐｅｃｏｌ（Ｍａｒｃｏｌ ５２、Ｓｐ
ａｎ ８５およびＴｗｅｅｎ ８５のエマルジョン）；スクアレンまたはＲｏｂａｎｅ（
30
登録商標）（２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチルテトラコサンおよび２，６
，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２テトラコサ
ヘキサエン）；ステアリルチロシン（オクタデシルチロシンヒドロクロリド）；Ｔｈｅｒ
ａｍｉｄｅ（登録商標）（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａ
ｌａ−Ｄ−イソＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−ジパルミトキシプロピルアミド）；スレオニル−Ｍ
ＤＰ（Ｔｅｒｍｕｒｔｉｄｅ
T M
または［ｔｈｒ１］−ＭＤＰ；Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ
−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン）；Ｔｙ粒子（Ｔｙ−ＶＬＰまたはウイルス様粒子）
；Ｗａｌｔｅｒ Ｒｅｅｄリポソーム（水酸化アルミニウムに吸着させた脂質Ａを含有す
るリポソーム）等が含まれる。
【００４８】
40
１つの態様において、デポ様特性を有し、抗原をリンパ節に散在させるアジュバントを
ワクチン配合物中で用いて、これをその後、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコル、並びに疾
患および／または感染を治療し、そして／または防止する関連方法において、用いる。さ
らに別の態様において、不完全フロイントアジュバントをワクチン配合物に用いて、そし
てＦｌｔ３リガンド免疫プロトコル、並びに疾患および／または感染を治療し、そして／
または防止する関連方法において、用いる。
【００４９】
さらなる態様において、被験者のＴヘルパー細胞を活性化してＩＬ−２を分泌させる分
子、例えば１以上のＭＨＣ−ＩＩエピトープを有する分子が、ワクチン配合物中に含まれ
ることが可能である。特にＣＤ８＋ ＣＴＬ応答を増進するＴヘルパー活性化分子は、ワ
50
(22)
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クチン配合物のさらなる抗原として、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコル中に含まれること
が可能である。例えばキーホールリンペット（ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ）ヘモシア
ニン（ＫＬＨ）、または当該技術分野に知られる、他の適切なＴヘルパー抗原とともに、
同種異系細胞などの全細胞が、ワクチン配合物中に含まれることが可能である。
【００５０】
Ｂ．Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコル中で用いる抗原の態様
抗原は、本明細書において、抗体またはＴ細胞受容体に結合可能な分子いずれかを含ん
でなる。必要な場合、抗原をハプテンにカップリングして、これらを免疫原性にすること
が可能である。抗原は、本明細書において、免疫原を含み、免疫原は、被験者において、
免疫応答を誘導する抗原である。
10
【００５１】
抗原は、アレルゲン、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫および他の感染性病原体由来の産
物であることが可能であり；自己免疫疾患を促進する分子、または腫瘍抗原、腫瘍、並び
に腫瘍性臓器および組織もまた、含まれる。より具体的には、抗原の例は、全不活性化生
物および細胞、生存弱毒化生物、全細胞（自己、同種異系および／または同系であること
が可能な生細胞または死細胞）、細胞断片、細胞成分分画、細胞膜等を含んでなる。タン
パク質、サブユニットタンパク質、多量体サブユニットタンパク質、ポリペプチド、ペプ
チド、合成ペプチド等の形とともに、炭水化物およびグリコシル化タンパク質の形である
ことが可能な、上述のカテゴリー由来の免疫原性部分またはエピトープが含まれると理解
される。抗原はまた、一般の当業者に周知の組換えＤＮＡ技術によっても産生可能である
20
。以下に記載するように、当該技術分野に知られるものから、１以上の種の癌または感染
細胞に特異的な抗原が選択可能である。また、抗原は、腫瘍抗原、あるいは細菌抗原また
はウイルス抗原などの、被験者に既に存在するものであることが可能である。イムノアッ
セイによって、または免疫応答を生じる能力によって決定されるように、上述の抗原は、
その抗原性または免疫原性に関して選択可能である。用語「免疫原性」は、抗原が免疫応
答を誘導する相対的な有効性を意味する。
【００５２】
多様な態様に使用可能な抗原の典型的なものには、限定されるわけではないが、以下の
表１に記載するものが含まれる。潜在的に有用な抗原、またはその誘導体は、病原体の感
染性の中和における該抗原の関与（こうした病原体による感染を治療するかまたは防止す
30
ることが望ましい場合）（Ｎｏｒｒｂｙ， １９８５， Ｓｕｍｍａｒｙ， Ｖａｃｃｉ
ｎｅｓ ８５中， Ｌｅｍｅｒら（監修）， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， ニューヨーク州コールドスプリングハーバー， ｐｐ．３８８
−３８９）、種または群特異性、被験者の抗血清または免疫細胞による認識、および／ま
たは抗原に特異的な抗血清または免疫細胞の防御効果の立証など、多様な規準で同定可能
である。
【００５３】
別の態様において、本明細書に提示するＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルは、癌の治療
または防止に使用可能である。ワクチンは、アジュバント、キャリアーおよび／または希
釈剤と配合した１以上の腫瘍抗原を含んでなることが可能である。腫瘍抗原（癌抗原とも
40
称される）は、単離されていることが可能である、すなわち部分的に精製された、細胞に
結合したまたは融合タンパク質のある型であることが可能である。癌抗原は、正常分化抗
原；イントロン配列；別のオープンリーディングフレーム；単一塩基突然変異；および、
発現の異常な転写後調節、染色体再配置またはプロセシングを有するタンパク質に由来す
ることが可能である。多数の腫瘍抗原が当該技術分野に周知であり、そしてＦｌｔ３リガ
ンド免疫プロトコルで使用可能であって、こうしたものには、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ， Ｓ
．Ａ．， Ｎａｔｕｒｅ， ｖｏｌ．４１１， ｐｐ．３８０−３８４， １７ Ｍａｙ
２００１およびＭｉｎｅｖ， Ｂ．ら， Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｔｈｅｒ．， Ｖｏ
ｌ．８１， Ｎｏ．２， ｐｐ．１２１−１３９， １９９９に記載されるものなどがあ
る。特定の態様において、ワクチンに使用される癌細胞および前腫瘍性細胞は、哺乳動物
50
(23)
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起源のものであり、そして別の態様において、ヒト癌細胞を抗原の供給源として使用可能
である。癌細胞とともにその抗原または細胞成分分画いずれかは、自己または同種異系で
あることが可能である。異常に増殖する組織、循環白血病細胞、転移性病変とともに固形
腫瘍組織に見られる癌細胞が使用可能である。さらに、前腫瘍性病変、癌組織または癌細
胞由来の細胞株もまた、細胞または細胞株が、標的癌細胞上の抗原と共通の、少なくとも
１以上の抗原決定基を有するならば、使用可能である。
【００５４】
当該技術分野に知られる方法いずれかによって、癌細胞および前腫瘍性細胞が同定可能
である。例えば、形態、酵素アッセイ、増殖アッセイ、細胞遺伝学的性質決定、ＤＮＡマ
ッピング、ＤＮＡ配列決定、癌を引き起こすウイルスの存在、あるいは、突然変異誘発物
10
質または癌を引き起こす剤への曝露歴、画像化などによって、癌細胞を同定可能である。
癌細胞はまた、手術、内視鏡、または他の生検技術によって獲得可能である。癌細胞はま
た、限定されるわけではないが、アフィニティークロマトグラフィーおよび蛍光活性化細
胞分取などの、当該技術分野に知られる生化学的方法または免疫学的方法いずれかによっ
て、獲得または精製可能である。癌組織、癌細胞または細胞株は、単一個体から獲得可能
であるし、また数個体からプール可能である。癌細胞のクローン集団、均質な集団、また
は精製集団を用いることは必須ではない。ワクチンに用いる細胞上に、標的癌細胞上の少
なくとも１以上の抗原決定基が存在する限り、ｉｎ ｖｉｖｏでの最終的な標的である細
胞（例えば意図されるレシピエントの腫瘍由来の細胞）を用いる必要もない。さらに、遠
位転移由来の細胞を用いて、原発性癌に対する免疫原性組成物を調製することが可能であ
20
る。混合物中のかなりの数の細胞が癌細胞であり、そして標的癌細胞と少なくとも１つの
抗原決定基を共有するならば、細胞混合物が使用可能である。
【００５５】
抗体への結合を検出することによって、推定上の抗原の免疫原性または抗原性を決定す
るため、当該技術分野に知られる多様なイムノアッセイが使用可能であり、これらには、
限定されるわけではないが、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素連結免疫吸着アッ
セイ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫放射線測定アッセイ、ゲル拡散沈降素反
応、免疫拡散アッセイ、ｉｎ ｖｉｖｏイムノアッセイ（例えばコロイド性金、酵素また
は放射性同位体標識を用いるもの）、ウェスタンブロット、免疫沈降反応、凝集アッセイ
（例えばゲル凝集アッセイ、赤血球凝集素アッセイ）、補体固定アッセイ、免疫蛍光アッ
セイ、プロテインＡアッセイ、および免疫電気泳動アッセイなどの技術を用いた、競合的
アッセイ系および非競合的アッセイ系が含まれる。１つの側面において、一次抗体上の標
識を検出することによって、抗体結合を検出する。別の側面において、一次抗体に対する
二次抗体または試薬の結合を検出することによって、一次抗体を検出する。さらなる側面
において、二次抗体を標識する。イムノアッセイにおいて結合を検出する多くの手段が当
該技術分野に知られ、そして使用のために想定される。免疫原性を検出する１つの態様に
おいて、標準法、例えばｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性アッセイまたはｉｎ ｖｉｖｏ遅延
型過敏性アッセイによって、Ｔ細胞が仲介する応答をアッセイすることが可能である。
【００５６】
30
(24)
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【表１−１】
10
20
30
【００５７】
40
(25)
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【表１−２】
10
20
30
40
【００５８】
50
(26)
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【表１−３】
10
20
30
40
【００５９】
50
(27)
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ワクチンにはまた、本明細書において、アジュバントに加えて、またはアジュバントで
はなく、希釈剤、賦形剤および／またはキャリアーとともに配合された抗原も含まれる。
投与に適した配合物には、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、および配合物をレシピエントの
血液と等張にする溶質を含有可能な水性および非水性無菌注射溶液；並びに懸濁剤または
粘稠化剤を含有可能な水性および非水性無菌懸濁物が含まれる。抗原は、薬学的に有用な
組成物を調製するのに用いられる既知の方法にしたがって、配合可能である。これらを、
単一の活性成分として、または既定の徴候に適した他の既知の活性成分と共に、薬学的に
許容しうる希釈剤（例えば、生理食塩水、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、酢酸、およびリン酸緩衝溶
液）、保存剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン類）、乳化剤、可
溶化剤、アジュバントおよび／またはキャリアーと混合して組み合わせることが可能であ
10
る 。 薬 剤 組 成 物 に 適 し た 配 合 物 に は 、 Ｒ ｅ ｍ ｉ ｎ ｇ ｔ ｏ ｎ 'ｓ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍ ａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ
ｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， 第１６版， １９８０， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎ
ｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， ペンシルバニア州イーストンに記載されるものが含まれる。さら
に、こうした組成物は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、金属イオンと複合体化して
いるか、またはポリ酢酸、ポリグリコール酸、ヒドロゲル類、デキストラン等のポリマー
化合物に取り込まれているか、またはリポソーム、マイクロエマルジョン、ミセル、単層
もしくは多層小胞、赤血球ゴーストもしくはスフェロブラストに取り込まれていることが
可能である。リポソーム配合に適した脂質には、限定なしに、モノグリセリド類、ジグリ
セリド類、スルファチド類、リゾレシチン、リン脂質類、サポニン、胆汁酸類等が含まれ
る。
20
【００６０】
補助分子
補助分子は、本明細書において、癌、感染性疾患およびその症状の治療に使用可能な、
Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルにおいて、場合によって被験者に投与する分子である。
補助分子は、いずれかの機構によって、抗原に対する宿主免疫応答を加速し、延長し、増
進し、増大させ、または増強するよう作用しうる。例えば、サイトカイン、増殖因子等は
、免疫応答をさらに増進するかまたは調節するのに有用であろう。サイトカインには、限
定されるわけではないが、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、
１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−ア
ルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮ
30
Ｆファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０
結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク
質、ＣｐＧ配列、およびそれらの組み合わせからなる群より選択されるものが含まれる。
【００６１】
典型的には、サイトカイン、ケモカインおよび細胞表面分子は、細胞表面上の同族体（
ｃｏｇｎａｔｅ）に結合し、そして細胞内シグナルを伝達することによって、その生物学
的効果を発揮する。したがって、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルにおいて、結合タンパ
ク質が使用可能である。結合タンパク質は補助分子の生物学的効果を模倣するアゴニスト
性分子である。例えば、抗体などの結合タンパク質は、適切な受容体に結合し、そして補
助分子と同等かまたは類似のシグナルを伝達する。さらに、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロト
40
コルで用いる補助分子には、上述の分子の類似体であって、その天然アミノ酸配列に実質
的に類似のアミノ酸配列を有し、そしてその同族体に結合し、そして生物学的シグナルを
伝達することが可能な点で生物学的に活性である類似体が含まれる。当該技術分野に知ら
れ、そして本明細書に記載するような方法によって、こうした類似体を調製し、そして試
験することが可能である。
【００６２】
療法適用
Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルは、被験者において、疾患、障害および／または感染
を防止するかまたは治療するための組成物および方法を提供する。用語「治療する（ｔｒ
ｅａｔ）」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」および「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
50
(28)
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）」には、本明細書において、治癒的、防御的（例えば予防的）、対症的および／または
改善的治療が含まれる。先に言及したように、Ｆｌｔ３リガンドおよび補助分子は、天然
ポリペプチド、変異体、誘導体、オリゴマー、および生物学的活性断片など、本明細書に
記載するいかなる型であることも可能である。特定の態様において、Ｆｌｔ３リガンドお
よび補助分子は、可溶性ポリペプチドまたは可溶性オリゴマー型を含んでなる。
【００６３】
当業者は、典型的には、治療中の疾患に対して免疫学的に関連した抗原で被験者を免疫
することによって、免疫防御応答が疾患に対して生成されることが、免疫学およびワクチ
ン学の基本的な原理であることを認識する。したがって、癌、感染性疾患等を治療する方
法には、防止または治療しようとする疾患に対して免疫学的に関連した抗原を有するワク
10
チンが含まれる。例えば、癌ワクチンは、１以上の癌抗原およびアジュバントを含んでな
り、そしてより具体的には、前立腺癌ワクチンは、１以上の前立腺癌抗原およびアジュバ
ントを含んでなり、そして以下同様であろう。
【００６４】
被験者および特にヒトへのｉｎ ｖｉｖｏ投与のため、薬剤組成物を調製するのに用い
る既知の方法にしたがって、Ｆｌｔ３リガンドを配合可能である。Ｆｌｔ３リガンドを、
単一の活性成分として、または他の既知の活性成分と共に、薬学的に適切な希釈剤（例え
ば、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、アセテート、およびホスフェート）、保存剤（例えば、チメロサ
ール、ベンジルアルコール、パラベン類）、乳化剤、可溶化剤、アジュバントおよび／ま
たはキャリアーと混合して組み合わせることが可能である。用語、薬学的に許容しうる、
20
は、活性成分（単数または複数）の生物学的活性の有効性に干渉しない非毒性成分を意味
す る 。 適 切 な キ ャ リ ア ー お よ び そ の 配 合 物 は 、 Ｒ ｅ ｍ ｉ ｎ ｇ ｔ ｏ ｎ 'ｓ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍ ａ ｃ
ｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， 第１６版， １９８０， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉ
ｓｈｉｎｇ Ｃｏ．に記載される。さらに、こうした組成物は、ポリエチレングリコール
（ＰＥＧ）−もしくは溶解度および／または薬物動態学的半減期を増加させる他のこうし
た化合物、金属イオンと複合体化しているか、またはポリ酢酸、ポリグリコール酸、ヒド
ロゲル類等のポリマー化合物に取り込まれているか、またはリポソーム、マイクロエマル
ジョン、ミセル、単層もしくは多層小胞、赤血球ゴーストもしくはスフェロブラストに取
り込まれているＦｌｔ３リガンドを含有することが可能である。こうした組成物は、Ｆｌ
ｔ３リガンドの物理的状態、溶解度、安定性、ｉｎ ｖｉｖｏ放出速度、およびｉｎ ｖ
30
ｉｖｏクリアランス速度に影響を及ぼすであろう。
【００６５】
Ｆｌｔ３リガンド薬剤組成物は、局所、非経口、または吸入によるなどで、投与可能で
ある。用語「非経口」には、皮下注射、静脈内、筋内、槽内注射、または注入技術が含ま
れる。これらの組成物は、典型的には、Ｆｌｔ３リガンドの有効量を、単独でまたは他の
活性成分いずれかの有効量と組み合わせて含有するであろう。組成物に含有されるこうし
た投薬量および望ましい薬剤濃度は、意図される使用、被験者の体重および年齢、並びに
投与経路を含む、多くの要因に依存して変化する可能性がある。予備的用量は動物試験に
したがって決定可能であり、そしてヒト投与のための投薬量の見積もりを、当該技術分野
に認められる実施にしたがって、実行可能である。上記説明を心に留めて、Ｆｌｔ３リガ
40
ンドの典型的な投薬量は、平方メートルあたり約１０μｇ∼平方メートルあたり約１００
０μｇの範囲であることが可能である。好ましい用量範囲は、平方メートルあたり約１０
０μｇ∼平方メートルあたり約３００μｇ程度である。
【００６６】
Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコル、並びに治療方法および／または防止方法を実施する
際、Ｆｌｔ３リガンド、ワクチン、および場合によって補助分子の療法的有効量を被験者
に投与する。本明細書において、用語「有効量」は、被験者に意味のある利益、すなわち
免疫応答増進、関連する医学的状態（疾患、感染等）の治療、治癒、防止または改善、あ
るいはこうした状態の治療、治癒、防止または改善の速度の増加を示すのに十分な、各療
法剤（すなわちＦｌｔ３リガンド、ワクチン、および場合によって補助分子）または他の
50
(29)
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活性構成要素の総量を意味する。「有効量」を単独で投与する個々の療法剤に適用する際
、該用語は、療法剤単独を指す。組み合わせに適用する際、該用語は、組み合わせて、連
続して、または同時に投与する場合いずれであっても、療法効果を生じる成分を組み合わ
せた量を指す。本明細書において、句、療法剤の「有効量の投与」は、障害の重症度を反
映する少なくとも１つの指標において、改善、そして好ましくは持続した改善を誘導する
のに十分な量および時間、前記療法剤（単数または複数）で被験者を治療することを意味
する。患者が１日以上、または１週間以上離れた、少なくとも２回の機会に改善を示すな
らば、改善は「持続した」とみなされる。徴候または症状に基づいて改善の度合いを決定
し、そして決定はまた、生活の質（ｑｕａｌｉｔｙ−ｏｆ−ｌｉｆｅ）アンケートなどの
、患者に実施されるアンケートを使用することも可能である。治療の量および期間が十分
10
であるかどうか決定するため、患者の疾病の度合いを反映する多様な指標を評価すること
が可能である。選択された単数または複数の指標に関するベースライン値は、療法剤（単
数または複数）の最初の用量の投与前に、患者を検査することによって、確立される。好
ましくは、ベースライン検査は、最初の用量投与の約６０日以内に行う。急性症状を治療
するために療法剤（単数または複数）が投与される場合、最初の用量は、現実的にできる
だけ速やかに投与する。選択された単数または複数の指標のベースラインを越える改善を
被験者が明示するまで、療法剤を投与することによって、改善を誘導する。慢性状態を治
療する際、改善のこの度合いは、少なくとも１ヶ月以上、例えば、１、２、もしくは３ヶ
月またはそれより長い期間、あるいは無期限に、療法剤を反復投与することによって、得
られる。１∼６週間の期間、または単回用量であっても、特定の状態を治療するのに十分
20
である可能性がある。当業者は、被験者のニーズに適した治療を詳述するであろう。治療
後の被験者の疾病の度合いが、１以上の指標にしたがって、改善されているように見えた
としても、同一レベル、あるいは減少した用量または頻度で、無期限に治療を続けること
が可能である。ひとたび治療を減少させるかまたは中断したら、後に、症状が再出現した
場合、元来のレベルで治療を再開することが可能である。
【００６７】
当業者は、適切な投薬量が、治療しようとする障害の性質および重症度、患者の体重、
年齢、全身状態、および以前の疾病および／または治療、並びに投与経路などの要因に応
じて、多様であろうことを認識するであろう。予備的用量は、動物試験にしたがって決定
可能であり、そしてヒト投与の投薬量決定は、標準的投薬量決定試験などの、当該技術分
30
野に認められた慣例にしたがって行われる。例えば、療法的有効用量は、最初に、細胞培
養アッセイから概算することが可能である。投薬量は、化合物の比活性に応じるであろう
し、そして日常的な実験によって、容易に決定可能である。用量は、動物モデルにおいて
、細胞培養で決定されるようなＩＣ５０（すなわち症状の最大阻害の半分を達成する試験
化合物の濃度）を含みつつ、毒性を最小限にする、循環血漿濃度範囲を達成するように、
配合可能である。こうした情報を用いて、ヒトにおいて、有用な用量を、より正確に決定
することが可能である。最終的には、主治医が、個々の患者各々を治療する、本発明のポ
リペプチドの量を決定するであろう。まず、主治医は、本発明のポリペプチドを低用量で
投与し、そして患者の反応を観察するであろう。患者に最適な療法効果が得られるまで、
本発明のポリペプチドをより多い用量で投与することが可能であり、そしてその時点でさ
40
らに用量を増やさない。本明細書記載の方法を実施するのに用いる療法剤は、ｋｇ体重あ
たり、約０．０１ｎｇ∼約１００ｍｇ（別の態様は約０．１ｎｇ∼約１０ｍｇを有し、そ
して他の態様は約０．１マイクログラム∼約１ｍｇを有する）の本発明のポリペプチドを
含有すべきであると意図される。注射以外の投与経路を用いるならば、標準的な医学的実
施にしたがって、用量を適切に調節する。不治の慢性状態では、措置は、患者の医師によ
って、こうしたものが必要だと思われたならば、用量および頻度を調節したうえ、無期限
に続けることが可能である。
【００６８】
薬剤組成物はまた、１以上の補助分子とともに、薬学的に許容しうる希釈剤、キャリア
ー、または賦形剤と組み合わせたＦｌｔ３リガンドを含んでなることも可能であり、こう
50
(30)
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した薬剤組成物が本発明に含まれる。あるいは、補助分子を別個の薬剤組成物として配合
することも可能である。投与に適した配合物には、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、および
配合物をレシピエントの血液と等張にする溶質を含有可能な水性および非水性無菌注射溶
液；並びに懸濁剤または粘稠化剤を含有可能な水性および非水性無菌懸濁物が含まれる。
Ｆｌｔ３リガンドおよび／または補助分子は、薬学的に有用な組成物を調製するのに用い
られる既知の方法にしたがって、配合可能である。これらを、単一の活性成分として、ま
たは既定の徴候に適した他の既知の活性成分と共に、薬学的に許容しうる希釈剤（例えば
、生理食塩水、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、酢酸、およびリン酸緩衝溶液）、保存剤（例えば、チ
メロサール、ベンジルアルコール、パラベン類）、乳化剤、可溶化剤、アジュバントおよ
び／またはキャリアーと混合して組み合わせることが可能である。薬剤組成物に適した配
10
合 物 に は 、 Ｒ ｅ ｍ ｉ ｎ ｇ ｔ ｏ ｎ 'ｓ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍ ａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ
， 第１６版， １９８０， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， ペ
ンシルバニア州イーストンに記載されるものが含まれる。さらに、こうした組成物は、ポ
リエチレングリコール（ＰＥＧ）、金属イオンと複合体化しているか、またはポリ酢酸、
ポリグリコール酸、ヒドロゲル類、デキストラン等のポリマー化合物に取り込まれている
か、またはリポソーム、マイクロエマルジョン、ミセル、単層もしくは多層小胞、赤血球
ゴーストもしくはスフェロブラストに取り込まれていることが可能である。リポソーム配
合に適した脂質には、限定なしに、モノグリセリド類、ジグリセリド類、スルファチド類
、リゾレシチン、リン脂質類、サポニン、胆汁酸類等が含まれる。こうしたリポソーム配
合物の調製は、例えば、米国特許第４，２３５，８７１号；米国特許第４，５０１，７２
20
８号；米国特許第４，８３７，０２８号；および米国特許第４，７３７，３２３号に開示
されるように、当該技術分野の技術レベルの範囲内である。こうした組成物は、物理的状
態、溶解度、安定性、ｉｎ ｖｉｖｏ放出速度、およびｉｎ ｖｉｖｏクリアランス速度
に影響を与えるであろうし、そしてしたがって、キャリアーの特性が、選択される投与経
路に応じるように、意図される適用にしたがって選択される。
【００６９】
１つの態様において、Ｆｌｔ３リガンドおよび補助分子の持続放出型を用いる。開示す
る方法で使用するのに適した持続放出型には、限定されるわけではないが、緩慢溶解生体
適合性ポリマー（米国特許第６，０３６，９７８号に記載されるアルギン酸微小粒子など
）に被包されたＦｌｔ３リガンドおよび補助分子、このようなポリマー（局所適用ヒドロ
30
ゲル類を含む）と混合されたもの、および／または生体適合性半透性移植物中に入れられ
たものが含まれる。
【００７０】
可溶性Ｆｌｔ３−Ｌ療法組成物を投与するのに使用可能な持続放出技術の１つの種類は
、ヒドロゲル材料、例えば光架橋可能ヒドロゲル（Ｓａｗｈｎｅｙら， Ｍａｃｒｏｍｏ
ｌｅｃｕｌｅｓ ２６：５８１；１９９３）を利用するものである。類似のヒドロゲルは
、術後癒着形成を防止し（Ｈｉｌｌ−Ｗｅｓｔら， Ｏｂｓｔｅｔ． Ｇｙｎｅｃｏｌ．
８３：５９， １９９４）、そして血管傷害後の血栓症および血管狭窄を防止する（Ｈ
ｉｌｌ−Ｗｅｓｔら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９１
：５９６７， １９９４）のに用いられてきている。ポリペプチドをこうしたヒドロゲル
40
に取り込んで、活性剤の持続した局所の放出を提供することが可能である（Ｗｅｓｔおよ
びＨｕｂｂｅｌ， Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ２５：１３９， １９９５；
Ｈｉｌｌ−Ｗｅｓｔら， Ｊ． Ｓｕｒｇ． Ｒｅｓ． ５８：７５９；１９９５）。ヒ
ドロゲルに取り込まれた際、Ｆｌｔ３−Ｌの持続した局所の放出は、Ｆｌｔ３−Ｌの長い
半減期によって、増幅されるであろう。
【００７１】
本発明の化合物は、粒子サイズ約１ｍｍの顆粒またはペレットの形で、細かいマルチ微
粒子（ｍｕｌｔｉｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ）として配合物に含まれることが可能である。
カプセル投与のための物質の配合物はまた、粉末、軽く圧縮されたプラグ、または錠剤と
してであることも可能である。療法剤は、圧縮によって調製可能である。
50
(31)
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【００７２】
着色剤およびフレーバー剤もまた含まれることが可能である。例えば、タンパク質（ま
たは誘導体）を配合し（例えばリポソームまたは微小球体被包によって）、そしてその後
、さらに、食用製品、例えば着色剤およびフレーバー剤を含有させる冷蔵飲料内に含有さ
せることが可能である。
【００７３】
本発明の化合物の体積を、不活性物質で希釈するか、または増加させることが可能であ
る。これらの希釈剤には、炭水化物、特にマンニトール、α−ラクトース、無水ラクトー
ス、セルロース、スクロース、修飾デキストランおよびデンプンが含まれることが可能で
ある。三リン酸カルシウム、炭酸マグネシウムおよび塩化ナトリウムを含む、特定の無機
10
塩もまた、充填剤として使用可能である。いくつかの商業的に入手可能な希釈剤は、Ｆａ
ｓｔ−Ｆｌｏ、Ｅｍｄｅｘ、ＳＴＡ−Ｒｘ １５００、ＥｍｃｏｍｐｒｅｓｓおよびＡｖ
ｉｃｅｌｌである。
【００７４】
固体投薬型への療法剤の配合物中に、崩壊剤を含むことが可能である。崩壊剤として使
用される物質には、限定されるわけではないが、デンプンに基づく商業的な崩壊剤、Ｅｘ
ｐｌｏｔａｂを含むデンプンが含まれる。デンプングリコール酸ナトリウム、Ａｍｂｅｒ
ｌｉｔｅ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ウルトラミロペクチン（ｕｌｔｒａ
ｍｙｌｏｐｅｃｔｉｎ）、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、オレンジピール、酸カルボ
キシメチルセルロース、天然スポンジおよびベントナイトすべてが使用可能である。崩壊
20
剤の別の型は、不溶性陽イオン交換樹脂である。粉末化粘性物質を崩壊剤として、そして
結合剤として使用可能であり、そしてこれらには、寒天、カラヤ、またはトラガカントな
どの粉末化粘性物質が含まれることが可能である。アルギン酸およびそのナトリウム塩も
また、崩壊剤として有用である。
【００７５】
結合剤を用いて、療法剤をともに保持して、硬い錠剤を形成することが可能であり、そ
して結合剤には、アラビアゴム（ａｃａｃｉａ）、トラガカント、デンプンおよびゼラチ
ンなどの天然産物由来の物質が含まれる。他のものには、メチルセルロース（ＭＣ）、エ
チルセルロース（ＥＣ）およびカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）が含まれる。ポリ
ビニルピロリドン（ＰＶＰ）およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）は
30
どちらも、アルコール性溶液中、療法剤を顆粒化するのに使用可能である。
【００７６】
配合プロセス中の固着を防止するため、抗摩擦剤を療法剤の配合物中に含むことが可能
である。療法剤およびダイ壁の間の層として、潤滑剤を用いることが可能であり、そして
これらには、限定されるわけではないが：マグネシウム塩およびカルシウム塩を含むステ
アリン酸、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、流動パラフィン、植物油およびワ
ックスが含まれることが可能である。ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウ
ム、多様な分子量のポリエチレングリコール、Ｃａｒｂｏｗａｘ４０００および６０００
などの可溶性潤滑剤もまた使用可能である。
【００７７】
40
配合物中の薬剤の流動特性を改善する可能性があり、そして圧縮中の再配置を補助する
、流動促進剤を添加可能である。流動促進剤には、デンプン、タルク、発熱性シリカおよ
び水和シリコアルミネートが含まれることが可能である。
【００７８】
水性環境への本発明の化合物の溶解を補助するため、湿潤剤として界面活性剤を添加す
ることが可能である。界面活性剤には、ラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ジオク
チル・ナトリウムおよびスルホン酸ジオクチル・ナトリウムなどの陰イオン性界面活性剤
が含まれることが可能である。陽イオン性界面活性剤が使用可能であり、そしてこれには
、塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウムが含まれることが可能である。界面活
性剤として配合物中に含まれることが可能な潜在的な非イオン性界面活性剤のリストは、
50
(32)
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ラウロマクロゴール４００、ポリオキシル４０ステアレート、ポリオキシエチレン水素化
カスターオイル１０、５０および６０、モノステアリン酸グリセロール、ポリソルベート
４０、６０、６５および８０、スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロースならびにカ
ルボキシメチルセルロースである。これらの界面活性剤は、単独で、または異なる比での
混合物として、タンパク質または誘導体の配合物中に存在することが可能である。
【００７９】
化合物の取り込みを増進するため、添加剤も配合物中に含まれていることが可能である
。潜在的にこの特性を有する添加物は、例えば、脂肪酸、オレイン酸、リノール酸および
リノレン酸である。
【００８０】
10
徐放配合物が望ましい可能性がある。拡散機構または浸出機構いずれかによる放出を可
能にする不活性マトリックス、例えばゴム中に、本発明の化合物を取り込むことが可能で
ある。ゆっくりと変性するマトリックス、例えばアルギネート、多糖もまた、配合物中に
取り込むことが可能である。本発明の化合物の徐放の別の型は、Ｏｒｏｓ療法剤系（Ａｌ
ｚａ Ｃｏｒｐ．）に基づく方法により、すなわち、水の進入を可能にし、そして浸透圧
効果で、単一の小さい開口部を通じて薬剤を押し出す、半透性膜に薬剤が被包される。い
くつかの溶腸性コーティングもまた、遅延放出効果を有する。
【００８１】
他のコーティングを配合物に使用可能である。これらには、コーティング・パン中で適
用可能な多様な糖が含まれる。療法剤はまた、フィルムコーティングした錠剤でも投与可
20
能であり、そしてこの例で用いられる物質は、２群に分けられる。第一の群は、非溶腸性
物質であり、そしてメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース
、メチルヒドロキシ−エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプ
ロピル−メチルセルロース、カルボキシ−メチルセルロース・ナトリウム、プロビドン（
ｐｒｏｖｉｄｏｎｅ）およびポリエチレングリコールを含む。第二の群は、溶腸性物質か
らなり、この物質は通常、フタル酸のエステルである。
【００８２】
最適なフィルムコーティングを提供するため、物質の混合物が使用可能である。フィル
ムコーティングは、パン・コーターまたは流動化ベッド中で、あるいは圧縮コーティング
によって、実行可能である。
30
【００８３】
やはり本明細書に意図するのは、本タンパク質（またはその誘導体）の肺搬送である。
タンパク質（または誘導体）は、吸入されながら哺乳動物肺に搬送され、そして肺上皮裏
打ちを横断して、血流に乗る（この他の報告には、Ａｄｊｅｉら， Ｐｈａｒｍａ． Ｒ
ｅｓ．（１９９０）７：５６５−９；Ａｄｊｅｉら（１９９０）， Ｉｎｔｅｒｎａｔｌ
． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ６３：１３５−４４（酢酸ロイプロリド）；Ｂ
ｒａｑｕｅｔら（１９８９）， Ｊ． Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．
１３（ｓｕｐｐｌ．５）：ｓ．１４３−１４６（エンドセリン−１）；Ｈｕｂｂａｒｄ
ら（１９８９）， Ａｎｎａｌｓ Ｉｎｔ． Ｍｅｄ． ３：２０６−１２（α１−アン
チトリプシン）；Ｓｍｉｔｈら（１９８９）， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． ８
40
４：１１４５−６（α１−プロテイナーゼ）；Ｏｓｗｅｉｎら（Ｍａｒｃｈ １９９０）
， “Ａｅｒｏｓｏｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ”， Ｐｒｏｃ． Ｓｙ
ｍｐ． Ｒｅｓｐ． Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ＩＩ， コロラド州キーストーン（
組換えヒト成長ホルモン）；Ｄｅｂｓら（１９８８）， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４
０：３４８２−８（インターフェロンγおよび腫瘍壊死因子α）およびＰｌａｔｚら、米
国特許第５，２８４，６５６号（顆粒球コロニー刺激因子）が含まれる）。
【００８４】
本発明の実施に使用が意図されるのは、療法製品の肺搬送のために設計された、広い範
囲の機械装置であり、これらには、限定されるわけではないが、すべて当業者に周知の、
ネブライザー、計量式吸入器、および粉末吸入器が含まれる。本発明の実施に適した、商
50
(33)
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業的に入手可能な装置のいくつかの特定の例は、Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ， Ｉｎｃ．
、ミズーリ州セントルイス製造のＵｌｔｒａｖｅｎｔネブライザー；Ｍａｒｑｕｅｓｔ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、コロラド州エングルウッド製造のＡｃｏｒｎ ＩＩ
ネブライザー；Ｇｌａｘｏ Ｉｎｃ．、ノースカロライナ州リサーチトライアングルパー
ク製造のＶｅｎｔｏｌｉｎ計量式吸入器；およびＦｉｓｏｎｓ Ｃｏｒｐ．、マサチュー
セッツ州ベッドフォード製造のＳｐｉｎｈａｌｅｒ粉末吸入器である。
【００８５】
こうした装置はすべて、本発明の化合物を分配するのに適した配合物の使用を必要とす
る。典型的には、各配合物は、使用する装置の種類に特異的であり、そして療法に有用な
希釈剤、アジュバントおよび／またはキャリアーに加えて、適切な噴射剤物質の使用を伴
10
う可能性がある。
【００８６】
本発明の化合物は、最も好適には、遠位肺への最も有効な搬送のため、１０μｍ（また
はミクロン）、最も好ましくは０．５∼５μｍの平均粒子サイズの微粒子型で調製すべき
である。
【００８７】
薬学的に許容しうるキャリアーには、トレハロース、マンニトール、キシリトール、ス
クロース、ラクトース、およびソルビトールなどの炭水化物が含まれる。配合物中で使用
する他の成分には、ＤＰＰＣ、ＤＯＰＥ、ＤＳＰＣおよびＤＯＰＣが含まれる可能性があ
る。天然または合成の界面活性剤が使用可能である。ＰＥＧが使用可能である（タンパク
20
質または類似体を誘導体化する際の使用とは別）。シクロデキストランなどのデキストラ
ンが使用可能である。胆汁塩および他の関連増進剤が使用可能である。セルロースおよび
セルロース誘導体が使用可能である。緩衝配合物における使用など、アミノ酸が使用可能
である。
【００８８】
また、リポソーム、微小カプセルまたは微小球体、封入複合体、または他の種類のキャ
リアーの使用もまた、意図される。
ジェットまたは超音波いずれかのネブライザーで用いるのに適した配合物は、典型的に
は、溶液ｍｌあたりの生物学的活性タンパク質、約０．１∼２５ｍｇの濃度で水に溶解さ
れた本発明の化合物を含んでなるであろう。配合物にはまた、緩衝剤および単純な糖（例
30
えばタンパク質安定化および浸透圧の調節）も含まれることが可能である。ネブライザー
配合物はまた、エアロゾルを形成する際、溶液の噴霧化によって引き起こされる、表面で
誘導されるタンパク質の凝集を減少させるかまたは防止するために、界面活性剤もまた、
含有可能である。
【００８９】
計量式吸入器で使用するための配合物は、一般的に、界面活性剤の補助で噴射剤に懸濁
された本発明の化合物を含有する細かく分割された粉末を含んでなるであろう。噴射剤は
、トリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタ
ノール、および１，１，１，２−テトラフルオロエタン、またはその組み合わせを含む、
クロロフルオロカーボン、ヒドロクロロフルオロカーボン、ヒドロフルオロカーボン、ま
40
たは炭化水素などの、この目的に使用される慣用的物質いずれであることも可能である。
適切な界面活性剤には、トリオレイン酸ソルビタンおよびダイズ・レシチンが含まれる。
オレイン酸もまた、界面活性剤として有用である可能性がある。
【００９０】
粉末吸入器から分配するための配合物は、本発明の化合物を含有する細かく分割された
乾燥粉末を含んでなり、そしてまた装置から粉末が分散するのを容易にする量、例えば配
合物の重量５０∼９０％で、ラクトース、ソルビトール、スクロース、マンニトール、ト
レハロース、またはキシリトールなどの充填剤を含むことも可能である。
【００９１】
別の態様には、同一被験者に投与される１以上の他の補助分子と同時のＦｌｔ３リガン
50
(34)
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ドの投与がさらに含まれる。Ｆｌｔ３リガンドおよび補助分子（単数または複数）は、薬
剤組成物として投与されることが理解される。同時投与は、Ｆｌｔ３リガンドおよび／ま
たは補助分子との同時処置または連続処置を含み、それとともに、構成要素が交互に投与
されるプロトコル、または１つの構成要素を長期に投与し、そして他のもの（単数または
複数）を断続して投与するプロトコルを含む。構成要素、すなわちＦｌｔ３リガンドおよ
び１以上の補助分子は、同一または別個の組成物中で、そして同一または異なる投与経路
によって投与可能である。Ｆｌｔ３リガンドと同時に投与可能な補助分子の例には：免疫
応答をさらに増進するかまたは調節するのに有用であろうサイトカイン、増殖因子等が含
まれる。サイトカインには、限定されるわけではないが、インターロイキン１、２、３、
４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−
10
ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦ
およびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶
性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパ
ク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、およびそれらの組み合わせが含まれる。
【００９２】
投与経路。いかなる有効な投与経路を用いて、Ｆｌｔ３リガンド、１以上の補助分子
および１以上のワクチンを、療法的に投与することも可能である。非経口投与には、例え
ば、多量（ｂｏｌｕｓ）注射によるか、または連続注入による、関節内、静脈内、筋内、
病巣内、腹腔内または皮下経路を介した、注射が含まれ、そしてまた、例えば疾患または
傷害部位での局所投与も含まれる。投与の他の適切な手段には、移植物からの持続放出；
20
エアロゾル吸入および／またはガス注入；点眼剤；膣または直腸座薬；頬側調製；丸剤（
ピル）、シロップ、ロゼンジ、アイスクリームまたはチューインガムを含む経口調製；お
よびローション、ゲル、スプレー、軟膏または他の適切な技術などの局所調製が含まれる
。また、細胞増殖を調節するため、あるいは細胞で所望の効果または活性を生じるため、
Ｆｌｔ３リガンド、１以上の補助分子および１以上のワクチンの存在下で、ｅｘ ｖｉｖ
ｏで細胞を培養することも可能である。その後、処理した細胞を、療法目的のため、ｉｎ
ｖｉｖｏで導入することが可能である。Ｆｌｔ３リガンド、１以上の補助分子および１
以上のワクチンを被験者に投与する際、これらは、同一のまたは異なる経路によって投与
可能であり、そして同時に、別個に、または連続して投与可能である。
【００９３】
30
経口投与。Ｆｌｔ３リガンド、１以上の補助分子および１以上のワクチンの療法的有
効量を経口投与する際、これらは、錠剤、カプセル、粉末、溶液またはエリキシル剤の形
であることが可能である。錠剤型で投与する際、Ｆｌｔ３リガンド、１以上の補助分子お
よび１以上のワクチンは、さらに、ゼラチンまたはアジュバントなどの固体キャリアーを
含有することが可能である。錠剤、カプセル、および粉末は、本発明のポリペプチドを約
５∼９５％、そして好ましくは本発明のポリペプチドを約２５∼９０％含有する。本明細
書で使用に意図されるのは、本明細書にその全体が援用される、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）， 第１８版， Ｍａ
ｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ． ペンシルバニア州イーストン １８０４２の第８
９章に一般的に記載される、経口固形投薬型である。固形投薬型には、錠剤、カプセル、
40
丸剤、トローチまたはロゼンジ、カシェ剤またはペレットが含まれる。また、リポソーム
被包またはプロテイノイド被包を用いて、本組成物を配合することも可能である（例えば
米国特許第４，９２５，６７３号に報告されるプロテイノイド微小球体として）。リポソ
ーム被包が使用可能であり、そしてリポソームを多様なポリマーで誘導体化することが可
能である（例えば米国特許第５，０１３，５５６号）。療法のためのありうる固形投薬型
の説明が、本明細書にその全体が援用される、Ｍａｒｓｈａｌｌ， Ｋ．， Ｍｏｄｅｒ
ｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ（１９７９）， Ｇ．Ｓ． ＢａｎｋｅｒおよびＣ．Ｔ
． Ｒｈｏｄｅｓ監修の第１０章に提供される。一般的に、配合物は、Ｆｌｔ３−Ｌ、お
よび胃環境に対する保護を可能にし、そして腸において生物学的活性成分の放出を可能に
する不活性成分を含むであろう。
50
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【００９４】
やはり具体的に意図されるのは、上記本発明の化合物の経口投薬型である。必要であれ
ば、経口搬送が有効であるように、化合物を化学的に修飾することが可能である。一般的
に、意図される化学的修飾は、化合物分子自体への少なくとも１つの部分の付着であり、
前記部分は（ａ）タンパク質分解の阻害；および（ｂ）胃または腸からの血流への取り込
みを可能にする。やはり望ましいのは、化合物全体の安定性増加および体内の循環時間の
増加である。本発明において、共有結合するビヒクルとして有用な部分はまた、この目的
にも使用可能である。こうした部分の例には、ＰＥＧ、エチレングリコールおよびプロピ
レングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニル
アルコール、ポリビニルピロリドンおよびポリプロリンが含まれる。例えば、Ａｂｕｃｈ
10
ｏｗｓｋｉおよびＤａｖｉｓ， Ｓｏｌｕｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒ−Ｅｎｚｙｍｅ Ａｄ
ｄｕｃｔｓ， Ｅｎｚｙｍｅｓ ａｓ Ｄｒｕｇｓ（１９８１）， Ｈｏｃｅｎｂｅｒｇ
およびＲｏｂｅｒｔｓ監修， Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ， ニューヨーク
州ニューヨーク， ｐｐ．３６７−８３；Ｎｅｗｍａｒｋら（１９８２）， Ｊ． Ａｐ
ｐｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ４：１８５−９を参照されたい。使用可能な他のポリマーは
、ポリ−１，３−ジオキソランおよびポリ−１，３，６−トリオキソカンである。薬学的
使用に好ましいのは、上に示すように、ＰＥＧ部分である。経口搬送投薬型には、本発明
の療法化合物の吸収を増進するキャリアーとしての、ナトリウムＮ−（８−［２−ヒドロ
キシベンゾイル］アミノ）カプリレート（ＳＮＡＣ）などの修飾脂肪族アミノ酸の塩を使
用することも可能である。ＳＮＡＣを用いたヘパリン配合物の臨床的有効性が、Ｅｍｉｓ
20
ｐｈｅｒｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓが行った第ＩＩ相試験で立証された。米国特許第
５，７９２，４５１号、“Ｏｒａｌ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉ
ｏｎ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ”を参照されたい。
【００９５】
液体型で投与する際、水、石油、ピーナツ油、ミネラルオイル、ダイズ油、もしくはゴ
マ油などの動物もしくは植物起源の油、または合成油などの液体キャリアーが添加可能で
ある。Ｆｌｔ３リガンド、１以上の補助分子および１以上のワクチンの液体型はさらに、
生理学的生理食塩溶液、デキストロースまたは他の糖類溶液、あるいはエチレングリコー
ル、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどのグリコール類を含有する
ことが可能である。
30
【００９６】
静脈内投与。Ｆｌｔ３リガンド、１以上の補助分子および１以上のワクチンの療法的
有効量を、静脈内、皮膚または皮下注射によって投与する際、Ｆｌｔ３リガンド、１以上
の補助分子および１以上のワクチンは、発熱物質不含で非経口的に許容しうる水性溶液の
形であることが可能である。ｐＨ、等張性、安定性等を十分考慮した、こうした非経口的
に許容しうるポリペプチド溶液の調製は、当該技術分野の範囲内である。静脈内、皮膚、
または皮下注射のための好ましい薬剤組成物は、本発明のポリペプチドに加えて、塩化ナ
トリウム注射剤、リンゲル注射剤、デキストロース注射剤、デキストロースおよび塩化ナ
トリウム注射剤、乳酸リンゲル注射剤、または当該技術分野に知られるような他のビヒク
ルのような等張性のビヒクルを含有すべきである。本発明の薬剤組成物はまた、当業者に
40
知られる、安定化剤、保存剤、緩衝剤、酸化防止剤、または他の添加物も含有可能である
。本発明の薬剤組成物を用いた静脈内療法の期間は、治療する疾患の重症度、並びに個々
の患者各々の状態および潜在的な特異体質反応に応じて、多様であろう。本発明のポリペ
プチドの各適用期間は、連続静脈内投与１２∼２４時間の範囲内であろうと意図される。
最終的には、主治医が、本発明の薬剤組成物を用いた静脈内療法の適切な期間に関して、
決定するであろう。
【００９７】
組織投与。本発明のＦｌｔ３リガンド、１以上の補助分子および１以上のワクチンを
、局所的に、全身性に、あるいは移植物または装置として局在的に、投与することが可能
である。投与する際、Ｆｌｔ３リガンド、１以上の補助分子および１以上のワクチンは、
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もちろん、発熱物質不含で、生理学的に許容しうる型である。さらに、Ｆｌｔ３リガンド
、１以上の補助分子および１以上のワクチンは、望ましい部位に搬送するため、粘稠性型
で被包または注射可能である。Ｆｌｔ３リガンド、１以上の補助分子および／または１以
上のワクチンの局所投与もまた、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの別の態様のために想
定される。
【００９８】
レトロウイルス科（例えばヒト免疫不全ウイルス、例えばＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩ
Ｉ、ＬＡＶまたはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、またはＨＩＶ−ＩＩＩとも称される；およ
び他の単離体、例えばＨＩＶ−ＬＰ））； ピコルナウイルス科（例えばポリオウイルス
、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒト・コクサッキーウイルス、ライノウイルス
10
、エコーウイルス）；カリチウイルス科（Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ）（例えば胃腸炎を
引き起こす株）；トガウイルス科（例えばウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）；フラビウ
イルス科（例えばデング熱ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）；コロナウイルス
科（例えばコロナウイルス）；ラブドウイルス科（例えば水疱性口内炎ウイルス、狂犬病
ウイルス）；フィロウイルス（例えばエボラウイルス）；パラミクソウイルス科（例えば
パラインフルエンザウイルス、おたふく風邪ウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイ
ルス）；オルトミクソウイルス科（例えばインフルエンザウイルス）；ブニヤウイルス科
（例えばハンタンウイルス、ブンガウイルス（ｂｕｎｇａ ｖｉｒｕｓ）、フレボウイル
スおよびナイロウイルス（Ｎａｉｒｏ ｖｉｒｕｓ））；アレナウイルス科（出血熱ウイ
ルス）；レオウイルス科（例えばレオウイルス、オルビウイルスおよびロタウイルス）；
20
ビルナウイルス科；ヘパドナウイルス科（Ｂ型肝炎ウイルス）；パルボウイルス科（パル
ボウイルス）；パポバウイルス科（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）；アデノ
ウイルス科（大部分のアデノウイルス）；ヘルペスウイルス科（単純ヘルペスウイルス（
ＨＳＶ）１および２、水痘・帯状ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、
ヘルペスウイルス類）；ポックスウイルス科（天然痘ウイルス、ワクシニアウイルス、ポ
ックスウイルス）；およびイリドウイルス科（例えばアフリカ・ブタ熱ウイルス）；並び
に未分類のウイルス（例えば海綿状脳症の病因学的作用因子、デルタ肝炎の病原体（Ｂ型
肝炎ウイルスの不全付随体と考えられる）、非Ａ非Ｂ肝炎の病原体（クラス１＝体内感染
；クラス２＝非経口感染（すなわちＣ型肝炎））；ノーウォークウイルスおよび関連ウイ
ルス、並びにアストロウイルス（ａｓｔｒｏｖｉｒｕｓ））による感染を含む、ウイルス
30
感染の治療および／または防止に、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルが使用可能である。
【００９９】
ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉｓ）、ライム病ボ
レリア（Ｂｏｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、レジオネラ・ニューモフィリア（
Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、マイコバクテリウム属（Ｍｙｃｏ
ｂａｃｔｅｒｉａ）種（例えばヒト型結核菌（Ｍ． ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、鳥型
結核菌（Ｍ． ａｖｉｕｍ）、Ｍ．イントラセルラレ（Ｍ． ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａ
ｒｅ）、Ｍ．カンサシ（Ｍ． ｋａｎｓａｉｉ）、Ｍ．ゴルドネ（Ｍ． ｇｏｒｄｏｎａ
ｅ））、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、淋菌（Ｎｅ
ｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉ
40
ｎｇｉｔｉｄｉｓ）、単球症リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅ
ｓ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（Ａ群連鎖球菌
）、ストレプトコッカス・アガラクティエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃ
ｔｉａｅ）（Ｂ群連鎖球菌）、連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）（ビリダンス
群）、糞便連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、ウシ連鎖球菌
（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｂｏｖｉｓ）、連鎖球菌属（嫌気性種）、肺炎連鎖球菌
（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、病原性カンピロバクター属（
Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）種、腸球菌属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）種、インフル
エンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ ａｎｔｒａｃｉｓ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔ
50
(37)
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ｈｅｒｉａｅ）、コリネバクテリウム種、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、ウエルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉ
ｎｇｅｒｓ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）、エンテロバクター
・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅ
ｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｕｒｅｌ
ｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）種、フソバ
クテリウム・ヌクレアツム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、スト
レプトバチルス・モニリフォルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｏｎｉｌｉｆ
ｏｒｍｉｓ）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｉｕｍ）、トレポ
ネーマ・ペルテヌエ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐｅｒｔｅｎｕｅ）、レプトスピラ属（Ｌｅ
10
ｐｔｏｓｐｉｒａ）、およびイスラエル放線菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｉｓｒａｅｌ
ｌｉ）による感染を含む、細菌による感染の治療および／または防止に、Ｆｌｔ３リガン
ド免疫プロトコルが使用可能である。
【０１００】
住血吸虫類；トリパノソーマ類；リーシュマニア属（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）種；フィ
ラリア性線形動物；トリコモナス症；肉胞子虫症；無鉤条虫（Ｔａｅｎｉａ ｓａｇｉｎ
ａｔａ）、有鉤条虫（Ｔａｅｎｉａ ｓｏｌｉｕｍ）、クリプトコッカス・ネオフォルマ
ンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、煙色コウジ菌（Ａｓｐｅｒ
ｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐ
ｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏ
20
ｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、旋毛虫症、皮膚ブラストミセス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、トラコーマ・クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃ
ｈｏｍａｔｉｓ）、鵞口瘡カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、熱帯熱マラ
リア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、三日熱マラリア原虫（Ｐｌ
ａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ）、四日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｍａｌ
ａｒｉａｅ）、およびトキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）等に
よる感染を含む、感染性単細胞生物に対して、被験者を治療するかまたは免疫するのに、
Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルが使用可能である。
【０１０１】
さらなる態様において、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルは、限定されるわけではない
30
が：線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉種、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（
ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中
皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌腫、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前
立腺癌、扁平上皮癌腫、基底細胞癌腫、腺癌、汗腺癌腫、皮脂腺癌腫、乳頭状癌腫、乳頭
腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌腫、気管支癌腫、腎細胞癌腫、肝癌、胆管癌腫、絨毛癌、精上皮
癌、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、精巣腫瘍、肺癌腫、小細胞肺癌腫、膀胱癌腫
、上皮癌腫、神経膠腫、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽
細胞腫、聴神経腫、希突起神経膠芽腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽腫などの
哺乳動物肉腫および癌腫；急性リンパ性白血病および急性骨髄性白血病（骨髄芽球性白血
病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、および赤白血病）などの白血
40
病；慢性白血病（慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ性白血病）；および
真性赤血球増加症、リンパ腫（ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ワルデ
ンシュトレーム・マクログロブリン血症、および重鎖病などの癌に対して、被験者を治療
するか、または被験者にワクチン接種するのに使用可能である。多様なリンパ増殖性障害
もまた、治療可能であり、これらの障害には、自己免疫リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、
慢性リンパ芽球白血病、毛様細胞白血病、慢性リンパ性白血病、末梢Ｔ細胞リンパ腫、小
リンパ球性リンパ腫、外套細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫、エプス
タイン−バーウイルス陽性Ｔ細胞リンパ腫、細網肉腫、ホジキン病、びまん性攻撃的リン
パ腫、急性リンパ性白血病、Ｔガンマリンパ増殖性疾患、皮膚Ｂ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細
胞リンパ腫（すなわち菌状息肉症）およびセザリー症候群が含まれる。
50
(38)
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【０１０２】
Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルはまた、当該技術分野に知られる他の認識される治療
と組み合わせて使用可能である。例えば、癌の治療において、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロ
トコルは、手術、化学療法、放射療法、養子免疫療法等と組み合わせて使用可能である。
根底にある１つの論理的説明は、腫瘍塊が最小限であり、そして／または腫瘍細胞が手術
中および手術後に循環内に抜け出し、そしてＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルを通じた免
疫療法が、この状況でより有効でありうることである。特定の態様において、本発明の防
御的有用性および療法的有用性は、手術前、手術時、または手術後いずれかに癌の免疫適
格性を増進し、そして癌細胞に対する腫瘍特異的免疫を誘導することに向けられ、この目
的は癌を阻害することであり、そして最終的な臨床上の目的は癌の退化および／または根
10
絶である。
【０１０３】
腫瘍性疾患の進行に対するＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルの影響は、限定されるわけ
ではないが：ａ）細胞免疫の評価としての過敏性の遅延；ｂ）ｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞
溶解性Ｔリンパ球の活性；ｃ）腫瘍特異的抗原のレベル；ｄ）コンピュータ断層撮影（Ｃ
Ｔ）スキャンなどの技術を用いた、腫瘍形態の変化；ｅ）高リスクの個体における特定の
癌のリスクの推定上のバイオマーカーレベルの変化、およびｆ）腫瘍形態の変化を測定す
ることを含む、当業者に知られる方法いずれかによって監視可能である。あるいは、ＣＴ
Ｌアッセイ、増殖アッセイ、抗体捕捉アッセイ等の標準的技術を用いて、目的の抗原に対
する免疫応答を測定することが可能である。
20
【０１０４】
別の態様において、上述の抗原１以上で感作した抗原提示細胞（ＡＰＣ）を用いた養子
免疫療法と、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルを組み合わせることが可能である。養子免
疫療法は、感染性疾患または癌を治療する療法的アプローチを指し、ここで、免疫細胞が
、直接または間接的に、感染細胞または腫瘍細胞および／または抗原性構成要素に対する
特異的免疫を仲介し、そして感染性疾患の治療または癌の退化を生じることを目的として
、免疫細胞を宿主に投与する。１つの態様において、抗原感作ＡＰＣを、ワクチン投与前
、投与と同時、または投与後に投与することが可能である。さらに、養子免疫療法の投与
様式は、限定されるわけではないが、例えば皮下投与、静脈内投与、腹腔内投与、筋内投
与、皮内投与または粘膜投与を含めて、多様である可能性がある。
30
【０１０５】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、被験者を免疫する方法
であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなり、ここでＦｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同
時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与し、そしてここで補助分子を、ワクチン
投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与し、そし
てここで補助分子は、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５
40
、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルフ
ァおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦフ
ァミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合
タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、
ＣｐＧ配列、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、前記方法に関する。
【０１０６】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、癌、ウイルス感染、細
菌感染または単細胞生物による感染を患う被験者において、癌、ウイルス感染、細菌感染
または単細胞生物による感染を治療し、そして／または防止する方法であって：（ａ）被
験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；（ｂ）場合によって、補助分子を被験者に投与し；そ
50
(39)
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して（ｃ）ワクチンを被験者に投与する工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１０７】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、癌を患う患者において
、癌を治療する方法であって：（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；（ｂ）場合に
よって、１以上の補助分子を含んでなる薬剤組成物を被験者に投与し；そして（ｃ）アジ
ュバント中に配合した１以上の癌抗原を含んでなるワクチンを被験者に投与する工程を含
んでなる、前記方法に関する。
【０１０８】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、ウイルス感染を患う被
験者において、ウイルス感染を治療する方法であって：（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンド
10
を投与し；（ｂ）場合によって、１以上の補助分子を含んでなる薬剤組成物を被験者に投
与し；そして（ｃ）アジュバント中に配合した１以上のウイルス抗原を含んでなるワクチ
ンを被験者に投与する工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１０９】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、細菌感染を患う被験者
において、細菌感染を治療する方法であって：（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し
；（ｂ）場合によって、１以上の補助分子を含んでなる薬剤組成物を被験者に投与し；そ
して（ｃ）アジュバント中に配合した１以上の細菌抗原を含んでなるワクチンを被験者に
投与する工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１１０】
20
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、単細胞生物による感染
を患う被験者において、単細胞生物による感染を治療する方法であって：（ａ）被験者に
Ｆｌｔ３リガンドを投与し；（ｂ）場合によって、１以上の補助分子を含んでなる薬剤組
成物を被験者に投与し；そして（ｃ）アジュバント中に配合した単細胞生物由来の１以上
の抗原を含んでなるワクチンを被験者に投与する工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１１１】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、癌を患う被験者におい
て、癌抗原に対する抗原特異的免疫応答を増進する方法であって：（ａ）被験者にＦｌｔ
３リガンドを投与し；（ｂ）場合によって、１以上の補助分子を含んでなる薬剤組成物を
被験者に投与し；そして（ｃ）アジュバント中に配合した１以上の癌抗原を含んでなるワ
30
クチンを被験者に投与する工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１１２】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、ウイルス感染を患う被
験者において、ウイルス抗原に対する抗原特異的免疫応答を増進する方法であって：（ａ
）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；（ｂ）場合によって、１以上の補助分子を含んで
なる薬剤組成物を被験者に投与し；そして（ｃ）アジュバント中に配合した１以上のウイ
ルス抗原を含んでなるワクチンを被験者に投与する工程を含んでなる、前記方法に関する
。
【０１１３】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、細菌感染を患う被験者
40
において、細菌抗原に対する抗原特異的免疫応答を増進する方法であって：（ａ）被験者
にＦｌｔ３リガンドを投与し；（ｂ）場合によって、１以上の補助分子を含んでなる薬剤
組成物を被験者に投与し；そして（ｃ）アジュバント中に配合した１以上の細菌抗原を含
んでなるワクチンを被験者に投与する工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１１４】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、単細胞生物による感染
を患う被験者において、単細胞生物に対する抗原特異的免疫応答を増進する方法であって
：（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；（ｂ）場合によって、１以上の補助分子を
含んでなる薬剤組成物を被験者に投与し；そして（ｃ）アジュバント中に配合した単細胞
生物由来の１以上の抗原を含んでなるワクチンを被験者に投与する工程を含んでなる、前
50
(40)
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記方法に関する。
【０１１５】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、被験者において、抗原
に対する免疫応答を増進する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１１６】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、被験者において、抗原
10
に対する抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞免疫応答を増進する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１１７】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、被験者において、抗原
に対する抗原特異的Ｔヘルパー免疫応答を増進する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
20
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１１８】
前述の各態様において、Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同
時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与することが可能であり、そして補助分子
を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて
投与することが可能である。さらに、前述の各態様において、補助分子は、インターロイ
キン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、Ｇ
Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガン
ド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、
30
ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−
１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合
わせからなる群より選択可能である。
【０１１９】
動物モデルおよび実験動物における抗原および／またはワクチンのｉｎ ｖｉｖｏ評価
Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルを用いる、前述の方法はすべて、動物モデルおよび実
験動物において、抗原および／またはワクチンをｉｎ ｖｉｖｏ評価するのに受け入れや
すい。例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）および腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）のリストが増大
中であることから、ヒトにおける第Ｉ相試験の前に動物実験で評価する必要がある。上に
列挙するものなど、癌に関連するもの以外の抗原を用いて、ｉｎ ｖｉｖｏで抗原および
40
／またはワクチンの評価を行うことが可能である。
【０１２０】
したがって、動物モデルおよび／または実験動物（すなわち被験者）において、抗原に
対する免疫応答を評価する方法を提供する。以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの
１つの態様であり、該態様は、被験者において、抗原に対する免疫応答を評価する方法で
あって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；
（ｃ）抗原を被験者に投与し、ここで、抗原は、場合によってアジュバントとともに配
合可能である；そして
50
(41)
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（ｄ）抗原に対する被験者の免疫応答を評価する
工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１２１】
他の態様と同様に、Ｆｌｔ３リガンドおよび場合による補助分子を、ワクチン投与の前
に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与することが可能で
ある。補助分子は、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、
１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファ
およびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファ
ミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タ
ンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、Ｃ
10
ｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択可能である。
【０１２２】
被験者の免疫応答の評価は、限定されるわけではないが：ａ）細胞免疫の評価としての
過敏性の遅延；ｂ）ｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞溶解性Ｔリンパ球の活性；ｃ）ｉｎ ｖｉ
ｔｒｏでのＴヘルパーリンパ球の増殖活性；ｄ）抗原特異的抗体とともに、抗原特異的抗
体のアイソタイプのレベル；ｅ）腫瘍などの組織形態の変化；ｅ）特定の疾患または感染
の代理マーカーレベルの変化；およびｆ）抗原が誘導するサイトカインおよび／またはケ
モカイン産生、を測定することを含む、当該技術分野に知られる方法いずれによっても監
視可能である。
【０１２３】
20
アレルギーの治療におけるＦｌｔ３リガンド
Ｆｌｔ３−Ｌをアレルギーの治療に使用可能である。本明細書全体で記載するＦｌｔ３
−Ｌ免疫プロトコルは、アレルギーのアレルゲン特異的免疫療法に直接の有用性を有する
。アレルゲン特異的免疫療法は、原因アレルゲンへの続く曝露に関連する症状を改善する
のに有効な用量に到達するため、１以上のアレルギーを有する被験者に、増加する用量で
アレルゲンワクチンを投与することと定義される。アレルギーの免疫療法には、Ｆｌｔ３
−Ｌ免疫プロトコルおよびアレルギーのアレルゲン特異的免疫療法および／またはＦｌｔ
３−Ｌの投与を含むように修飾された脱感作療法が含まれる。
【０１２４】
アレルギー学的診断の技術分野に使用される適切なｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔ
30
ｒｏ技術いずれかを用いて、被験者を診断することが可能であり、これらには、限定され
るわけではないが、皮内連続終点試験（ＳＥＴ）、放射性アレルゲン吸着アッセイ（ＲＡ
ＳＴ）、ＲＡＳＴスポット試験、ヒスタミン放射性酵素（Ｒａｄｉｏｅｎｓｙｍａｔｉｃ
）アッセイ、ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＩｇＥおよびＩｇＧアッセイ、自発的合成アッセイとと
もに当該技術分野に知られる他のアッセイなどのより慣用的な試験が含まれる。
【０１２５】
アレルギーワクチンは当該技術分野に周知であり、そして一般的に、少なくとも１つの
アレルゲン、および適切なキャリアー、希釈剤、賦形剤、安定化剤および場合によるアジ
ュバントいずれかを含んでなると定義することが可能である。アレルゲンは、本明細書に
おいて、当該技術分野に認識されるアレルゲンいずれか；修飾アレルゲン（限定されるわ
40
けではないが、尿素、ＰＥＧ／ＰＶＡ、脱グリコシル化、多糖および／または光酸化など
の方法によって修飾）；アレルゴイド（限定されるわけではないが、チロシン吸収を含む
、または含まない、グルタルアルデヒドおよび／またはホルムアルデヒド処理などの方法
によって修飾）；一価同種異系抽出物；アレルゲンポリマー；コンジュゲート化アレルゲ
ン；アレルゲンのアレルゲン−ムラミルペプチド；アレルゲン・マイコロイルムラミルペ
プチドコンジュゲート；アレルゲン−プルラン化合物；アレルゲンおよびハプテン（単数
または複数）のコンジュゲート；アレルゲン、ハプテン（単数または複数）および親水性
ポリマーのコンジュゲート；尿素変性（ｄｅｎａｔｕｒｏｄ）抗原；組換えアレルゲン；
突然変異誘発した組換えアレルゲン；低刺激性アレルゲン（ｈｙｐｏａｌｌｅｒｇｅｎｓ
）および／または低刺激性アレルゲン性誘導体などの遺伝子操作アレルゲン（例えばＩｇ
50
(42)
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Ｅ結合エピトープが減少しているが、Ｔ細胞エピトープおよび遮断抗体として働くことが
可能なＩｇＧ抗体を誘導するためのエピトープを保持する分子）と定義される。
【０１２６】
アレルギーワクチンおよびＦｌｔ３−Ｌを、本明細書に記載する有効な方式および経路
いずれかで投与することが可能である。アレルゲンワクチンおよびＦｌｔ３−Ｌの投薬お
よび投与は、資格のある医師によって決定可能である。
【０１２７】
Ｆｌｔ３−Ｌ免疫プロトコルは、治療可能なアレルギーいずれかに対するアレルギー免
疫療法で使用可能であり、これらには、限定されるわけではないが：昆虫アレルギーおよ
び昆虫咬傷および／または刺傷（チリダニ、アリ、クモ、ハエ、ハチ、スズメバチ、蚊、
10
ブヨ等）；動物アレルギー（限定されるわけではないが：イヌ、ネコ、鳥、げっ歯類、ウ
シ、ヒツジ、ウマ、ブタ、ヤギ等の家畜および野生動物の毛皮、ふけ、排出物等）；アレ
ルギー性気管支炎、バルサムアレルギー；カンジダ菌アレルギー；カーペットおよび／ま
たは織物アレルギー；食物アレルギーまたは敏感性；金属アレルギー；松脂アレルギー；
殺菌剤アレルギー；肥料アレルギー；ホルムアルデヒドアレルギー；ガスアレルギー；接
着剤アレルギー；同種異系血清アレルギー；宝飾品アレルギー；メルカプトアレルギー；
カビおよび／またはうどん粉菌アレルギー；ペンキアレルギー；紙アレルギー；パラベン
類アレルギー；香水アレルギー；殺虫剤アレルギー；プラスチックアレルギー；シャンプ
ーアレルギー；石鹸アレルギー；チウラムアレルギー；タバコアレルギー；コムギアレル
ギー；酵母アレルギー；アレルギー性皮膚炎；アレルギー性鼻炎；アスピリン感受性；喘
20
息；アトピー性皮膚炎；接触皮膚炎；化粧品アレルギー；牛乳アレルギー；皮膚炎；ほこ
りアレルギー；花粉アレルギー；湿疹；草アレルギー；サリチル酸感受性等が含まれる。
【０１２８】
上に詳細に記載するように、Ｆｌｔ３−Ｌは、アレルギーワクチンおよび場合による補
助分子の投与前に、投与と同時に、そして／または投与に続いて、投与可能である。１つ
の態様において、Ｆｌｔ３−Ｌは、ワクチン接種前に、ワクチン接種と同時に、そして／
またはワクチン接種に続いて、連続１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、
９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１
９日、または２０日間、被験者に一日一度、毎日または２日ごと、３日ごと、４日ごと、
５日ごと、６日ごとまたは７日ごとに投与される。もちろん、上述のＦｌｔ３−Ｌ免疫プ
30
ロトコルのすべての態様は、アレルギーの治療に適応可能である。さらに、当該技術分野
に知られる現存のアレルギー免疫措置を修飾して、Ｆｌｔ３−Ｌの投与を含むようにする
ことが可能である。
【０１２９】
１つの態様において、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルは、１以上のアレルギーを有す
る被験者において、アレルギーを治療する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）アレルギーワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなり、ここでＦｌｔ３リガンドは、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同
40
時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与し、そしてここで補助分子は、ワクチン
投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与し、そし
てここで補助分子は、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５
、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルフ
ァおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦフ
ァミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合
タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、
ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、前記方法に関する。
【０１３０】
上述のように、Ｆｌｔ３−Ｌは、造血幹細胞および前駆細胞とともに、多様な種類の免
50
(43)
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疫細胞、特に樹状細胞を拡大させる。さらに、Ｆｌｔ３−Ｌは、Ｔｈ１型樹状細胞を拡大
させる能力を有する。したがって、アレルギー免疫療法におけるＦｌｔ３−Ｌ免疫プロト
コルは、典型的なＴｈ２応答からＴｈ１型応答に、被験者の免疫応答を駆動することが可
能である。サイトカインプロフィールおよび免疫応答におけるこのシフトは、ＩｇＥ産生
よりＩｇＧ産生を駆動し、ＩＬ−４の循環レベルを減少させ、好酸球の補充および活性化
を減少させるとともに、肥満細胞の増殖を減少させる。その結果、続くアレルゲン曝露は
アレルギー反応を引き起こさない。
【０１３１】
当該技術分野に知られる標準法および技術、例えば限定されるわけではないが、患者由
来のアレルゲン特異的ＩｇＧおよびＩｇＥ抗体の測定によって、Ｆｌｔ３−Ｌ免疫プロト
10
コルを用いたアレルゲン特異的免疫療法の有効性を評価することが可能である。Ｆｌｔ３
−Ｌ免疫プロトコルにおけるアレルゲン特異的免疫療法を受けている患者はまた、限定さ
れるわけではないが、抗ヒスタミン剤、充血除去剤、ステロイド、鎮痛剤、咳止め等の１
以上の慣用療法と組み合わせて治療可能である。
【０１３２】
本明細書に引用するすべての刊行物の相当する開示は、特に本明細書に援用される。以
下の例は、特定の態様を例示するために提供され、そして本発明の範囲を限定するために
提供されるのではない。
【実施例】
【０１３３】
20
実施例
（実施例１）
本実施例は、樹状細胞拡大にＦｌｔ３リガンドを用いる方法を記載する。細胞収集前に
、循環ＰＢＰＣおよびＰＢＳＣを可動化するか、またはその数を増加させることが望まし
い可能性がある。可動化によって、ＰＢＰＣおよびＰＢＳＣ収集が改善される可能性があ
り、そして可動化は、こうした細胞の収集前に、患者にＦｌｔ３リガンドまたはサーグラ
モスティム（ｓａｒｇｒａｍｏｓｔｉｍ）（Ｌｅｕｋｉｎｅ（登録商標）、Ｉｍｍｕｎｅ
ｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ワシントン州シアトル）を静脈内投与することによって達
成可能である。ＣＳＦ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ｃ−ｋｉｔリガンド、Ｇ−ＣＳＦ、ＥＰＯ、
ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、
30
ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５
、ＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−３融合タンパク質、ＬＩＦ、ＦＧＦおよびそれらの組み合わせな
どの他の増殖因子を、Ｆｌｔ３リガンドと組み合わせて、連続して、または同時に投与す
ることが可能である。当該技術分野に知られるアフェレーシス法を用いて、可動化または
非可動化ＰＢＰＣおよびＰＢＳＣを収集する。例えばＢｉｓｈｏｐら， Ｂｌｏｏｄ， ｖｏｌ．８３， Ｎｏ．２， ｐｐ．６１０−６１６（１９９４）を参照されたい。簡潔
には、慣用的な装置、例えばＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓモデルＶ５０アフェレーシス装置（
Ｈａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ、メリーランド州ブレインツリー）を用いて、ＰＢＰＣおよびＰ
8
ＢＳＣを収集する。およそ６．５ｘ１０ 単核細胞（ＭＮＣ）／患者ｋｇが収集されるま
で、典型的には週５回を越えずに、４時間の収集を行う。カルシウムまたはマグネシウム
40
を含まないハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）でおよそ１：６に希釈し、そしてリンパ球分
離培地（Ｏｒｇａｎｏｎ Ｔｅｋｎｉｋａ、ノースカロライナ州ダーハム）上に重層する
ことによって、顆粒球−マクロファージコロニー形成単位（ＣＦＵ−ＧＭ）に関して、収
集したＰＢＰＣおよびＰＢＳＣのアリコットをアッセイする。遠心分離後、界面のＭＮＣ
を収集し、洗浄し、そしてＨＢＳＳに再懸濁する。およそ３００，０００ＭＮＣを含有す
る１ミリリットルアリコット、修飾マッコイ５Ａ培地、０．３％寒天、２００Ｕ／ｍｌ組
換えヒトＧＭ−ＣＳＦ、２００Ｕ／ｍｌ組換えヒトＩＬ−３、および２００Ｕ／ｍｌ組換
えヒトＧ−ＣＳＦを、３７℃、５％ＣＯ2中、完全に加湿した空気中で、１４日間培養す
る。場合によって、Ｆｌｔ３リガンドまたはＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−３融合分子（ＰＩＸＹ
３２１）を培養物に添加することが可能である。これらの培養物をライト染色液で染色
50
(44)
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し、そして実体顕微鏡を用いて、ＣＦＵ−ＧＭコロニーをスコア付けする（Ｗａｒｄら，
Ｅｘｐ． Ｈｅｍａｔｏｌ．， １６：３５８（１９８８））。あるいは、Ｓｉｅｎａ
ら， Ｂｌｏｏｄ， Ｖｏｌ．７７， Ｎｏ．２， ｐｐ４００−４０９（１９９１）の
ＣＤ３４／ＣＤ３３フローサイトメトリー法、または当該技術分野に知られる他の方法い
ずれかを用いて、ＣＦＵ−ＧＭコロニーをアッセイすることが可能である。
【０１３４】
ＣＦＵ−ＧＭ含有培養物を速度管理フリーザー（例えばＣｒｙｏ−Ｍｅｄ、ミシガン州
マウントクレメンス）中で凍結し、その後、液体窒素の気相に保管する。１０％のジメチ
ルスルホキシドを凍結保護剤として使用可能である。患者からすべての収集を終えたら、
ＣＦＵ−ＧＭ含有培養物を融解し、そしてプールする。融解した細胞コレクションを、上
10
述の他のサイトカインと組み合わせてＦｌｔ３リガンドと接触させる。Ｆｌｔ３リガンド
へのこうした曝露は、ＣＦＵ−ＧＭを樹状細胞系譜に駆動するであろう。樹状細胞を、患
者の静脈内に再注入する。
【０１３５】
（実施例２）
本実施例は、ＣＤ４０Ｌで刺激した樹状細胞が、同種異系抗原を提示し、そしてしたが
ってＴ細胞増殖を引き起こす能力を例示する。ヒト・ドナーの骨髄からＣＤ３４＋細胞を
得て、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４、ＦＬＴ３リガンド、幹細胞因子とともに、ＤＣ分化を促
進する当該技術分野に知られる他のサイトカインなどの１以上のサイトカインの存在下で
２週間培養し、そして実質的に実施例１に記載するようなフローサイトメトリーによって
20
単離した。混合リンパ球反応（ＭＬＲ）に用いる前に、樹状細胞の増殖を支持するサイト
カインを含有するマッコイ増進培地中、ＣＤ４０Ｌ（１μｇ／ｍｌ）の可溶性三量体型の
存在下または非存在下で、樹状細胞をさらに２４時間培養した。
【０１３６】
２−アミノエチルイソチオウロニウムブロミド・ヒドロブロミド処理したヒツジ赤血球
とロゼット形成させることによって、非ＨＬＡマッチドナーの血液からＴ細胞を精製した
。製造者のプロトコルにしたがって、ＭＡＣＳ（Ｍｉｌｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、カリフ
ォルニア州サニーベール）を用いて、免疫磁気選択を用い、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋集団
をさらに精製した。力価決定した数の樹上細胞の存在下、ＲＰＭＩ（１０％熱不活化ウシ
胎児血清（ＦＢＳ））中の精製Ｔ細胞を用いて、３７℃、１０％ＣＯ2大気中で、細胞増
30
5
殖アッセイを行った。ウェルあたりおよそ１ｘ１０ のＴ細胞を、三つ組で、丸底９６ウ
ェルマイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中、多様な数の非マッチ樹状細胞の存
在下で、７日間培養した。培養の最後の８時間、トリチウム化したチミジン（２５Ｃｉ／
ｎｍｏｌ、Ａｍｅｒｓｈａｍ、イリノイ州アーリントンハイツ）１μＣｉ／ウェルで細胞
をパルス処理した。
【０１３７】
自動化細胞採取装置を用いて、ガラスファイバーディスク上に細胞を採取し、そして液
体シンチレーション分光分析によって、取り込まれたｃｐｍを測定した。結果によって、
ＭＬＲに使用する前にＣＤ４０Ｌに曝露されていない樹状細胞に比較して、ＣＤ４０Ｌで
活性化された樹状細胞は、同等のＴ細胞増殖を刺激するのに３倍少ない数しか必要とされ
40
ないことが立証された。この増加は、同種異系応答性Ｔ細胞を刺激する細胞表面分子の発
現が増加しているためである可能性が最も高い。
【０１３８】
（実施例３）
本実施例は、樹状細胞が、Ｔ細胞の抗原特異的増殖を刺激する能力を例示する。破傷風
トキソイドに対して応答性であると考えられるヒト・ドナーの骨髄からＣＤ３４＋細胞を
得て、選択したサイトカインの存在下で２週間培養し、そして実質的に実施例１に記載す
るように、フローサイトメトリーによって単離した。破傷風毒素（ＴＴＸ）抗原提示アッ
セイに用いる前に、樹状細胞の増殖を支持するサイトカインを含有するマッコイ増進培地
中、ＣＤ４０Ｌ（１μｇ／ｍｌ）の可溶性三量体型の存在下または非存在下で、樹状細胞
50
(45)
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をさらに２４時間培養し、その後、３７℃、１０％ＣＯ2大気中、精製ＴＴＸ（Ｃｏｎｎ
ａｕｇｈｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｎｃ．、ペンシルバニア州スウィフトウォーター
）で２４時間パルス処理した。
【０１３９】
精製ＴＴＸおよび低濃度のＩＬ−２およびＩＬ−７（それぞれ２ｎｇ／ｍｌおよび５ｎ
-
ｇ／ｍｌ）の存在下で、ＣＤ３４抗体カラムから溶出したＣＤ３４ 細胞を２週間培養す
-
ることによって、自己破傷風トキソイド応答性Ｔ細胞を得た。ＣＤ３４ 集団は、ある割
合のＴ細胞（約５％）を含有し、この割合は、破傷風トキソイドとともに抗原提示細胞と
して作用する他の細胞種に対して応答性である。２週目までに、これらの細胞の解析によ
って、これらが約９０％ Ｔ細胞であり、その大部分が破傷風トキソイド特異的であり、
10
Ｔ細胞活性化マーカーレベルが低いことが示された。
【０１４０】
破傷風トキソイドでパルス処理した樹上細胞の存在下、１０％熱不活化ウシ胎児血清（
-
ＦＢＳ）を添加したＲＰＭＩ中、上述のようなＣＤ３４ 骨髄細胞由来のＴＴＸ特異的Ｔ
細胞を用いて、３７℃、１０％ＣＯ2大気中で、抗原特異的Ｔ細胞増殖アッセイを行った
5
。ウェルあたりおよそ１ｘ１０ のＴ細胞を、三つ組で、丸底９６ウェルマイクロタイタ
ープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中、力価決定した数の樹状細胞の存在下で、５日間培養し
た。培養の最後の４∼８時間、トリチウム化したチミジン（２５Ｃｉ／ｎｍｏｌ、Ａｍｅ
ｒｓｈａｍ、イリノイ州アーリントンハイツ）１□Ｃｉ／ウェルで細胞をパルス処理した
。自動化細胞採取装置を用いて、ガラスファイバーディスク上に細胞を採取し、そして液
20
体シンチレーション分光分析によって、取り込まれたｃｐｍを測定した。図２に示す結果
によって、ＣＤ４０Ｌと培養された樹状細胞は、ＣＤ４０Ｌに曝露されていない樹状細胞
より、ＴＴＸ特異的Ｔ細胞に対して抗原を提示するのに約１０倍有効でないことが示され
た。
【０１４１】
（実施例４）
本実施例は、Ｆｌｔ３リガンドを用いて、ｉｎ ｖｉｖｏで抗腫瘍免疫応答を増大させ
る方法を記載する。メスＣ５７ＢＬ／１０Ｊ（Ｂ１０）マウス（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、メイン州バーハーバー）に、腹部正中線に総量５０μｌを皮内
5
注入することによって、５ｘ１０ の生存Ｂ１０．２またはＢ１０．５線維肉腫腫瘍細胞
30
を注入した。線維肉腫Ｂ１０．２およびＢ１０．５株は、Ｂ１０起源のものであり、そし
て先に記載されてきている。本明細書に援用されるＬｙｎｃｈら， Ｅｕｒｏ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２１：１４０３（１９９１）を参照されたい。５ｍｇのメチルコラ
ントレンを含有するパラフィンペレットを皮下移植することによって、線維肉腫Ｂ１０．
２株を誘導し、そして紫外照射に長時間曝露することによって、Ｂ１０．５株を誘導した
。５％ＦＢＳ、２ｎＭ Ｌ−グルタミン、５０Ｕ／ｍｌペニシリンおよび５０μｇ／ｍｌ
ストレプトマイシンを含有するα−修飾ＭＥＭ中、腫瘍細胞株をｉｎ ｖｉｔｒｏで維持
した。総体積１００μｌを皮下注射することによって、１９日間の期間に渡って（別に示
さない限り）、原則として毎日、組換えヒトＦｌｔ３リガンド（１０μｇ／注射）を投与
した。対照マウスには、１００ｎｇ ＭＳＡを含有する同様の体積の緩衝液を、同様に注
40
入した。腫瘍曝露後の時間に対して腫瘍サイズをプロットすることによって、腫瘍増殖速
度を決定した。カリパスで測定した２つの垂直な直径の積として、腫瘍サイズを計算し、
そして特定の処置群内の腫瘍を持つマウスのみの平均腫瘍サイズとして表す。実験終了時
、各処置群に関して、曝露した数に比較した、腫瘍を持つマウス数を以下のデータに示す
。
【０１４２】
表Ｉから、データは６つの異なる実験を編集したものであり、ここで腫瘍を持つマウス
をＦｌｔ３リガンドまたはＭＳＡいずれかで処置した。完全な腫瘍退化は、ＭＳＡで処置
したマウスでは３０匹のうち１匹であったのに比較して、Ｆｌｔ３リガンドで処置したマ
ウスでは５０匹のうち１９匹で観察された（フィッシャーの直接検定を用いるとｐ＜０．
50
(46)
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０００１）。Ｆｌｔ３リガンドで処置したマウスの腫瘍増殖速度（腫瘍曝露後、第５週の
2
腫瘍を持つマウスにおいて、平均腫瘍サイズは６０＋／−８ｍｍ であった）は、ＭＳＡ
2
で処置したマウス（腫瘍曝露後、第５週の平均腫瘍サイズは１８５＋／−１７ｍｍ であ
った）に比較して有意に減少しているという観察もまた、確認された（分散分析によって
ｐ．０００１）。
【０１４３】
【表２】
10
20
【０１４４】
対照に比較して、Ｆｌｔ３リガンドを用いると、腫瘍サイズがはっきりと妨害された。
したがって、このデータによって、Ｆｌｔ３リガンドが、外来（ｆｏｒｅｉｇｎ）抗原に
対する、そして特に癌に対する免疫応答の増大に重要なサイトカインであることが示され
る。
【０１４５】
（実施例５）
30
本実施例は、インターフェロン・アルファと組み合わせてＦｌｔ３リガンドを使用する
と、ｉｎ ｖｉｖｏで抗腫瘍免疫応答が増大することを立証する。１つの研究において、
Ｂ１０．２線維肉腫腫瘍細胞株（上述）を、第０日にＣ５７ＢＬ／１０Ｊ（Ｂ１０）マウ
スに移植した。マウス１組（ｎ＝１０）を、腫瘍曝露後、第１０日∼第２９日に、組換え
ヒトＦｌｔ３リガンド（５０μｇ／日、皮下注射による）で処置した。別の組のマウス（
ｎ＝５）を、腫瘍曝露後、第２１日∼第２５日に、ヒト・インターフェロン・アルファ（
インターフェロン・アルファＡ／Ｄ；６０，０００Ｕ／日、皮下注射による）で処置した
。第３の組のマウス（ｎ＝５）を、第１０日∼第２９日にＦｌｔ３リガンドで、そしてま
た、第２１日∼第２５日にインターフェロン・アルファで処置した。対照マウスには、１
００ｎｇ ＭＳＡを含有する緩衝液を注射した。７週間の期間に渡って、腫瘍サイズを測
40
定することによって、腫瘍増殖速度を決定した。カリパスで測定した２つの垂直な直径の
2
積として、腫瘍サイズを計算し、そしてｍｍ で平均腫瘍サイズとして表す。平均腫瘍サ
イズの決定には、各群内で腫瘍を持つマウスのみを考慮した。各処置群に関して、腫瘍の
発生率もまた決定した（すなわち曝露した数に比較した、腫瘍を持つマウスの数）。
【０１４６】
表３は、腫瘍を持つ動物の平均腫瘍サイズを示し、そして表４は、腫瘍の発生率を示す
。このデータによって、Ｂ１０．２腫瘍モデルの免疫応答を増進する際に、インターフェ
ロン・アルファがＦｌｔ３リガンドと相乗作用を生じることが立証される。最も注目すべ
きことに、腫瘍拒絶率は、Ｆｌｔ３リガンド単独では４０％であり、そしてＦｌｔ３リガ
ンドおよびインターフェロン・アルファを組み合わせると８０％であった。
50
(47)
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【０１４７】
【表３】
10
20
【０１４８】
【表４】
30
40
【０１４９】
（実施例６）
本実施例は、ＣＤ４０結合タンパク質と組み合わせてＦｌｔ３リガンドを使用すると、
ｉｎ ｖｉｖｏで抗腫瘍免疫応答が増大することを立証する。１つの研究において、上の
50
(48)
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5
実施例３に記載するように、生存Ｂ１０．２線維肉腫腫瘍細胞株５ｘ１０ 細胞を、Ｃ５
７ＢＬ／１０Ｊ（Ｂ１０）マウス（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、メ
イン州バーハーバー）に皮内注射し、そしてマウスを、各８匹を含有する４組にさらに分
けた。マウスの一組では、腫瘍注射と同じ日に始まって、総量１００μｌを皮下注射する
ことによって、２０日間の期間に渡って、毎日、各マウスに組換えヒトＦｌｔ３リガンド
（１０μｇ／注射／日）を投与した。別の組のマウスでは、各マウスに、各日、同じ体積
および量のＣＤ４０−Ｌを２０日間注射した。第三の組では、各マウスに、１日あたり１
０μｇのＦｌｔ３リガンドおよび１０μｇのＣＤ４０−Ｌの組み合わせを２０日間注射し
た。対照マウスには、１００ｎｇ ＭＳＡを含有する同様の体積の緩衝液を、同様に注射
した。腫瘍曝露後、６週間の期間に渡って、毎週、腫瘍サイズを測定して、腫瘍増殖速度
10
を決定した。カリパスで測定した２つの垂直な直径の積として、腫瘍サイズを計算し、そ
して平均腫瘍サイズとして表す。平均サイズの決定には、各群内で腫瘍を持つマウスのみ
を考慮した。腫瘍拒絶頻度もまた決定し、そして実験終了時、各処置群に関して、曝露し
た数に比較した、腫瘍を持たないマウスの数として表した。
【０１５０】
表５は、曝露後６週間の期間に渡って、週１回計算した、腫瘍を持つ動物における平均
腫瘍サイズの形で、データを提供する。表６は、曝露後６週間に渡る、各組のマウスの腫
瘍拒絶頻度パーセントを詳述する。該データによって、腫瘍を持つマウスに関して、Ｆｌ
ｔ３リガンドで処置したマウス、およびＣＤ４０−Ｌと組み合わせてＦｌｔ３リガンドで
処置したマウスの平均腫瘍サイズが同等であり、そして腫瘍を持つ対照マウスの腫瘍サイ
20
ズより小さいことが立証される。しかし、重要なことに、併用療法を受けたマウスでは、
Ｆｌｔ３リガンドまたはＣＤ４０−Ｌを単独で投与されたマウスより、腫瘍拒絶頻度が有
意により高かった。より具体的には、曝露後、第６週、併用療法を受けたマウスの６２．
５％が完全な腫瘍拒絶を経験した。対照的に、曝露後、第６週、Ｆｌｔ３リガンドを単独
で投与されたマウスの２５％が完全腫瘍拒絶を経験し、そしてＣＤ４０−Ｌを単独で投与
されたか、またはＭＳＡを投与されたマウスは、完全腫瘍拒絶をまったく経験しなかった
。
【０１５１】
【表５】
30
【０１５２】
40
(49)
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【表６】
10
【０１５３】
別の研究において、Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウスに、非常に侵襲性の高い腫瘍、８７線維肉腫
腫瘍細胞株（Ｃ３Ｈ／ＨｅＮ（ＭＴＶ−）マウスを紫外照射に長期間曝露することによっ
5
て生成）５ｘ１０ 細胞を皮内注射した。その後、マウスを、各１０匹を含有する４組に
20
さらに分けた。マウスの一組では、腫瘍注射の後の日に始まって、皮下注射することによ
って、２０日間の期間に渡って、毎日、各マウスに組換えヒトＦｌｔ３リガンド（１０μ
ｇ／注射／日）を投与した。別の組のマウスでは、各マウスに、各日、同じ体積および量
のＣＤ４０−Ｌを、第７日に始まって、そして第２０日まで続けて注射した。第三の組で
は、各マウスに、ＣＤ４０−ＬおよびＦｌｔ３リガンドの併用療法を行った。併用療法に
は、腫瘍注射翌日に始まって、そして第２０日まで続く１０μｇ／日のＦｌｔ３リガンド
、および第７日から始まって、そして第２０日まで続く１０μｇ／日のＣＤ４０−Ｌが含
まれた。対照群のマウスには、１００ｎｇ ＭＳＡを含有する同様の体積の緩衝液を、同
様に注射した。腫瘍曝露後６週間の期間に渡って、毎週、腫瘍サイズを測定することによ
って、腫瘍増殖速度を決定した。カリパスで測定した２つの垂直な直径の積として、腫瘍
30
サイズを計算し、そして平均腫瘍サイズとして表す。平均サイズの決定には、腫瘍を持つ
マウスのみを考慮した。腫瘍拒絶頻度もまた決定し、そして実験終了時、各処置群に関し
て、曝露した数に比較した、腫瘍を持たないマウスの数として表した。
【０１５４】
表７は、曝露後６週間の期間に渡って、週１回計算した、腫瘍を持つ動物における平均
腫瘍サイズの形で、データを提供する。表８は、曝露後６週間の期間に渡る、各組のマウ
スの腫瘍拒絶頻度パーセントを詳述する。該データによって、腫瘍を持つマウスに関して
、ＣＤ４０−Ｌと組み合わせてＦｌｔ３リガンドで処置したマウスの平均腫瘍サイズが、
腫瘍を持つ対照マウス、並びにＦｌｔ３リガンドのみおよびＣＤ４０Ｌのみを投与した群
の腫瘍を持つマウスの腫瘍サイズより有意に小さいことが立証される。重要なことに、併
40
用療法を受けたマウスでは、Ｆｌｔ３リガンドまたはＣＤ４０−Ｌを単独で投与されたマ
ウスより、腫瘍拒絶頻度が有意により高かった。より具体的には、曝露後、第６週、併用
療法を受けたマウスの５０％が完全な腫瘍拒絶を経験した。対照的に、曝露後、第６週、
Ｆｌｔ３リガンドを単独で投与されたマウスの１０％が完全腫瘍拒絶を経験し、そしてＣ
Ｄ４０−Ｌを単独で投与されたか、またはＭＳＡを投与されたマウスは、完全腫瘍拒絶を
まったく経験しなかった。
【０１５５】
上述の観察によって、Ｆｌｔ３リガンドおよびＣＤ４０−Ｌ併用療法が、ｉｎ ｖｉｖ
ｏで抗腫瘍免疫応答を劇的に上方制御可能であることが立証される。このデータによって
、Ｆｌｔ３リガンドおよびＣＤ４０−Ｌ単独で用いた際は、腫瘍拒絶をほとんどまたはま
50
(50)
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ったく示さないことから、Ｆｌｔ３リガンドおよびＣＤ４０結合タンパク質、ＣＤ４０−
Ｌの間に相乗作用が存在することが示される。併用では、拒絶は劇的である。研究によっ
て、相乗作用に加えて、ＣＤ４０−ＬおよびＦｌｔ３リガンドの併用が、腫瘍において、
ＩＬ−１２ ｍＲＮＡの発現を誘導することも示された。
【０１５６】
【表７】
10
20
【０１５７】
【表８】
30
40
【０１５８】
（実施例７）
本実施例は、４−１ＢＢと反応性である抗体と組み合わせてＦｌｔ３リガンドを使用す
ると、ｉｎ ｖｉｖｏで抗腫瘍免疫応答が増大することを立証する。１つの研究において
5
、生存Ｂ１０．２線維肉腫腫瘍細胞株５ｘ１０ 細胞を、Ｃ５７ＢＬ／１０Ｊ（Ｂ１０）
マウス（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、メイン州バーハーバー）に皮
内注射した。マウスの一組では、腫瘍注射と同じ日に始まって、総量１００μｌを皮下注
射することによって、１４日間の期間に渡って、毎日、各マウスに組換えヒトＦｌｔ３−
Ｌ（１０μｇ／注射／日）を投与した。別の組のマウスでは、各マウスに、腫瘍曝露後、
第３日および第６日に、１００μｇのラット抗ｍｕ ４−１ＢＢ（クローンｍ６）をＩＰ
50
(51)
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注射した。第三の組では、各マウスに、第１３日および第１６日に、１００μｇのラット
抗ｍｕ ４−１ＢＢクローンｍ６を注射した。第四の組のマウスには、腫瘍曝露後、第１
日∼第１４日に１０μｇのＦｌｔ３リガンドを、そして第１３日および第１６日に１００
μｇのラット抗ｍｕ ４−１ＢＢクローンｍ６を組み合わせて注射した。対照マウスには
、１００ｎｇ ＭＳＡを含有する緩衝液を注射した。腫瘍曝露後、５週間の期間に渡って
、毎週、腫瘍サイズを測定して、腫瘍増殖速度を決定した。カリパスで測定した２つの垂
2
直な直径の積として、腫瘍サイズを計算し、そしてｍｍ で平均腫瘍サイズとして表す。
平均腫瘍サイズの決定には、各群内で腫瘍を持つマウスのみを考慮した。腫瘍発生数もま
た決定し、そして実験終了時、各処置群に関して、曝露した数に比較した、腫瘍を持つマ
ウスの数として表した。
10
【０１５９】
表９は、曝露後８週間の期間に渡って、週１回計算した、腫瘍を持つ動物における平均
腫瘍サイズの形で、データを提供する。表１０は、曝露後８週間の期間に渡る、各組のマ
ウスの腫瘍発生パーセントを詳述する。該データによって、腫瘍を持つマウスに関して、
Ｆｌｔ３リガンド単独で処置したマウス、および抗４−１ＢＢ措置で処置したマウスの平
均腫瘍サイズは類似であることが立証される。しかし、４−１ＢＢと反応性である抗体と
組み合わせてＦｌｔ３リガンドをマウスに投与すると、腫瘍を持つマウスの平均腫瘍サイ
ズが顕著に減少する。具体的には、曝露後、第５週、併用療法を受けたマウスは平均腫瘍
サイズが０であり、１００％腫瘍拒絶を示した。このデータは、併用療法を受けたマウス
では、Ｆｌｔ３リガンドまたは４−１ＢＢ抗体を単独で投与されたマウスより腫瘍発生率
20
が有意に低かったことを立証する、表１０の数字によって支持される。より具体的には、
曝露後、第５週、併用療法を受けたすべてのマウスが完全腫瘍拒絶（０％腫瘍発生）を経
験した。対照的に、曝露後、第５週、Ｆｌｔ３リガンドを単独で投与されたマウスの７０
％が腫瘍を有し、そして４−１ＢＢ抗体を単独で投与されたマウスの５０％および７０％
が腫瘍を有した。このデータは、免疫応答を増進する際に、抗４−１ＢＢがＦｌｔ３リガ
ンドと相乗作用する証拠を提供する。
【０１６０】
【表９】
30
40
【０１６１】
50
(52)
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【表１０】
10
20
【０１６２】
（実施例８）
本実施例は、抗原特異的免疫応答を増進することが示されたＦｌｔ３リガンド免疫プロ
トコルの１つの態様を記載する。Ｆｌｔ３リガンド、ＰＥＧ化ＧＭ−ＣＳＦおよびＣＤ４
０Ｌがワクチンに対する免疫応答を増進するかどうかを決定する実験を設計した。
【０１６３】
以下の研究は、周知のＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウスモデルを用
30
いた。該研究は、ＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウス由来の少数のＴ細
胞を、非トランスジェニック・コンジェニックマウスに静脈内移植することを伴う。該ト
ランスジェニックマウスは、ＭＨＣクラスＩおよびＩＩの背景で、ニワトリ卵オボアルブ
ミン（ＯＶＡ）由来の選択ペプチドを特異的に認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現す
b
る。Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドを有するＯＴ−Ｉマウスは、Ｈ−２Ｋ に結合した
、ＯＶＡ257-264ペプチド（ＳＩＩＮＦＥＫＬ−配列番号３）に特異的なＴＣＲのα鎖お
よびβ鎖に関してトランスジェニックである（Ｈｏｇｑｕｉｓｔ， Ｋ．Ａ．ら， Ｃｅ
ｌｌ， ７６， １７−２７， １９９４）。やはりＣ５７ＢＬ／６バックグラウンドを
b
有するＯＴ−ＩＩマウスは、ＩＡ の背景に提示されるＯＶＡ323-339ペプチド（ＩＳＱＡ
ＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲ−配列番号４）に特異的なＴＣＲに関してトランスジェニッ
40
クである（Ｂａｒｎｄｅｎ， Ｍ．Ｊ．ら， Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．
， ７６， ３４， １９９８）。
【０１６４】
ＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウス由来のおよそ２００万の脾臓細胞
5
およびリンパ節細胞をＬｙ５．１コンジェニックマウスに移した（およそ４ｘ１０ Ｃ
Ｄ４＋ Ｔ細胞およびＣＤ８＋ Ｔ細胞に相当する）。移植のおよそ２４時間後、不完全
フロイントアジュバント（ＩＦＡ−Ｄｉｆｃｏ／Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ニ
ュージャージー州フランクリンレークス）中で乳化したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチ
ド各２５μｇで、マウスを皮下（ｓ．ｃ．）免疫した。ＩＦＡはパラフィンオイルであり
、そしてペプチドのデポとして、それとともに炎症誘発性シグナルとして働くと考えられ
50
(53)
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る。
【０１６５】
処置群を表１１に提示する。Ｆｌｔ３リガンドは、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨ
Ｏ）細胞株中、周知の組換えＤＮＡ技術によって産生され、そしてＩｍｍｕｎｅｘ Ｃｏ
ｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ワシントン州シアトルから入手可能である。第１群では、第１１日
に、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中に配合した卵ペプチドで免疫し、この群は
陽性対照として働いた。第２群では、第１１日に、不完全フロイントアジュバント（ＩＦ
Ａ）中に配合した卵ペプチドを投与した。第３群では、第１１日に、リン酸緩衝生理食塩
水（ＰＢＳ）中に配合した卵ペプチドを投与した。第４群では、連続１０日間、襟首に１
日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に
10
配合した卵ペプチドで免疫した。第５群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇ
のＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合した卵ペプチ
ドで免疫し、そして第１１日および第１２日に、免疫部位で１０μｇのＣＤ４０Ｌをｓ．
ｃ．投与した。第６群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガン
ドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合した卵ペプチドで免疫し、そし
て第１１日∼第１５日まで、免疫部位（襟首）から遠位の部位で、１０μｇのＣＤ４０Ｌ
をｓ．ｃ．投与した。第７群では、第１１日に、ＩＦＡ中に配合した卵ペプチドで免疫し
、そして第１１日および第１２日に、免疫部位で、１０μｇのＣＤ４０Ｌをｓ．ｃ．投与
した。第８群では、第１１日に、ＩＦＡ中に配合した卵ペプチドで免疫し、そして第１１
日∼第１５日に、免疫部位（襟首）から遠位の部位で、１０μｇのＣＤ４０Ｌをｓ．ｃ．
20
投与した。第９群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドを
ｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合した卵ペプチドで免疫し、そして第
１１日および第１２日に、免疫部位で、５μｇのＰＥＧ化ＧＭ−ＣＳＦ（ｐＧＭ−ＣＳＦ
）をｓ．ｃ．投与した。第１０群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌ
ｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合した卵ペプチドで免
疫し、そして第１１日∼第１５日まで、免疫部位（襟首）から遠位の部位で、５μｇのＰ
ＥＧ化ＧＭ−ＣＳＦ（ｐＧＭ−ＣＳＦ）をｓ．ｃ．投与した。第１１群では、第１１日に
、ＩＦＡ中に配合した卵ペプチドで免疫し、そして第１１日および第１２日に、免疫部位
で、５μｇのｐＧＭ−ＣＳＦをｓ．ｃ．投与した。第１２群では、第１１日に、ＩＦＡ中
に配合した卵ペプチドで免疫し、そして第１１日∼第１５日まで、免疫部位（襟首）から
遠位の部位で、５μｇのｐＧＭ−ＣＳＦをｓ．ｃ．投与した。
【０１６６】
30
(54)
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【表１１】
10
20
30
【０１６７】
免疫後、第２日、第５日、および第９日、流入領域リンパ節から細胞を採取した（典型
的には、免疫部位から流出するリンパ節：２つの鼠径リンパ節および１つの副腋窩リンパ
節から）。単細胞懸濁物を調製し、そしてフローサイトメトリー解析（ＦＡＣｓ）によっ
て、ドナーＣＤ４＋およびＣＤ８＋トランスジェニックＴ細胞の頻度を計算した。クラス
Ｉペプチドでパルス処理した標的細胞の特異的溶解を測定する、標準的な細胞傷害性Ｔ細
胞アッセイとともに、ＥＬＩＳＰＯＴ
T M
（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ニュージ
40
ャージー州フランクリンレークス）で測定されるような、ＯＴ−ＩＩペプチドでのｉｎ ｖｉｔｒｏ再刺激後のＩＦＮγ産生によって、機能アッセイも行った。
【０１６８】
図１Ａ∼Ｅ、２Ａ∼Ｅおよび３Ａ∼Ｅに示すように、マウスをＦｌｔ３リガンドで前処
置した際に、ＣＤ８＋トランスジェニックＴ細胞の劇的な拡大が生じた。免疫後、第５日
、流入領域リンパ節（ＤＬＮ）のトランスジェニックＣＤ８＋ Ｔ細胞数は、Ｆｌｔ３リ
ガンドを投与されないマウスにおけるより、ＩＦＡ中に配合されたペプチドでの免疫前に
Ｆｌｔ３リガンドを投与されたマウスにおいて、およそ３４倍高く、そしてＰＢＳ中に配
合されたペプチドのみを投与されたマウスより１１４倍高かった。免疫後にさらにｐＧＭ
−ＣＳＦを添加すると、Ｆｌｔ３リガンドに誘導されたＣＤ８＋ Ｔ細胞拡大が増大し、
50
(55)
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そして延長されるようである。
【０１６９】
Ｆｌｔ３リガンド前処置およびＩＦＡアジュバント中に配合された抗原での免疫の組み
合わせは、ＣＴＬ生成に劇的な効果を有した。Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルによって
拡大されたＣＤ８＋ Ｔ細胞は、ＯＴ−Ｉペプチドでパルス処理した標的でｉｎ ｖｉｔ
ｒｏ再刺激した５日後の標準的ＣＴＬアッセイ（ＣＴＬ活性を測定するための慣用的なプ
ロトコル）によって測定されるように、機能性の、抗原特異的なエフェクター細胞であっ
た。免疫５日後、抗原特異的ＣＴＬは、ＤＬＮ中のすべての細胞の２５∼４０％を構成す
6
るように拡大され、これは約２．５∼９ｘ１０ 細胞（ｎ＝４実験）に等しかった。図４
Ａおよび４Ｂは、免疫後にＦｌｔ３リガンドを投与され、そして場合によって、ｐＧＭ−
10
ＣＳＦまたはＣＤ４０−Ｌなどの補助分子を投与された群が、抗原特異的ＣＴＬ活性の最
高レベルを有したことを示す。
【０１７０】
著しいことに、免疫前にＦｌｔ３リガンドを投与され、そして場合によって、ｐＧＭ−
ＣＳＦまたはＣＤ４０−Ｌなどの補助分子を投与された群は、ＤＬＮから直接単離された
Ｔ細胞集団においてＣＴＬ活性が測定されるほど、すなわち抗原特異的ＣＴＬ活性を明ら
かにするのに、ｉｎ ｖｉｔｒｏ再刺激がまったく必要とされないほど増大した免疫応答
を有した（図５Ａおよび５Ｂを参照されたい）。より具体的には、以下のようにＣＴＬア
ッセイを行った。標準的
5 1
Ｃｒ放出アッセイにおいて、ＣＴＬ活性を測定した。完全ＲＰ
6
ＭＩ培地中、１ｘ１０ 細胞あたり５０μＣｉ 5 1
Ｃｒ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃ
20
ｉｅｎｃｅｓ、ニュージャージー州ピスカタウェイ）で、１μＭ ＯＴＩペプチド（ＳＩ
b
ＩＮＦＥＫＬ、Ｉｍｍｕｎｅｘ）を含み、または含まずに、Ｃ１４９８（Ｈ−２ ）標的
細胞を３７℃で１時間パルス処理した。標識した標的細胞を４回洗浄し、そして１ｘ１０
4
細胞をＤＬＮ細胞（エフェクター）の連続力価決定に添加した。エフェクター：標的比
は、１００：１∼０．７８：１の範囲であった。１０％熱不活性化ウシ胎児血清（Ｇｉｂ
ｃｏ Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）、１００μＭ ＭＥＭ
非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭ ＭＥＭピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、
５５μＭ ２−メルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、５０Ｕ／ｍｌペニシリン（Ｃａｌ
ｂｉｏｃｈｅｍ、カリフォルニア州サンディエゴ）、５０μｇ／ｍｌストレプトマイシン
（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、バージニア州ハーンダン）、および２ｍＭ Ｌ−グルタミン（Ｊ
30
ＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｎｅｎｃｅｓ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０（ＪＲＨ Ｂｉｏｓｃ
ｉｅｎｃｅｓ、カンザス州レネクサ）を含有する完全ＲＰＭＩ培地中で、アッセイを行っ
た。３７℃で６時間インキュベーションした後、２５μｌの細胞不含上清を取り除き、そ
してＰａｃｋａｒｄ ＬｕｍａＰｌａｔｅ（Ｐａｃｋａｒｄ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ、
コネティカット州メリデン）に移した。Ｐａｃｋａｒｄ ＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｈｅｗｌｅ
ｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ、カリフォルニア州パロアルト）上、ウェルあたり６０秒間、プレ
ートを読み取った。標的細胞に、それぞれ、アッセイ培地または０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、イリノイ州ロックフォ
ード）を添加することによって、自発的および最大クロム放出を決定した。特異的溶解パ
ーセントは、１００ｘ（実験放出ｃｐｍ−自発的放出ｃｐｍ）／（最大放出ｃｐｍ−自発
40
的放出ｃｐｍ）として計算した。
【０１７１】
これらの結果によって、Ｆｌｔ３リガンドで前処置され、そして続いてワクチン接種さ
れたマウスで生じる、抗原特異的ＣＤ８＋ ＣＴＬ免疫応答は、ウイルス感染に対する急
性応答で生じるものと同程度に強力であったことが立証される。総合すると、これらの結
果によって、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルは、抗原特異的エフェクター細胞応答の度
合いおよび期間両方を増加させることが立証される。
【０１７２】
（実施例９）
Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルにおけるＴヘルパー細胞の役割を決定するため、これ
50
(56)
JP 2005-528373 A 2005.9.22
らの研究を行った。本態様において、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドを、
連続１０日間、皮下投与した。ＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウス由来
のおよそ２００万の脾臓細胞およびリンパ節細胞をＬｙ５．１コンジェニックマウスに移
5
した（およそ４ｘ１０ ＣＤ４＋ Ｔ細胞およびＣＤ８＋ Ｔ細胞に相当する）。移植
のおよそ２４時間後、ＯＴ−Ｉ ２５μｇで、マウスを皮下（ｓ．ｃ．）免疫した。以下
により詳細に記載するように、いくつかの群には、Ｔヘルパー応答を促進するため、不完
全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）またはＰＢＳ中で乳化したＯＴ−ＩＩペプチド、あ
るいはキーホールリンペット・ヘモシアニン（ＫＬＨ）（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、カリフ
ォルニア州サンディエゴ）を投与した。
【０１７３】
10
この研究の処置群を、以下の表１２に提示する。第１群では、第１１日に、ＩＦＡ中に
配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫し、この群は陽性対照として働いた。
第２群では、第１１日に、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に配合したＯＴ−Ｉおよび
ＯＴ−ＩＩペプチドを投与した。第３群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇ
のＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−Ｉ
およびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第４群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１
０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯ
Ｔ−Ｉペプチド単独で免疫した。第５群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇ
のＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−Ｉ
ペプチドおよび２５μｇのＫＬＨで免疫した。第６群では、連続１０日間、襟首に１日あ
20
たり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＰＢＳ中に配合
したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。
【０１７４】
【表１２】
30
40
【０１７５】
先の研究におけるように、Ｆｌｔ３リガンド前処置およびＩＦＡ中に配合された抗原で
の免疫の組み合わせは、抗原特異的ＣＤ８＋ ＣＴＬ生成に劇的な効果を有した。代替ヘ
ルパータンパク質としてＫＬＨを含んだ場合、トランスジェニックＣＤ８＋細胞の割合に
驚くべき増加が誘発された（図６Ａ∼６Ｃ）。したがって、ＩＬ−２を産生するＴヘルパ
50
(57)
JP 2005-528373 A 2005.9.22
ー細胞数を増加させ、続いてＣＤ８＋ ＣＴＬ応答を増進させる、ＭＨＣ−ＩＩエピトー
プを有するタンパク質を、ワクチン配合物中のさらなる抗原として、Ｆｌｔ３リガンド免
疫プロトコルに含むことが可能である。図７Ａ∼７Ｃは、免疫前にＦｌｔ３リガンドを投
与された第３群が劇的に高いレベルのトランスジェニックＣＤ４＋ Ｔ細胞を有したこと
を示す。機能的研究によって、標準的増殖アッセイおよびＩＦＮγ産生（標準的ＥＬＩＳ
Ａ技術によって測定）によって測定されるように、抗原特異的で生物学的に機能するＴヘ
ルパー細胞が生成されることが示された。
【０１７６】
（実施例１０）
これらの実験は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルにおいて、多様なアジュバントを比
10
較した。試験したアジュバントには：ＩＦＡ（不完全フロイントアジュバント）、ＭＰＬ
T M
（３−Ｑ−デスアシル−４’−モノホスホリル脂質Ａ−Ｒｉｂｉ／Ｃｏｒｉｘａ Ｃｏ
ｒｐ．、ワシントン州シアトル）、ＣｐＧ １８２６および１９８２（細菌および／また
はウイルスを模倣する非メチル化ＣｐＧヌクレオチドを含有するオリゴヌクレオチド、Ｊ
． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０００ １６４：１６１７を参照されたい）、ミョウバン（水
酸化アルミニウム）およびＱｕｉｌ−Ａ（Ｑｕｉｌ−Ａサポニン −ソープバーク（Ｑｕ
ｉｌｌａｊａ ｓａｐｏｎａｒｉａ）の樹皮から抽出、これは免疫刺激複合体−ＩＳＣＯ
ＭＳの活性構成要素である）が含まれた。先と同様に、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌ
ｔ３リガンドを、連続１０日間、皮下投与した。ＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩトランスジェ
ニックマウス由来のおよそ２００万の脾臓細胞およびリンパ節細胞をＬｙ５．１コンジェ
20
5
ニックマウスに移した（およそ４ｘ１０ ＣＤ４＋ Ｔ細胞およびＣＤ８＋ Ｔ細胞に
相当する）。移植のおよそ２４時間後：ＰＢＳ、ＩＦＡ、ＭＰＬ
T M
、ＰＢＳ中のＣｐＧ１
８２６またはＰＢＳ中のＣｐＧ１９８２と配合した／混合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩ
ペプチド（各々２５μｇ）で、マウスを皮下（ｓ．ｃ．）免疫した。
【０１７７】
この研究の処置群を、表１３に提示する。第１群では、第１１日に、ＰＢＳ中に配合し
たＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第２群では、連続１０日間、襟首に１
日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＰＢＳ中に
配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第３群では、第１１日に、ＩＦ
Ａ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第４群では、連続１０日
30
間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に
、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第５群では、第１
１日に、ＭＰＬ
T M
中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第６群で
は、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そ
して第１１日に、ＭＰＬ
T M
中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。
第７群では、第１１日に、ＰＢＳ中のＣｐＧ（１８２６）と混合したＯＴ−ＩおよびＯＴ
−ＩＩペプチドで免疫した。第８群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦ
ｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＰＢＳ中のＣｐＧ（１８２６）と
混合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第９群では、第１１日に、ＰＢ
Ｓ中のＣｐＧ（１９８２）と混合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第
１０群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投
与し、そして第１１日に、ＰＢＳ中のＣｐＧ（１９８２）と混合したＯＴ−ＩおよびＯＴ
−ＩＩペプチドで免疫した。
【０１７８】
40
(58)
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【表１３】
10
20
30
【０１７９】
図８Ｂおよび８Ｅに示すように、Ｆｌｔ３リガンド前処置およびＩＦＡ中に配合した抗
原での免疫の組み合わせは、ＭＰＬ
T M
およびＣｐＧ配列と配合した／混合したＯＴ−Ｉ＆
ＩＩペプチドに比較して、非常に高い抗原特異的ＣＤ８＋ ＣＴＬ応答を生成した。先の
研究でのように、Ｆｌｔ３リガンド／ＩＦＡ群のＣＴＬは、流入領域リンパ節から直接単
離したＴ細胞集団において、抗原特異的細胞溶解活性を示した。さらに、この群は、より
高いレベルのトランスジェニックＣＤ４＋ Ｔ細胞を有した（図９Ｅ）。機能的研究によ
40
って、ＯＴ−ＩＩペプチドでパルス処理した標的の存在下で培養すると、これらのＣＤ４
＋ Ｔ細胞が抗原特異的増殖とともにＩＦＮガンマ産生（ＥＬＩＳＡによって測定）を示
すことが示された。さらに、Ｆｌｔ３リガンド前処置およびＣｐＧ（１８２６）／ＰＢＳ
と混合した抗原での免疫を受けた群は、Ｆｌｔ３リガンド前処置を受けなかった群より、
トランスジェニックＣＤ４＋ Ｔ細胞数に増加を示し、それとともに、弱いＯＴ−ＩＩペ
プチド誘導ＩＦＮγ産生を示した。このデータによって、Ｆｌｔ３リガンド前処置および
異なるアジュバントの組み合わせは、免疫系の異なるアームに優先的に影響を及ぼし、そ
してまた、一時的な方式で、免疫系に影響を及ぼしうることが示唆される。
【０１８０】
Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルにおいて、ＩＦＡ、ミョウバン、およびＱｕｉｌ−Ａ
50
(59)
JP 2005-528373 A 2005.9.22
を比較するため、同様の研究を行った。先と同様に、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ
３リガンドを、連続１０日間、皮下投与した。ＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩトランスジェニ
ックマウス由来のおよそ２００万の脾臓細胞およびリンパ節細胞をＬｙ５．１コンジェニ
5
ックマウスに移した（およそ４ｘ１０ ＣＤ４＋ Ｔ細胞およびＣＤ８＋ Ｔ細胞に相
当する）。移植のおよそ２４時間後：ＩＦＡ、ミョウバンまたはＱｕｉｌ−Ａいずれかと
配合した／混合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチド（各２５μｇ）で、マウスを皮下
（ｓ．ｃ．）免疫した。
【０１８１】
この研究の処置群を、表１４に提示する。第１群では、連続１０日間、襟首に１日あた
り１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＰＢＳ中に配合し
10
たＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第２群では、第１１日に、ＩＦＡ中に
配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第３群では、連続１０日間、襟
首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦ
Ａ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第４群では、第１１日に
、ミョウバン中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第５群では、
連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして
第１１日に、ミョウバン中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第
６群では、第１１日に、Ｑｕｉｌ−Ａ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで
免疫した。第７群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドを
ｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、Ｑｕｉｌ−Ａ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−Ｉ
20
Ｉペプチドで免疫した。
【０１８２】
【表１４】
30
40
【０１８３】
先の研究と一致して、Ｆｌｔ３リガンド前処置およびＩＦＡ中に配合された抗原での免
疫の組み合わせは、著しく増進した抗原特異的ＣＤ８＋ ＣＴＬ応答を生じた（図１０Ｂ
50
(60)
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および１０Ｅ）。Ｆｌｔ３リガンド／ＩＦＡ群由来のＣＴＬは、流入領域リンパ節から直
接単離されたＴ細胞集団において、抗原特異的細胞溶解活性を示した（図１２）。重要な
ことに、Ｆｌｔ３リガンド前処置を受けた群は、アジュバント、すなわちＩＦＡ、ミョウ
バンまたはＱｕｉｌ−Ａに関わりなく、第５日および第９日に、一貫してより高い免疫応
答を有した（それぞれ、図１０Ｂ、１０Ｅ、１０Ｃおよび１０Ｆ）。このデータによって
、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルが、多様なアジュバント中に配合された抗原に対する
免疫応答を増進させ、そしてＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルが、アジュバント／抗原単
独で免疫した場合よりも、免疫応答を増進させることが立証される。さらに、Ｆｌｔ３リ
ガンド前処置を受け、そしてミョウバンまたはＱｕｉｌ−Ａ中のＯＴ−Ｉ＆ＩＩペプチド
をワクチン接種されたマウスは、第９日に、より高い割合のＣＤ４＋トランスジェニック
10
Ｔ細胞を示し、これによって、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルが、より長い期間、増大
した免疫応答を維持することが示唆される（図１１Ｆ）。機能的研究によって、Ｆｌｔ３
リガンド前処置を受け、そしてＩＦＡ、ミョウバンまたはＱｕｉｌ−Ａ中のＯＴ−Ｉおよ
びＩＩペプチドをワクチン接種されたマウス由来のＣＤ４＋トランスジェニックＴ細胞が
、Ｆｌｔ３リガンド前処置を受けていないマウスより、増進したＩＦＮγ産生の抗原特異
的誘導を示し、そしてＦｌｔ３リガンド前処置を受け、そしてＩＦＡまたはミョウバン中
のＯＴ−ＩおよびＩＩペプチドをワクチン接種されたマウスが、Ｆｌｔ３リガンド前処置
を受けていないマウスより、増進した抗原特異的ＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖を示すことが示さ
れた（図１３）。これらのデータによって、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルが、標準的
ワクチン接種技術より、増大した抗原特異的免疫応答を生じることがさらに確認される。
20
【０１８４】
（実施例１１）
以下の研究を行って、免疫後の抗原特異的ＣＴＬの生成に対するＦｌｔ３−Ｌ前処置の
多様な日数の影響を決定した。６群のマウスを免疫して、ＣＴＬ（ＣＤ８＋）拡大を達成
するのに、１０日間のＦＬ処置が必要かどうかを決定した。
【０１８５】
ＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウス由来のおよそ２００万の脾臓細胞
5
およびリンパ節細胞をＬｙ５．１コンジェニックマウスに移した（およそ４ｘ１０ Ｃ
Ｄ４＋ Ｔ細胞およびＣＤ８＋ Ｔ細胞に相当する）。移植のおよそ２４時間後、不完全
フロイントアジュバント（ＩＦＡ−Ｄｉｆｃｏ／Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ニ
30
ュージャージー州フランクリンレークス）中で乳化したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチ
ド各２５μｇで、マウスを皮下（ｓ．ｃ．）免疫した。
【０１８６】
第１群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．
投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免
疫した。第２群では、連続８日間、襟首に＾１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ
．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチ
ドで免疫した。第３群では、連続６日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンド
をｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペ
プチドで免疫した。第４群では、連続４日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガ
ンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−Ｉ
Ｉペプチドで免疫した。第５群では、第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯ
Ｔ−ＩＩペプチドで免疫した。第６群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇの
Ｆｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡで免疫した。
【０１８７】
40
(61)
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【表１５】
10
【０１８８】
免疫後、第６日、各群（３匹のマウス）からＤＬＮを採取した。ＯＴＩ ＣＤ８ Ｔ細
胞数を定量化し、そしてＣＴＬアッセイで試験した。標準的
5 1
20
Ｃｒ放出アッセイにおいて
6
、ＣＴＬ活性を測定した。完全ＲＰＭＩ培地中、１ｘ１０ 細胞あたり５０μＣｉ 5 1
Ｃ
ｒ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ニュージャージー州ピスカタウェイ）
で、１μＭ ＯＴＩペプチド（ＳＩＩＮＦＥＫＬ、Ｉｍｍｕｎｅｘ）を含み、または含ま
b
ずに、Ｃ１４９８（Ｈ−２ ）標的細胞を３７℃で１時間パルス処理した。標識した標的
4
細胞を４回洗浄し、そして１ｘ１０ 細胞をＤＬＮ細胞（エフェクター）の連続力価決定
に添加した。エフェクター：標的比は、１００：１∼０．７８：１の範囲であった。１０
％熱不活性化ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カー
ルスバッド）、１００μＭ ＭＥＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭ ＭＥＭピル
ビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５５μＭ ２−メルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）
30
、５０Ｕ／ｍｌペニシリン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、カリフォルニア州サンディエゴ）、
５０μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、バージニア州ハーンダン）、
および２ｍＭ Ｌ−グルタミン（ＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｎｅｎｃｅｓ）を補充したＲＰＭ
Ｉ−１６４０（ＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カンザス州レネクサ）を含有する完全
ＲＰＭＩ培地中で、アッセイを行った。３７℃で６時間インキュベーションした後、２５
μｌの細胞不含上清を取り除き、そしてＰａｃｋａｒｄ ＬｕｍａＰｌａｔｅ（Ｐａｃｋ
ａｒｄ ＢｉｏＳｉｅｎｃｅｓ、コネティカット州メリデン）に移した。Ｐａｃｋａｒｄ
ＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ、カリフォルニア州パロアルト）
上、ウェルあたり６０秒間、プレートを読み取った。標的細胞に、それぞれ、アッセイ培
地または０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍ
40
ｐａｎｙ、イリノイ州ロックフォード）を添加することによって、自発的および最大クロ
ム放出を決定した。特異的溶解パーセントは、１００ｘ（実験放出ｃｐｍ−自発的放出ｃ
ｐｍ）／（最大放出ｃｐｍ−自発的放出ｃｐｍ）として計算した。
【０１８９】
図１４Ａおよび１４Ｂに示すように、ＯＴＩ ＣＤ８細胞拡大は、第１群で最も認めら
れたが、第２∼４群でも拡大が認められ、そしてより低い度合いで第５群でも認められた
。第１∼５群で、ｅｘ ｖｉｖｏ ＣＴＬ活性が認められた。これらの結果によって、Ｆ
ｌｔ３リガンドでの１０日間の前処置が、免疫後のＯＴＩ ＣＤ８細胞拡大を誘導するに
は、最も有効であったが、８日間、６日間、および４日間の前処置もまた、対照群に比較
して有効であったことが示される。したがって、本明細書記載のＦｌｔ３リガンド免疫プ
50
(62)
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ロトコルにおいて、Ｆｌｔ３リガンドをある範囲の日数に渡って（１、２、３、４、５、
６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０
、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０日またはそれより多く
、それとともに、限定されるわけではないが、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと
、６日ごと、７日ごと、またはそれより長い間隔など、何日かごとの組み合わせいずれか
）投与可能である。
【０１９０】
（実施例１２）
これらの研究は、免疫優性ペプチドでの免疫に比較した際、抗原特異的ＣＴＬ拡大が、
全オボアルブミンタンパク質での免疫後に起こることを示す。実施例８および９に記載す
10
るように、ＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウス由来のおよそ２００万の
脾臓細胞およびリンパ節細胞をＬｙ５．１コンジェニックマウスに移した（およそ４ｘ１
5
０ ＣＤ４＋ Ｔ細胞およびＣＤ８＋ Ｔ細胞に相当する）。移植のおよそ２４時間後
、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ−Ｄｉｆｃｏ／Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓ
ｏｎ、ニュージャージー州フランクリンレークス）中で乳化したＯＴ−ＩおよびＯＴ−Ｉ
Ｉペプチド各２５μｇで、マウスを皮下（ｓ．ｃ．）免疫した。６群のマウスを以下に記
載するように免疫した。免疫後、第２日、第６日、第９日、３匹のマウスを屠殺した。Ｄ
ＬＮを採取し、そしてｅｘ ｖｉｖｏ ＣＴＬアッセイにおいて、ＯＴＩ ＣＤ８細胞を
定量化し、そして試験した（実施例１１に上述）。
【０１９１】
20
【表１６】
30
【０１９２】
第６日の採取時、ＩＦＡ中のペプチドで免疫したマウスで、ＯＴＩ ＣＤ８＋ ＣＴＬ
40
細胞拡大が起こり、そしてＦＬ処置後、ＩＦＡ中の１００μｇ ＯＶＡタンパク質で免疫
したマウスでも起こった。図１５Ａおよび１５Ｂに示すように、これらの実験は、Ｆｌｔ
３−Ｌ前処置後、ＩＦＡアジュバント中の抗原で免疫することが、ペプチド抗原およびタ
ンパク質抗原両方に使用するのに有効であることを立証する。とりわけ、免疫に用いたＯ
ＶＡタンパク質を解析し、そして遊離ペプチドをまったく含有しないことが示された。し
たがって、本明細書記載のＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルを、上述のように、広い範囲
の抗原とともに使用することが可能である。
【０１９３】
（実施例１３）
以下の研究によって、免疫後のインターロイキン１５での処置が、抗原特異的エフェク
50
(63)
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ターＣＴＬ拡大を増大することが立証される。
【０１９４】
上述のように、マウスを免疫前に１０日間、ＦＬで処置し（例えば実施例８および９を
参照されたい）、簡潔には、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガン
ドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡで免疫した。第１０日、ＯＴ−Ｉおよび
ＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウス由来のおよそ２００万の脾臓細胞およびリンパ節細
5
胞をＬｙ５．１コンジェニックマウスに移した（およそ４ｘ１０ ＣＤ４＋ Ｔ細胞お
よびＣＤ８＋ Ｔ細胞に相当する）。移植のおよそ２４時間後、不完全フロイントアジュ
バント（ＩＦＡ−Ｄｉｆｃｏ／Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ニュージャージー州
フランクリンレークス）中で乳化したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチド各２５μｇで、
10
マウスを皮下（ｓ．ｃ．）免疫した。第１１日に、動物を、生理食塩水またはＩＦＡいず
れかの中に配合したペプチドで免疫した。ＩＬ−１５またはマウス血清アルブミン（ＭＳ
Ａ）対照には、第３日、第４日、第５日、および第６日（免疫の日を第０日として数える
）、１０μｇ／注射でｉ．ｐ．搬送した。
【０１９５】
【表１７】
20
30
【０１９６】
第１群では、免疫後、第２日、第５日、および第９日に採取した以外は、第５日および
第９日に、３匹のマウス／群から流入領域リンパ節を採取した。ＯＴＩ ＣＤ８細胞を定
量化し、そしてｅｘ ｖｉｖｏ ＣＴＬアッセイでＣＴＬ活性をアッセイした。
【０１９７】
標準的
6
5 1
Ｃｒ放出アッセイにおいて、ＣＴＬ活性を測定した。完全ＲＰＭＩ培地中、１
ｘ１０ 細胞あたり５０μＣｉ 5 1
Ｃｒ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、
40
ニュージャージー州ピスカタウェイ）で、１μＭ ＯＴＩペプチド（ＳＩＩＮＦＥＫＬ、
b
Ｉｍｍｕｎｅｘ）を含み、または含まずに、Ｃ１４９８（Ｈ−２ ）標的細胞を３７℃で
4
１時間パルス処理した。標識した標的細胞を４回洗浄し、そして１ｘ１０ 細胞をＤＬＮ
細胞（エフェクター）の連続力価決定に添加した。エフェクター：標的比は、１００：１
∼０．７８：１の範囲であった。１０％熱不活性化ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ Ｉｎｖｉ
ｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）、１００μＭ ＭＥＭ非必須アミノ酸
（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭ ＭＥＭピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５５μＭ ２−
メルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、５０Ｕ／ｍｌペニシリン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ
、カリフォルニア州サンディエゴ）、５０μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ｍｅｄｉａｔ
ｅｃｈ、バージニア州ハーンダン）、および２ｍＭ Ｌ−グルタミン（ＪＲＨ Ｂｉｏｓ
50
(64)
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ｃｉｎｅｎｃｅｓ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０（ＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、
カンザス州レネクサ）を含有する完全ＲＰＭＩ培地中で、アッセイを行った。３７℃で６
時間インキュベーションした後、２５μｌの細胞不含上清を取り除き、そしてＰａｃｋａ
ｒｄ ＬｕｍａＰｌａｔｅ（Ｐａｃｋａｒｄ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ、コネティカット
州メリデン）に移した。Ｐａｃｋａｒｄ ＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋ
ａｒｄ、カリフォルニア州パロアルト）上、ウェルあたり６０秒間、プレートを読み取っ
た。標的細胞に、それぞれ、アッセイ培地または０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（Ｐ
ｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、イリノイ州ロックフォード）を添加す
ることによって、自発的および最大クロム放出を決定した。特異的溶解パーセントは、１
００ｘ（実験放出ｃｐｍ−自発的放出ｃｐｍ）／（最大放出ｃｐｍ−自発的放出ｃｐｍ）
10
として計算した。
【０１９８】
図１６Ａおよび１６Ｂに示すように、これらの結果によって、マウスをＦｌｔ３リガン
ドで前処置し、そして生理食塩水中のペプチドで免疫すると、免疫後に投与したＩＬ−１
５が、ＯＴＩ ＣＤ８拡大および機能を増大させることが立証された（第３群および第６
群を比較されたい）。ＩＦＡ中に配合されたペプチドで免疫した後にＩＬ−１５を投与す
ると（Ｆｌｔ３リガンド処置なし）、より小さい効果が見られ、すなわち第４群および第
７群を比較されたい。したがって、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルにおいて、補助分子
を投与する有用性および有効性が立証された。
【０１９９】
20
（実施例１４）
以下の研究によって、免疫後、抗４−１ＢＢアゴニスト性抗体またはＩＬ−１５を投与
すると、メモリーＣＤ８＋抗原特異的Ｔ細胞のプール生成が増大することが立証される。
【０２００】
上述のように、マウスを免疫前に１０日間、ＦＬで処置し（例えば実施例８および９を
参照されたい）、簡潔には、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガン
ドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡで免疫した。第１０日に、ＯＴ−Ｉおよ
びＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウス由来のおよそ２００万の脾臓細胞およびリンパ節
5
細胞をＬｙ５．１コンジェニックマウスに移した（およそ４ｘ１０ ＣＤ４＋ Ｔ細胞
およびＣＤ８＋ Ｔ細胞に相当する）。移植のおよそ２４時間後、不完全フロイントアジ
30
ュバント（ＩＦＡ−Ｄｉｆｃｏ／Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ニュージャージー
州フランクリンレークス）中で乳化したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチド各２５μｇで
、マウスを皮下（ｓ．ｃ．）免疫した。すべての動物を、生理食塩水（第１∼３群）また
はＩＦＡ（第４∼９群）中のＯＴＩおよびＯＴＩＩペプチドで免疫した。
【０２０１】
各アジュバント群内で、１つの群では、免疫後、第３日および第６日、ラットＩｇＧま
たはアゴニスト性抗４−１ＢＢ抗体（１００μｇ／ｉ．ｐ．注射）を投与し、そして第三
の群では、第３日∼第６日、１０μｇ／ｉ．ｐ．注射で、組換えヒトＩＬ−１５（商業的
に入手可能、例えばＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネソタ州ミネアポリス）を投与した。
【０２０２】
40
(65)
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【表１８】
10
20
【０２０３】
免疫後、第９週、第１７週に３匹のマウスから、そして第１８週に２匹のマウスから、
脾臓を採取した。先の実施例に記載するように、フローサイトメトリーによって、個々の
脾臓から、ＯＴＩ ＣＤ８＋ Ｔ細胞を定量化した。図１７Ａおよび１７Ｂに示すように
、免疫直後にＩＬ−１５または抗４−１ＢＢで処置すると、メモリーＴ細胞プールのサイ
ズが増大する。この効果は、Ｆｌｔ３リガンドに加えて、生理食塩水中に配合したペプチ
ドで免疫した後（第１∼３群）、またはＦｌｔ３リガンドに加えて、ＩＦＡ中に配合した
ペプチドで免疫した後（第７∼９群）に認められたが、Ｆｌｔ３リガンドの非存在下で免
疫した後（第４∼６群）には認められなかった。
30
【０２０４】
（実施例１５）
Ｆｌｔ３−Ｌをアレルギーの治療に使用可能である。本明細書全体で記載するＦｌｔ３
−Ｌ免疫プロトコルは、アレルギーのアレルゲン特異的免疫療法に直接の有用性を有する
。アレルゲン特異的免疫療法は、原因アレルゲンへの続く曝露に関連する症状を改善する
のに有効な用量に到達するため、１以上のアレルギーを有する被験者に、増加する用量で
アレルゲンワクチンを投与することと定義される。アレルギーの免疫療法には、Ｆｌｔ３
−Ｌ免疫プロトコルおよびアレルギーのアレルゲン特異的免疫療法および／またはＦｌｔ
３−Ｌの投与を含むように修飾された脱感作療法が含まれる。
【０２０５】
40
アレルゲン学的診断の技術分野に使用される適切なｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔ
ｒｏ技術いずれかを用いて、被験者を診断することが可能であり、これらには、限定され
るわけではないが、皮内連続終点試験（ＳＥＴ）、放射性アレルゲン吸着アッセイ（ＲＡ
ＳＴ）、ＲＡＳＴスポット試験、ヒスタミン放射性酵素アッセイ、ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｉ
ｇＥおよびＩｇＧアッセイ、自発的合成アッセイとともに当該技術分野に知られる他のア
ッセイが含まれる。
【０２０６】
アレルギーワクチンは当該技術分野に周知であり、そして一般的に、少なくとも１つの
アレルゲン、および適切なキャリアー、希釈剤、賦形剤、安定化剤および場合によるアジ
ュバントいずれかを含んでなると定義することが可能である。アレルゲンは、本明細書に
50
(66)
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おいて、当該技術分野に認識されるアレルゲンいずれか；修飾アレルゲン（限定されるわ
けではないが、尿素、ＰＥＧ／ＰＶＡ、脱グリコシル化、多糖および／または光酸化など
の方法によって修飾）；アレルゴイド（限定されるわけではないが、チロシン吸収を含む
、または含まない、グルタルアルデヒドおよび／またはホルムアルデヒド処理などの方法
によって修飾）；一価同種異系抽出物；アレルゲンポリマー；コンジュゲート化アレルゲ
ン；アレルゲンのアレルゲン−ムラミルペプチド；アレルゲン・マイコロイルムラミルペ
プチドコンジュゲート；アレルゲン−プルラン化合物；アレルゲンおよびハプテン（単数
または複数）のコンジュゲート；アレルゲン、ハプテン（単数または複数）および親水性
ポリマーのコンジュゲート；尿素変性（ｄｅｎａｔｕｒｏｄ）抗原；組換えアレルゲン；
突然変異誘発した組換えアレルゲン；低刺激性アレルゲンおよび／または低刺激性アレル
10
ゲン性誘導体などの遺伝子操作アレルゲン（例えばＩｇＥ結合エピトープが減少している
が、Ｔ細胞エピトープおよび遮断抗体として働くことが可能なＩｇＧ抗体を誘導するため
のエピトープを保持する分子）と定義される。
【０２０７】
アレルギーワクチンおよびＦｌｔ３−Ｌを、本明細書に記載する有効な方式および経路
いずれかで投与することが可能である。アレルゲンワクチンおよびＦｌｔ３−Ｌの投薬お
よび投与は、適任である医師によって決定可能である。
【０２０８】
Ｆｌｔ３−Ｌ免疫プロトコルは、治療可能なアレルギーいずれかに対するアレルギー免
疫療法で使用可能であり、これらには、限定されるわけではないが：昆虫アレルギーおよ
20
び昆虫咬傷および／または刺傷（チリダニ、アリ、クモ、ハエ、ハチ、スズメバチ、蚊、
ブヨ等）；動物アレルギー（限定されるわけではないが：イヌ、ネコ、鳥、げっ歯類、ウ
シ、ヒツジ、ウマ、ブタ、ヤギ等の家畜および野生動物の毛皮、ふけ、排出物等）；アレ
ルギー性気管支炎、バルサムアレルギー；カンジダ菌アレルギー；カーペットおよび／ま
たは織物アレルギー；食物アレルギーまたは敏感性；金属アレルギー；松脂アレルギー；
殺菌剤アレルギー；肥料アレルギー；ホルムアルデヒドアレルギー；ガスアレルギー；接
着剤アレルギー；同種異系血清アレルギー；宝飾品アレルギー；メルカプトアレルギー；
カビおよび／またはうどん粉菌アレルギー；ペンキアレルギー；紙アレルギー；パラベン
類アレルギー；香水アレルギー；殺虫剤アレルギー；プラスチックアレルギー；シャンプ
ーアレルギー；石鹸アレルギー；チウラムアレルギー；タバコアレルギー；コムギアレル
30
ギー；酵母アレルギー；アレルギー性皮膚炎；アレルギー性鼻炎；アスピリン感受性；喘
息；アトピー性皮膚炎；接触皮膚炎；化粧品アレルギー；牛乳アレルギー；皮膚炎；ほこ
りアレルギー；花粉アレルギー；湿疹；草アレルギー；サリチル酸感受性等が含まれる。
【０２０９】
上に詳細に記載するように、Ｆｌｔ３−Ｌは、アレルギーワクチンおよび場合による補
助分子の投与前に、投与と同時に、そして／または投与に続いて、投与可能である。１つ
の態様において、Ｆｌｔ３−Ｌは、ワクチン接種前に、ワクチン接種と同時に、そして／
またはワクチン接種に続いて、連続１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、
９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１
９日、または２０日間、被験者に一日一度、毎日または２日ごと、３日ごと、４日ごと、
40
５日ごと、６日ごとまたは７日ごとに投与される。もちろん、上述のＦｌｔ３−Ｌ免疫プ
ロトコルのすべての態様は、アレルギーの治療に適応可能である。さらに、当該技術分野
に知られる現存のアレルギー免疫措置を修飾して、Ｆｌｔ３−Ｌの投与を含むようにする
ことが可能である。
【０２１０】
１つの態様において、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルは、１以上のアレルギーを有す
る被験者において、アレルギーを治療する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）アレルギーワクチンを被験者に投与する
50
(67)
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工程を含んでなり、ここでＦｌｔ３リガンドは、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同
時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与し、そしてここで補助分子は、ワクチン
投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与し、そし
てここで補助分子は、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５
、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルフ
ァおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦフ
ァミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合
タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、
ＣｐＧ配列、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、前記方法に関する。
【０２１１】
10
上述のように、Ｆｌｔ３−Ｌは、造血幹細胞および前駆細胞とともに、多様な種類の免
疫細胞、特に樹状細胞を拡大させる。さらに、Ｆｌｔ３−Ｌは、Ｔｈ１型樹状細胞を拡大
させる能力を有する。したがって、アレルギー免疫療法におけるＦｌｔ３−Ｌ免疫プロト
コルは、典型的なＴｈ２応答からＴｈ１型応答に、被験者の免疫応答を駆動することが可
能である。サイトカインプロフィールおよび免疫応答におけるこのシフトは、ＩｇＥ産生
よりＩｇＧ産生を駆動し、ＩＬ−４の循環レベルを減少させ、好酸球の補充および活性化
を減少させるとともに、肥満細胞の増殖を減少させる。その結果、続くアレルゲン曝露は
アレルギー反応を引き起こさない。
【０２１２】
当該技術分野に知られる標準法および技術、例えば限定されるわけではないが、患者由
20
来のアレルゲン特異的ＩｇＧおよびＩｇＥ抗体の測定によって、Ｆｌｔ３−Ｌ免疫プロト
コルを用いたアレルゲン特異的免疫療法の有効性を評価することが可能である。Ｆｌｔ３
−Ｌ免疫プロトコルにおけるアレルゲン特異的免疫療法を受けている患者はまた、限定さ
れるわけではないが、抗ヒスタミン剤、充血除去剤、ステロイド、鎮痛剤、咳止め等の１
以上の慣用療法と組み合わせて治療可能である。
【０２１３】
本明細書に引用するすべての刊行物および特許出願は、個々の刊行物または特許出願が
、具体的に、そして個々に、本明細書に援用されると示されるかのように、本明細書に援
用される。前述の本発明は、例示のためある程度詳細に記載し、そして理解を明確にする
目的で、例を記載しているが、一般の当業者には、本発明の解説に鑑み、付随する請求項
30
の精神または範囲から逸脱することなく、特定の変化および修飾を実行可能であることが
容易に明らかであろう。
【０２１４】
【表１９】
40
【図面の簡単な説明】
【０２１５】
【図１】図１Ａ∼Ｅは、Ｆｌｔ３リガンド、ＰＥＧ化ＧＭ−ＣＳＦおよびＣＤ４０Ｌが、
ワクチンに対する免疫応答を増進するかどうかに取り組む、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロト
コルの免疫後第１日に採取した流入領域リンパ節から単離した試料のＦＡＣＳ（蛍光活性
化細胞分取）解析および細胞計数から得たデータを示す（実施例８を参照されたい）。図
50
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１Ａ：流入領域リンパ節から単離した細胞の総数；図１Ｂ：ＯＴ−ＩＩトランスジェニッ
クＣＤ４＋ Ｔ細胞のパーセント；図１Ｃ：ＯＴ−ＩＩトランスジェニックＣＤ４＋ Ｔ
細胞の絶対数；図１Ｄ：ＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセント；お
よび図１Ｅ：ＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋ Ｔ細胞の絶対数。
【図２】図２Ａ∼Ｅは、Ｆｌｔ３リガンド、ＰＥＧ化ＧＭ−ＣＳＦおよびＣＤ４０Ｌが、
ワクチンに対する免疫応答を増進するかどうかに取り組む、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロト
コルの免疫後第５日に採取した流入領域リンパ節から単離した試料のＦＡＣＳ解析および
細胞計数から得たデータを示す（実施例８を参照されたい）。図２Ａ：流入領域リンパ節
から単離した細胞の総数；図２Ｂ：ＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋ Ｔ細胞のパー
セント；図２Ｃ：ＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋ Ｔ細胞の絶対数；図２Ｄ：宿主
10
動物由来のＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセント；および図２Ｅ：宿主動物由来のＣＤ８＋ Ｔ
細胞の絶対数。
【図３】図３Ａ∼Ｅは、Ｆｌｔ３リガンド、ＰＥＧ化ＧＭ−ＣＳＦおよびＣＤ４０Ｌが、
ワクチンに対する免疫応答を増進するかどうかに取り組む、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロト
コルの免疫後第９日に採取した流入領域リンパ節から単離した試料のＦＡＣＳ解析および
細胞計数から得たデータを示す（実施例８を参照されたい）。図３Ａ：流入領域リンパ節
から単離した細胞の総数；図３Ｂ：ＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋ Ｔ細胞のパー
セント；図３Ｃ：ＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋ Ｔ細胞の絶対数；図３Ｄ：宿主
動物由来のＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセント；および図３Ｅ：宿主動物由来のＣＤ８＋ Ｔ
細胞の絶対数。
20
【図４】図４Ａ∼Ｂは、実施例８に記載するＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルからの、免
疫後第１日（図４Ａ）および第５日（図４Ｂ）に単離した、ＯＴ−Ｉトランスジェニック
ＣＤ８＋ Ｔ細胞の標準的ＣＴＬアッセイを示す。トランスジェニックＣＤ８＋ Ｔ細胞
をＣＴＬアッセイに含める前に、ＯＴ−Ｉペプチドでパルス処理した標的と培養すること
によって、この細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで再刺激した。
【図５】図５Ａ∼Ｂは、実施例８に記載するＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルからの、免
疫後第５日（図５Ａ）および第９日（図５Ｂ）に単離した、ＯＴ−Ｉトランスジェニック
ＣＤ８＋ Ｔ細胞の“ｅｘ ｖｉｖｏ”ＣＴＬアッセイを示す。トランスジェニックＣＤ
８＋ Ｔ細胞を、ｉｎ ｖｉｔｒｏ拡大なしに、直接、ＣＴＬアッセイに用いた。
【図６】図６Ａ∼Ｃは、実施例９に記載するＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルの免疫後第
30
５日に採取した流入領域リンパ節から単離した試料のＦＡＣＳ解析および細胞計数から得
たデータを示す。図６Ａ：流入領域リンパ節から単離した細胞の絶対数；図６Ｂ：ＯＴ−
ＩトランスジェニックＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセント；および図６Ｃ：ＯＴ−Ｉトランス
ジェニックＣＤ８＋ Ｔ細胞の絶対数。
【図７】図７Ａ∼Ｃは、実施例９に記載するＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルの免疫後第
５日に採取した流入領域リンパ節から単離した試料のＦＡＣＳ解析および細胞計数から得
たデータを示す。図７Ａ：流入領域リンパ節から単離した細胞の絶対数；図７Ｂ：ＯＴ−
ＩＩトランスジェニックＣＤ４＋ Ｔ細胞のパーセント；および図６Ｃ：ＯＴ−ＩＩトラ
ンスジェニックＣＤ４＋ Ｔ細胞の絶対数。
【図８】図８Ａ∼Ｆは、多様なアジュバント、およびワクチンに対する免疫応答を比較す
40
る、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの免疫後第１日、第５日、または第９日に採取した
流入領域リンパ節から単離した試料のＦＡＣＳ解析および細胞計数から得たデータを示す
（実施例１０を参照されたい）。図８Ａ：免疫後第１日のＯＴ−ＩトランスジェニックＣ
Ｄ８＋ Ｔ細胞のパーセント；図８Ｂ：免疫後第５日のＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ
８＋ Ｔ細胞のパーセント；図８Ｃ：免疫後第９日のＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８
＋ Ｔ細胞のパーセント；図８Ｄ：免疫後第１日のＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋
Ｔ細胞の絶対数；図８Ｅ：免疫後第５日のＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋ Ｔ細
胞の絶対数；および図８Ｆ：免疫後第９日のＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋ Ｔ細
胞の絶対数。
【図９】図９Ａ∼Ｆは、多様なアジュバント、およびワクチンに対する免疫応答を比較す
50
(69)
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る、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの免疫後第１日、第５日、または第９日に採取した
流入領域リンパ節から単離した試料のＦＡＣＳ解析および細胞計数から得たデータを示す
（実施例１０を参照されたい）。図９Ａ：免疫後第１日の流入領域リンパ節から単離した
細胞の絶対数；図９Ｂ：免疫後第５日の流入領域リンパ節から単離した細胞の絶対数；図
９Ｃ：免疫後第９日の流入領域リンパ節から単離した細胞の絶対数；図９Ｄ：免疫後第１
日のＯＴ−ＩＩトランスジェニックＣＤ４＋ Ｔ細胞の絶対数；図９Ｅ：免疫後第５日の
ＯＴ−ＩＩトランスジェニックＣＤ４＋ Ｔ細胞の絶対数；および図９Ｆ：免疫後第９日
のＯＴ−ＩＩトランスジェニックＣＤ４＋ Ｔ細胞の絶対数。
【図１０】図１０Ａ∼Ｆは、多様なアジュバント、およびワクチンに対する免疫応答をさ
らに比較する、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの免疫後第１日、第５日、または第９日
10
に採取した流入領域リンパ節から単離した試料のＦＡＣＳ解析および細胞計数から得たデ
ータを示す（実施例１０を参照されたい）。図１０Ａ：免疫後第１日のＯＴ−Ｉトランス
ジェニックＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセント；図１０Ｂ：免疫後第５日のＯＴ−Ｉトランス
ジェニックＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセント；図１０Ｃ：免疫後第９日のＯＴ−Ｉトランス
ジェニックＣＤ８＋ Ｔ細胞のパーセント；図１０Ｄ：免疫後第１日のＯＴ−Ｉトランス
ジェニックＣＤ８＋ Ｔ細胞の絶対数；図１０Ｅ：免疫後第５日のＯＴ−Ｉトランスジェ
ニックＣＤ８＋ Ｔ細胞の絶対数；および図１０Ｆ：免疫後第９日のＯＴ−Ｉトランスジ
ェニックＣＤ８＋ Ｔ細胞の絶対数。
【図１１】図１１Ａ∼Ｆは、多様なアジュバント、およびワクチンに対する免疫応答をさ
らに比較する、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの免疫後第１日、第５日、または第９日
20
に採取した流入領域リンパ節から単離した試料のＦＡＣＳ解析および細胞計数から得たデ
ータを示す（実施例１０を参照されたい）。図１１Ａ：免疫後第１日の流入領域リンパ節
から単離した細胞の絶対数；図１１Ｂ：免疫後第５日の流入領域リンパ節から単離した細
胞の絶対数；図１１Ｃ：免疫後第９日の流入領域リンパ節から単離した細胞の絶対数；図
１１Ｄ：免疫後第１日のＯＴ−ＩＩトランスジェニックＣＤ４＋ Ｔ細胞の絶対数；図１
１Ｅ：免疫後第５日のＯＴ−ＩＩトランスジェニックＣＤ４＋ Ｔ細胞の絶対数；および
図１１Ｆ：免疫後第９日のＯＴ−ＩＩトランスジェニックＣＤ４＋ Ｔ細胞の絶対数。
【図１２】図１２は、実施例１０に記載するＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルからの、免
疫後第５日に単離した、ＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋ Ｔ細胞の“ｅｘ ｖｉｖ
ｏ”ＣＴＬアッセイを示す。流入領域リンパ節から単離したトランスジェニックＣＤ８＋
30
Ｔ細胞を、ｉｎ ｖｉｔｒｏ拡大なしに、直接、ＣＴＬアッセイに用いた。
【図１３】図１３は、実施例１０に記載するＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルからの、免
疫後第５日に単離した、ＯＴ−ＩＩトランスジェニックＣＤ４＋ Ｔ細胞の標準的Ｔ細胞
増殖アッセイを示す。
【図１４】図１４Ａおよび１４Ｂは、ＦＬでの１０日間の前処置が、免疫後、ＯＴＩ Ｃ
Ｄ８＋ Ｔ細胞の拡大を誘導するのに有効であったが、８日間、６日間、および４日間の
前処置もまた、対照群に比較して有効であったことを示す。
【図１５】図１５Ａおよび１５Ｂは、Ｆｌｔ３−Ｌ前処置後のＩＦＡアジュバント中の抗
原での免疫が、ペプチド抗原およびタンパク質抗原両方で使用するのに有効であることを
例示する。
40
【図１６】図１６Ａおよび１６Ｂは、マウスをＦｌｔ３リガンドで前処置し、そして生理
食塩水中のペプチドで免疫した際、ＩＬ−１５を免疫後に投与すると、ＯＴＩ ＣＤ８＋
ＣＴＬ拡大および機能が増大したことを示す。
【図１７】図１７Ａおよび１７Ｂは、免疫直後にＩＬ−１５または抗４−１ＢＢで処置す
ると、メモリーＴ細胞プールのサイズが増大することを例示する。この効果は、Ｆｌｔ３
リガンドに加えて、生理食塩水中に配合したペプチドで免疫した後（第１∼３群）、また
はＦｌｔ３リガンドに加えて、ＩＦＡ中に配合したペプチドで免疫した後（第７∼９群）
には認められたが、Ｆｌｔ３リガンドの非存在下で免疫した後（第４∼６群）には認めら
れなかった。
【配列表】
50
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10
20
30
40
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20
30
40
(73)
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
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(74)
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
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(75)
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
JP 2005-528373 A 2005.9.22
(76)
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
JP 2005-528373 A 2005.9.22
(77)
JP 2005-528373 A 2005.9.22
【図１７】
【手続補正書】
【 提 出 日 】 平 成 16年 12月 21日 (2004.12.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者を免疫するための医薬組成物であって：
（ａ）Ｆｌｔ３リガンド；
（ｂ）場合により、補助分子；および
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチン；
を組み合わせてなる、前記医薬組成物。
【請求項２】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワ
クチン投与に続いて投与する、請求項１の医薬組成物。
【請求項３】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投
与に続いて投与する、請求項１の医薬組成物。
【請求項４】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８
および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよ
びガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリ
ーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパ
(78)
JP 2005-528373 A 2005.9.22
ク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ
配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１の医薬組成物。
【請求項５】
アジュバントが、ＡＤＪＵＭＥＲ
T M
（ポリホスファゼン）；リン酸アルミニウムゲル；
藻類グルカン類；アルガミュリン（ａｌｇａｍｍｕｌｉｎ）；水酸化アルミニウムゲル（
ミョウバン）；高タンパク質吸着性（ａｄｓｏｒｂｅｎｃｙ）水酸化アルミニウムゲル；
低粘性水酸化アルミニウムゲル；ＡＦまたはＳＰＴ（スクアレン（５％）、Ｔｗｅｅｎ８
０（０．２％）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ１２１（１．２５％）、リン酸緩衝生理食塩水ｐ
Ｈ７．４のエマルジョン）；ＡＶＲＩＤＩＮＥ
０５
T M
T M
（プロパンジアミン）；ＢＡＹ Ｒ１０
（（Ｎ−（２−デオキシ−２−Ｌ−ロイシルアミノ−ｂ−Ｄ−グルコピラノシル）
−Ｎ−オクタデシルドデカノイルアミド・ヒドロアセテート）；ＣＡＬＣＩＴＲＩＯＬ
（１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３）；リン酸カルシウムゲル；ＣＡＰ
T M
T M
（リン酸
カルシウムナノ粒子）；コレラ・ホロトキシン、コレラ毒素Ａ１−プロテインＡ−Ｄ断片
融合タンパク質、コレラ毒素Ｂサブユニット；ＣＲＬ１００５（ブロック・コポリマーＰ
１２０５）；サイトカイン含有リポソーム；ＤＤＡ（ジメチルジオクタデシルアンモニウ
ムブロミド）；ＤＨＥＡ（デヒドロエピアンドロステロン）；ＤＭＰＣ（ジミリストイル
・ホスファチジルコリン）；ＤＭＰＧ（ジミリストイル・ホスファチジルグリセロール）
；ＤＯＣ／ミョウバン複合体（デオキシコール酸ナトリウム塩）；フロイントの完全アジ
ュバント；フロイントの不完全アジュバント；ガンマ・イヌリン；Ｇｅｒｂｕアジュバン
ト（以下の混合物：ｉ）Ｎ−アセチルグルコサミニル−（Ｐｌ−４）−Ｎ−アセチルムラ
ミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−グルタミン（ＧＭＤＰ）、ｉｉ）ジメチルジオクタデシルアン
モニウムクロリド（ＤＤＡ）、ｉｉｉ）亜鉛Ｌ−プロリン塩複合体（ＺｎＰｒｏ−８））
；ＧＭ−ＣＳＦ；ＧＭＤＰ（Ｎ−アセチルグルコサミニル−（ｂ１−４）−Ｎ−アセチル
ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン）；Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ（１−（２−メチ
プロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）；ＩｍｍＴｈｅｒ
T M
（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−イソＧｌｕ−
Ｌ−Ａｌａ−グリセロールジパルミテート）；ＤＲＶ類（脱水−再水和小胞から調製した
免疫リポソーム）；インターフェロン−γ；インターロイキン−１β；インターロイキン
−２；インターロイキン−７；インターロイキン−１２；ＩＳＣＯＭＳ
体）；ＩＳＣＯＰＲＥＰ ７．０．３．
T M
T M
（免疫刺激複合
；リポソーム；ＬＯＸＯＲＩＢＩＮＥ
アリル−８−オキソグアノシン）；ＬＴ経口アジュバント
T M
T M
（７−
（大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）
不安定内毒素プロトキシン）；組成物いずれかの微小球体および微小粒子；ＭＦ５９
（スクアレン・水エマルジョン）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ ＩＳＡ ５１
ロイントアジュバント）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ ＩＳＡ ７２０
ント）；ＭＰＬ
T M
T M
T M
T M
；
（精製不完全フ
（代謝可能油アジュバ
（３−Ｑ−デスアシル−４’−モノホスホリル脂質Ａ）；ＭＴＰ−ＰＥ
およびＭＴＰ−ＰＥリポソーム（（Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル
−Ｌ−アラニン−２−（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−（ヒドロキシ−
ホスホリルオキシ））エチルアミド、一ナトリウム塩）；ＭＵＲＡＭＥＴＩＤＥ
T M
ｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＣＨ３）；ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥ
びＤ−ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥ
T M
（Ｎａ
T M
およ
（Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ｔｈｒ−Ｄ−イソＧｌｎ−
ｓｎ−グリセロールジパルミトイル）；ＮＡＧＯ（ノイラミニダーゼ−ガラクトースオキ
シダーゼ）；組成物いずれかのナノ球体またはナノ粒子；ＮＩＳＶ類（非イオン性界面活
性剤小胞）；ＰＬＥＵＲＡＮ
T M
（β−グルカン）；ＰＬＧＡ、ＰＧＡおよびＰＬＡ（乳酸
およびグリコール酸のホモポリマーおよびコポリマー；ミクロ粒子／ナノ粒子）；ＰＬＵ
ＲＯＮＩＣ Ｌ１２１
T M
；ＰＭＭＡ（ポリメチルメタクリレート）；ＰＯＤＤＳ
T M
（オロ
テイノイド（ｏｒｏｔｅｉｎｏｉｄ）微小球体）；ポリエチレンカルバメート誘導体；ポ
リｒＡ：ポリｒＵ（ポリアデニル酸−ポリウリジル酸複合体）；ポリソルベート８０（Ｔ
ｗｅｅｎ８０）；渦巻き型タンパク質（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｃｈｌｅａｔｅｓ）（Ａｖ
ａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ， Ｉｎｃ．、アラバマ州アラバスター）；ＳＴＩ
ＭＵＬＯＮ
T M
（ＱＳ−２１）；Ｑｕｉｌ−Ａ（Ｑｕｉｌ−Ａサポニン）；Ｓ−２８４６３
(79)
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（４−アミノ−オテック，−ジメチル−２−エトキシメチル−ｌＨ−イミダゾ［４，５−
ｃ］キノリン−１−エタノール）；ＳＡＦ−１
T M
（Ｓｙｎｔｅｘアジュバント配合物）；
センダイ・プロテオリポソームおよびセンダイ含有脂質マトリックス；Ｓｐａｎ−８５（
トリオレイン酸ソルビタン）；Ｓｐｅｃｏｌ（Ｍａｒｃｏｌ ５２、Ｓｐａｎ ８５およ
びＴｗｅｅｎ ８５のエマルジョン）；スクアレンまたはＲｏｂａｎｅ（登録商標）（２
，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチルテトラコサンおよび２，６，１０，１５，
１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２テトラコサヘキサエン）；
ステアリルチロシン（オクタデシルチロシンヒドロクロリド）；Ｔｈｅｒａｍｉｄｅ（登
録商標）（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−イソ
Ｇｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−ジパルミトキシプロピルアミド）；スレオニル−ＭＤＰ（Ｔｅｒｍ
ｕｒｔｉｄｅ
T M
または［ｔｈｒ１］−ＭＤＰ；Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−スレオニル−
Ｄ−イソグルタミン）；Ｔｙ粒子（Ｔｙ−ＶＬＰまたはウイルス様粒子）；Ｗａｌｔｅｒ
Ｒｅｅｄリポソームからなる群より選択される、請求項１の医薬組成物。
【請求項６】
抗原が癌抗原である、請求項１の医薬組成物。
【請求項７】
癌抗原が、黒色腫−メラニン細胞分化抗原（ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ Ａ；ｇｐ１０
０／ｐｍｅｌ−１７；チロシナーゼ；チロシナーゼ関連タンパク質−１；チロシナーゼ関
連タンパク質−２；メラニン細胞刺激ホルモン受容体）；癌−精巣抗原（ＭＡＧＥ−１；
ＭＡＧＥ−２；ＭＡＧＥ−３；ＭＡＧＥ−１２；ＢＡＧＥ；ＣＡＧＥ、ＮＹＥＳＯ−１）
；突然変異抗原（β−カテニン；ＭＵＭ−１；ＣＤＫ−４；カスパーゼ−８；ＫＩＡ ０
２０５；ＨＬＡ−Ａ２−Ｒ１７０１）；および癌で過剰発現される、非突然変異共有抗原
（α−フェトプロテイン；テロメラーゼ触媒タンパク質；Ｇ−２５０；ＭＵＣ−１；癌胎
児抗原；ｐ５３；Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ）、非突然変異タンパク質（ｇｐ１００；ＭＡＧＥ
−１；ＭＡＧＥ−３；チロシナーゼ；ＮＹ−ＥＳＯ−１）に由来するエピトープ、および
突然変異タンパク質（トリオースリン酸イソメラーゼ；ＣＤＣ−２７；ＬＤＬＲ−ＦＵＴ
）に由来するエピトープからなる群より選択される、請求項６の医薬組成物。
【請求項８】
抗原がウイルス抗原である、請求項１の医薬組成物。
【請求項９】
ウイルス抗原が、レトロウイルス科（例えばヒト免疫不全ウイルス、例えばＨＩＶ−１
（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶまたはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、またはＨＩＶ−ＩＩＩと
も称される；および他の単離体、例えばＨＩＶ−ＬＰ））； ピコルナウイルス科（例え
ばポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒト・コクサッキーウイルス
、ライノウイルス、エコーウイルス）；カリチウイルス科（Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ）
（例えば胃腸炎を引き起こす株）；トガウイルス科（例えばウマ脳炎ウイルス、風疹ウイ
ルス）；フラビウイルス科（例えばデング熱ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）
；コロナウイルス科（例えばコロナウイルス）；ラブドウイルス科（例えば水疱性口内炎
ウイルス、狂犬病ウイルス）；フィロウイルス（例えばエボラウイルス）；パラミクソウ
イルス科（例えばパラインフルエンザウイルス、おたふく風邪ウイルス、麻疹ウイルス、
呼吸器合胞体ウイルス）；オルトミクソウイルス科（例えばインフルエンザウイルス）；
ブニヤウイルス科（例えばハンタンウイルス、ブンガウイルス（ｂｕｎｇａ ｖｉｒｕｓ
）、フレボウイルスおよびナイロウイルス（Ｎａｉｒｏ ｖｉｒｕｓ））；アレナウイル
ス科（出血熱ウイルス）；レオウイルス科（例えばレオウイルス、オルビウイルスおよび
ロタウイルス）；ビルナウイルス科；ヘパドナウイルス科（Ｂ型肝炎ウイルス）；パルボ
ウイルス科（パルボウイルス）；パポバウイルス科（パピローマウイルス、ポリオーマウ
イルス）；アデノウイルス科（大部分のアデノウイルス）；ヘルペスウイルス科（単純ヘ
ルペスウイルス（ＨＳＶ）１および２、水痘・帯状ヘルペスウイルス、サイトメガロウイ
ルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス類）；ポックスウイルス科（天然痘ウイルス、ワクシ
ニアウイルス、ポックスウイルス）；およびイリドウイルス科（例えばアフリカ・ブタ熱
(80)
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ウイルス）；非Ａ非Ｂ肝炎のウイルス病原体；ノーウォークウイルスおよび関連ウイルス
、並びにアストロウイルス（ａｓｔｒｏｖｉｒｕｓ））からなる群より選択される、請求
項８の医薬組成物。
【請求項１０】
抗原が細菌抗原である、請求項１の医薬組成物。
【請求項１１】
細菌抗原が、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉｓ）
、ライム病ボレリア（Ｂｏｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、レジオネラ・ニュー
モフィリア（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、マイコバクテリウム
属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）種（例えばヒト型結核菌（Ｍ． ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓ
ｉｓ）、鳥型結核菌（Ｍ． ａｖｉｕｍ）、Ｍ．イントラセルラレ（Ｍ． ｉｎｔｒａｃ
ｅｌｌｕｌａｒｅ）、Ｍ．カンサシ（Ｍ． ｋａｎｓａｉｉ）、Ｍ．ゴルドネ（Ｍ． ｇ
ｏｒｄｏｎａｅ））、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）
、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉ
ａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、単球症リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙ
ｔｏｇｅｎｅｓ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（
Ａ群連鎖球菌）、ストレプトコッカス・アガラクティエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群連鎖球菌）、連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）
（ビリダンス群）、糞便連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、
ウシ連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｂｏｖｉｓ）、連鎖球菌属（嫌気性種）、
肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、病原性カンピロ
バクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）種、腸球菌属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）
種、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、炭疽菌（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｒａｃｉｓ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、コリネバクテリウム種、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏ
ｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、ウエルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｒｓ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）、エン
テロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、肺炎
桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａ
ｓｔｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ
）種、フソバクテリウム・ヌクレアツム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔ
ｕｍ）、ストレプトバチルス・モニリフォルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍ
ｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｉｕ
ｍ）、トレポネーマ・ペルテヌエ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐｅｒｔｅｎｕｅ）、レプトス
ピラ属（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、およびイスラエル放線菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｉｓｒａｅｌｌｉ）からなる群より選択される、請求項１０の医薬組成物。
【請求項１２】
抗原が感染性単細胞生物由来である、請求項１の医薬組成物。
【請求項１３】
抗原が、住血吸虫類；トリパノソーマ類；リーシュマニア属（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）
種；フィラリア性線形動物；トリコモナス症；肉胞子虫症；無鉤条虫（Ｔａｅｎｉａ ｓ
ａｇｉｎａｔａ）、有鉤条虫（Ｔａｅｎｉａ ｓｏｌｉｕｍ）、クリプトコッカス・ネオ
フォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、煙色コウジ菌（Ａ
ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉ
ｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃ
ｉｄｉｏｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、旋毛虫症、皮膚ブラストミセス（Ｂｌａｓｔｏｍｙ
ｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、トラコーマ・クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、鵞口瘡カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、熱
帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、三日熱マラリア原
虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ）、四日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ
(81)
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ｍａｌａｒｉａｅ）、およびトキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉ
ｉ）からなる群より選択される、請求項１２の医薬組成物。
【請求項１４】
癌を治療するための医薬組成物であって：
（ａ）Ｆｌｔ３リガンド；
（ｂ）場合により、補助分子；および
（ｃ）癌抗原およびアジュバントを含んでなるワクチン；
を組み合わせてなる、前記医薬組成物。
【請求項１５】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワ
クチン投与に続いて投与する、請求項１４の医薬組成物。
【請求項１６】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投
与に続いて投与する、請求項１４の医薬組成物。
【請求項１７】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８
および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよ
びガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリ
ーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパ
ク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ
配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１４の医薬組成物。
【請求項１８】
ウイルス感染を防止し、そして／または治療するための医薬組成物であって：
（ａ）Ｆｌｔ３リガンド；
（ｂ）場合により、補助分子；および
（ｃ）ウイルス抗原およびアジュバントを含んでなるワクチン；
を組み合わせてなる、前記医薬組成物。
【請求項１９】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワ
クチン投与に続いて投与する、請求項１８の医薬組成物。
【請求項２０】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投
与に続いて投与する、請求項１８の医薬組成物。
【請求項２１】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８
および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよ
びガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリ
ーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパ
ク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ
配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１８の医薬組成物。
【請求項２２】
細菌感染を防止し、そして／または治療するための医薬組成物であって：
（ａ）Ｆｌｔ３リガンド；
（ｂ）場合により、補助分子；および
（ｃ）細菌抗原およびアジュバントを含んでなるワクチン；
を組み合わせてなる、前記医薬組成物。
【請求項２３】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワ
クチン投与に続いて投与する、請求項２２の医薬組成物。
【請求項２４】
(82)
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補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投
与に続いて投与する、請求項２２の医薬組成物。
【請求項２５】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８
および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよ
びガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリ
ーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパ
ク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ
配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項２２の医薬組成物。
【請求項２６】
抗原に対する免疫応答を増進するための医薬組成物であって：
（ａ）Ｆｌｔ３リガンド；
（ｂ）場合により、補助分子；および
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチン；
を組み合わせてなる、前記医薬組成物。
【請求項２７】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワ
クチン投与に続いて投与する、請求項２６の医薬組成物。
【請求項２８】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投
与に続いて投与する、請求項２６の医薬組成物。
【請求項２９】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８
および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよ
びガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリ
ーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパ
ク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ
配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項２６の医薬組成物。
【請求項３０】
抗原に対する抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞免疫応答を増進するための医薬組成物であっ
て：
（ａ）Ｆｌｔ３リガンド；
（ｂ）場合により、補助分子；および
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチン；
を組み合わせてなる、前記医薬組成物。
【請求項３１】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワ
クチン投与に続いて投与する、請求項３０の医薬組成物。
【請求項３２】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投
与に続いて投与する、請求項３０の医薬組成物。
【請求項３３】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８
および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよ
びガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリ
ーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパ
ク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ
配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３１の医薬組成物。
【請求項３４】
抗原に対する抗原特異的Ｔヘルパー免疫応答を増進するための医薬組成物であって：
(83)
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（ａ）Ｆｌｔ３リガンド；
（ｂ）場合により、補助分子；および
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチン；
を組み合わせてなる、前記医薬組成物。
【請求項３５】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワ
クチン投与に続いて投与する、請求項３４の医薬組成物。
【請求項３６】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投
与に続いて投与する、請求項３４の医薬組成物。
【請求項３７】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８
および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよ
びガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリ
ーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパ
ク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ
配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３４の医薬組成物。
【請求項３８】
被験者における抗原に対する免疫応答の評価に用いる医薬組成物であって：
（ａ）Ｆｌｔ３リガンド；
（ｂ）場合により、補助分子；
（ｃ）抗原、ここで該抗原は、場合によってアジュバントとともに配合可能である；
を組み合わせてなる、前記医薬組成物。
【請求項３９】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワ
クチン投与に続いて投与する、請求項３８の医薬組成物。
【請求項４０】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投
与に続いて投与する、請求項３８の医薬組成物。
【請求項４１】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８
および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよ
びガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリ
ーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパ
ク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ
配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３８の医薬組成物。
【請求項４２】
１以上のアレルギーを治療するための医薬組成物であって：
（ａ）Ｆｌｔ３リガンド；
（ｂ）場合により、補助分子；および
（ｃ）アレルギーワクチン；
を組み合わせてなる、前記医薬組成物。
【請求項４３】
Ｆｌｔ３リガンドを、アレルギーワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして
／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項４２の医薬組成物。
【請求項４４】
補助分子を、アレルギーワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／または
ワクチン投与に続いて投与する、請求項４２の医薬組成物。
【請求項４５】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８
(84)
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および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよ
びガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリ
ーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパ
ク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ
配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項４２の医薬組成物。
(85)
【国際調査報告】
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(86)
JP 2005-528373 A 2005.9.22
(87)
JP 2005-528373 A 2005.9.22
フロントページの続き
7
(51)Int.Cl.
ＦＩ
テーマコード（参考）
Ａ６１Ｋ 39/008
Ａ６１Ｋ 39/015
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Ａ６１Ｋ 39/02
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Ａ６１Ｋ 39/085
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Ａ６１Ｋ 39/09
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Ａ６１Ｋ 39/102
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Ａ６１Ｋ 39/125
Ａ６１Ｋ 39/13
Ａ６１Ｋ 39/13
Ａ６１Ｋ 39/145
Ａ６１Ｋ 39/145
Ａ６１Ｋ 39/155
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Ａ６１Ｋ 39/165
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Ａ６１Ｋ 39/193
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Ａ６１Ｋ 39/20
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Ａ６１Ｋ 39/205
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Ａ６１Ｋ 39/21
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Ａ６１Ｋ 39/215
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Ａ６１Ｋ 39/23
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Ａ６１Ｋ 39/235
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Ａ６１Ｋ 39/245
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Ａ６１Ｋ 39/275
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Ａ６１Ｋ 39/285
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Ａ６１Ｋ 39/29
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Ａ６１Ｋ 39/39
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Ａ６１Ｐ 31/04
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１７１ Ａ６１Ｐ 31/06
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Ａ６１Ｐ 31/12
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Ａ６１Ｐ 31/14
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１７１ Ａ６１Ｐ 31/16
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Ａ６１Ｐ 31/18
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Ａ６１Ｐ 31/20
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Ａ６１Ｐ 31/22
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Ａ６１Ｐ 33/02
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Ａ６１Ｐ 33/06
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Ａ６１Ｐ 35/00
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Ａ６１Ｐ 35/02
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Ａ６１Ｐ 37/04
Ａ６１Ｐ 35/02
Ａ６１Ｐ 37/04
Ａ６１Ｋ 37/02
Ａ６１Ｋ 37/66
Ｇ
(81)指定国 AP(GH,GM,KE,LS,MW,MZ,SD,SL,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,MD,RU,TJ,TM),EP(AT,
BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HU,IE,IT,LU,MC,NL,PT,RO,SE,SI,SK,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,
(88)
JP 2005-528373 A 2005.9.22
GN,GQ,GW,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BR,BY,BZ,CA,CH,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DK,DM,DZ,
EC,EE,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,HR,HU,ID,IL,IN,IS,JP,KE,KG,KP,KR,KZ,LC,LK,LR,LS,LT,LU,LV,MA,MD,MG,MK,MN,M
W,MX,MZ,NI,NO,NZ,OM,PH,PL,PT,RO,RU,SC,SD,SE,SG,SK,SL,TJ,TM,TN,TR,TT,TZ,UA,UG,US,UZ,VC,VN,YU,ZA,ZM,ZW
(74)代理人 100096013
弁理士 富田 博行
(74)代理人 100107386
弁理士 泉谷 玲子
(72)発明者 マッケーナ，ヒラリー・ジェイ
アメリカ合衆国ワシントン州９８１９９，シアトル，サーティフィフス・アベニュー・ウエスト ２６４５
(72)発明者 レボウィッツ，デービット・エヌ
アメリカ合衆国カリフォルニア州９５１２５，サン・ノゼ，マリーナ・ウェイ １７９０
(72)発明者 マリスゼウスキー，チャールズ・アール
アメリカ合衆国ワシントン州９８１７７，シアトル，ノース・ウエスト・ワンハンドレッドトゥエ
ンティエス １０１４
Ｆターム(参考) 4C084 AA02 AA03 BA01 BA08 BA22 BA44 CA18 CA23 DA12 DA13
DA14 DA15 DA16 DA17 DA18 DA19 DA22 DA24 DA25 MA13
MA16 MA23 MA24 MA28 MA31 MA34 MA35 MA38 MA41 MA52
MA55 MA58 MA60 MA63 MA65 MA66 NA05 NA14 ZB091 ZB131
ZB261 ZB271 ZB331 ZB351 ZB371 ZB381 ZC551 ZC621
4C085 AA03 AA38 BA02 BA03 BA04 BA06 BA07 BA08 BA09 BA12
BA13 BA14 BA18 BA20 BA51 BA53 BA55 BA56 BA58 BA62
BA63 BA64 BA69 BA75 BA76 BA77 BA78 BA85 BA87 BA88
BA89 BA92 BB01 DD86 EE01 EE06 FF01 FF02 FF03 FF12
FF13 FF14 FF17 FF18 FF20 GG01 GG08 GG10

Vol.322 - 境港ライオンズクラブ

2006年2月号 SAIJO LIONS CLUB メガネリサイクルってなあに？

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一般契約について

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