開催報告書(PDF:16,0MB) - 愛媛大学プロテオサイエンスセンター

独立行政法人科学技術振興機構協定事業
平成 26 年度サイエンス・リーダーズ・キャンプ
タンパク質研究の先端技術を活用した
実践型次世代生命科学教育
業 務 成 果 報 告 書
国立大学法人愛媛大学
プロテオサイエンスセンター
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実験指導用資料(生徒用)【滝 朋子】
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実験指導用資料(生徒用)【山本 修平】
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実験指導用資料(生徒用)【土井 哲士】
35
実験指導用資料(生徒用)【夫婦石 敬】
36
実験指導用資料(生徒用) 【佐竹 弥代】
37
実験指導用資料(生徒用)【丸川 晋一】
38
実験指導用資料(生徒用)【隼瀬 憲一郎】
39
実験指導用資料(生徒用)【千脇 久美子】
40
実験指導用資料(生徒用)【長田 真範】
41
実験指導用資料(生徒用)【大石 英一】
42
実験指導用資料(生徒用)【渡辺 祐介】
43
実験指導用資料(生徒用)【大嶋 成幸】
44
実験指導用資料(生徒用)【國定 義憲】
45
実験指導用資料(生徒用)【穴見 美希】
46
実験指導用資料(生徒用)【宮越 敬記】
47
実験指導用資料(生徒用) 【柳沢 温郷】
48
実験指導用資料(生徒用)【八木 歩】
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実験指導用資料(生徒用)【吉岡 智春】
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実験指導用資料(生徒用)【富田 鮎美】
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実験指導用資料(生徒用)【向 雅生】
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講義「才能ある生徒を伸ばすための方策」の提出課題
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参加者の発表スライド 【チームG】
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63
参加者の発表スライド 【チームB】
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66
参加者の発表スライド 【チームR】
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67
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68
参加者の発表スライド 【チームO】
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50
12236.24
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13484.05
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26791.93
15409.92
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14000. 2
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Voyager Spec #1[BP = 1455.3, 16651]
100
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25293.03
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アンケート愛媛大学実施分
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掲載許可番号:
G20160601-02055
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詳細/教育活動トピ ックス/教育|愛媛大学
2015/3/14
教育
大学ホームページの記事
HOME 教育 教育活動トピックス 詳細
2014年08月22日
理数教育担当教員のための最先端科学技術体験合宿プログラム「平成26年度サ
イエンス・リーダーズ・キャンプ」を実施しました【7月30日(水)〜8月2日(土)】
平成26年7月30日(水)〜8月2日(土),プロテオサイエンスセンターで,サイエンス・リー
ダーズ・キャンプ「タンパク質研究の先端技術を活用した実践型次世代生命科学教育」を
実施しました。
独立行政法人科学技術振興機構が主催する「サイエンス・リーダーズ・キャンプ」は,中学校,高等学校等の理数教育を
担当する教員が,合宿形式で最先端の科学技術を体感し,才能ある生徒を伸ばすための効果的な指導方法を修得するこ
とにより,理数教育における指導力の向上を図るものです。また,参加者が将来,都道府県等の理数教育において,中核
的な役割を担う教員となるための素養の育成を図るとともに,地域の枠を超えた教員間のネットワーク形成を支援すること
も目的としています。今年度は全国の5大学で開催されています。
本学におけるキャンプの特徴は,生命体の分子素子であるタンパク質研究を機軸とし,「組換えDNAの作製と遺伝子導
入」,「本学で開発されたコムギ胚芽を利用した無細胞タンパク質合成実験」,「質量分析によるタンパク質の分析」など,一
般の高校では実施が困難な実験を体験し,「遺伝情報の流れ」や「DNAとタンパク質の働き」を理解させるために必要とな
る「生命現象を分子レベルで理解する素養」を体得すること,および研究センターにおける先端研究の見学や才能教育に関
する講義などによって,学習レベルを超えた高度な課題研究なども実施できるようになること,にあります。そのため,キャ
ンプ参加者は,勤務地において生命を理解するための授業を実践する一方で,より高度な課題研究や教材などを考案し,
その情報を共有することも求められています。
各県の教育委員会などから推薦を受けた20人の化学あるいは生物担当の高校教員(東京都,長野県,滋賀県,岡山県,
広島県,各2人,愛知県,京都府,奈良県,和歌山県,大阪府,兵庫県,山口県,香川県,徳島県,熊本県,各1人)は,ま
ず,プロテオリサーチ領域の林秀則教授から,遺伝子とタンパク質に関する講義を受けた後,理工学研究科の大学院生お
よび理学部学生などから指導を受けながら実験に取り組みました。
1日目に,DNA断片を接続して組換えDNAを作製し,これを大腸菌に導入しました。2日目には,本キャンプの目玉となるコ
ムギ胚芽による無細胞タンパク質合成実験を,高校向け教材として市販されているキットを主に用いて実施しました。また,
キャンプ終了後の情報共有を目的として,本学のe-ラーニングのサイトの利用法を学習しました。午後には,坪井敬文セン
ター長から,マラリアワクチンの開発状況や,プロテオリサーチ領域の各研究において研究内容や実験装置などの説明を
受けました。
本学学生の指導を受けながら実験開始
無細胞タンパク質合成に用いるRNAの確認
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詳細/教育活動トピ ックス/教育|愛媛大学
e-ラーニングの実習
マラリアの観察(重信ステーション)
3日目は,遺伝子組換えによって作られたタンパク質を電
気泳動によって分析したり,質量分析装置による測定を見
学したりしました。また,高崎健康福祉大学の片山豪教授
および丸亀城西高校の藤本博文教諭から「無細胞タンパ
ク質合成実験の授業の導入例」,隅田学准教授から「才能
教育への展開」など,実践に向けての講義を受けました。
午後からは重信キャンパスで,プロテオイノベーション領
域の今村健志教授から,生きた状態での生体微細構造の
解析について,プロテオメディシン領域の武森信暁教授か
ら,質量分析の医療への応用に関する講義を受けました。
そして,各研究部門において,研究対象や先端設備を見
タンパク質の電気泳動
学しました。
多くの参加者にとって,ほとんど初めての実験もあり,器具の使い方や試薬の成分,各操作の意義などを学生補助員に
熱心に質問していました。また,見学では,活発な質問と説明が交わされ,「生命科学の現状と医学への応用について聞く
ことができ,高校生に教えるときにより具体的なイメージをもって教えることができる」といった感想が聞かれました。
さらに,4日目には,テレビ会議システムを用い,米国サンタクルーズから遠藤弥重太特別栄誉教授による「生命って?私
って?〜神秘的な生命の原理を探ってみよう」と題した講義を受けました。参加者は,海外との双方向授業に感動した様子
でした。
米国サンタクルーズの遠藤特別栄誉教授とともに
夕食後の時間にはポスターセッションを行い,新しい学習指導要領に関連した実験授業や探究活動,あるいは生命活動
を分子レベルで理解させるための教材などについて活発な討議をしました。最終日には参加者が5班に分かれ,それぞれ
指示されていたテーマについてキャンプ中の実験の結果や考察を発表し,活発な討議によって内容の理解を深めました。
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詳細/教育活動トピ ックス/教育|愛媛大学
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各自が考案した実験教材などを相互に紹介
実験結果と考察の発表
このような参加者自らの積極的な取組みや教材に関する質問などから,今後,キャンプに参加した教員が,無細胞タンパ
ク質合成法やタンパク質の分析などの実験を授業に取り入れ,分子生物学や生化学に関連した生命科学教育が高校でも
実施されること,また本学における生命科学の研究が県外の多くの高校生に紹介されることが期待されます。
参加者の集合写真
プログラム概要
(PDFファイル 181KB)
サイエンス・リーダーズ・キャンプHP
新しい高校教科書「生物」
(PDFファイル 2,269KB)
<プロテオサイエンスセンター>
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1
TCTAGAATTCGAGCGGGATTTTATGGCTTTTTTAGGTATTTTTGTAAGGGTAAAATAGGC
61
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241 TTCGACCAACAATACCGTTACTGGTATTTGTCTGTTAAAGATAAGCATTTTTGCTGGAGG
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361 AATTAGATGGTGATGTTAACGGCCACAAGTTCTCTGTCAGTGGAGAGGGTGAAGGTGATG
421 CAACATACGGAAAACTTACCCTGAAGTTCATCTGCACTACTGGCAAACTGCCTGTTCCAT
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541 ATATGAAACGGCATGACTTTTTCAAGAGTGCCATGCCCGAAGGTTATGTACAGGAAAGGA
601 CCATCTTCTTCAAAGATGACGGCAACTACAAGACACGTGCTGAAGTCAAGTTTGAAGGTG
661 ATACCCTTGTTAATAGAATCGAGTTAAAAGGTATTGACTTCAAGGAAGATGGCAACATTC
721 TGGGACACAAATTGGAATACAACTATAACTCACACAATGTATACATCATGGCAGACAAAC
781 AAAAGAATGGAATCAAAGTGAACTTCAAGACCCGCCACAACATTGAAGATGGAAGCGTTC
841 AACTAGCAGACCATTATCAACAAAATACTCCAATTGGCGATGGCCCTGTCCTTTTACCAG
901 ACAACCATTACCTGTCCACACAATCTGCCCTTTCGAAAGATCCCAACGAAAAGAGAGACC
961 ACATGGTCCTTCTTGAGTTTGTAACAGCTGCTGGGATTACACATGGCATGGATGAACTGT
1021 ACAACTGAGGATCC
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185
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【実験操作 スピンカラムを用いたプラスミド DNA の調製】
【ジデオキシヌクレオチドを用いた DNA 断片の作製と解析】
1.5 mL の培養液を使用
1.
空のマイクロチューブ 2 本に名前を書いておく。 1 本は次の操作で、もう 1
DNA 配列解析のための PCR 反応
本は 14 の操作で使います。
2.
1.
マイクロチューブに培養液を約 1.5 mL とり、15,000 回転、4℃で 1 分間遠心分
上澄み液をアスピレーターで可能な限り取り除く(沈殿に触れないように注意)
4.
沈殿に 250 μL の Buffer P1(大腸菌の沈殿を均一な溶液にする緩衝液)を
加え、ボルテックスミキサーで完全に懸濁する。
250 μL の Buffer P2(大腸菌を溶かす溶液)を加え、チューブのふたをしっ
かり閉めて 10~20 回上下反転して、大腸菌を完全に溶かす(白濁した溶液
2.5×Ready Reaction プレミックス
1 μL
3.2 μM プライマー
1 μL
プラスミド DNA(実験操作 2-2-1 で調製したサンプル)
1 μL
13.5 μL
水
がだんだん透明になる)。
6.
3.5 μL
5×BigDye Sequencing Buffer
離し、大腸菌を沈殿にする。
3.
5.
以下の組成で DNA 配列解析のための PCR 反応液(20 μL)を調製する。
(プレミックスとよばれる試薬に蛍光ラベルされた 4 種類のジデオキシヌクレオチドが含まれている)
350 μL の Buffer N3(プラスミド DNA 以外の不必要なもの、ゲノム DNA やタ
ンパク質などを沈殿させる溶液)を加え、チューブのふたをしっかり閉めて上
下反転して白い沈殿を生じさせる。
2.
7.
15,000 回転、4℃で 10 分間遠心分離する。
8.
スピンカラム(DNA を吸着する樹脂が付いている)を廃液回収用のチューブ
前処理
にセットする。
9.
PCR サーマルサイクラーにセットし、以下の温度反応を行う。
96℃
2分
↓
操作 7 の遠心後、上澄み液を 800 μL だけピペットマンで注意深く吸い取り
(白い沈殿を一緒にとらないように)、スピンカラムに注入する。
10. 15,000 回転、4℃で 1 分間遠心分離する。
11. チューブにたまった液をすてたのち、スピンカラムを再びチューブにセットす
DNA 解離
96℃
10 秒
アニーリング
50℃
5秒
伸長
60℃
2分
25 サイクル
る。
PCR 反応産物の精製(エタノール沈殿)
12. スピンカラムに 750 μL の Buffer PE を注入し、15,000 回転、4℃で 1 分間遠
心する。
1.
13. チューブにたまった液をすてたのち、スピンカラムを再びチューブにセットし、
14. スピンカラムを操作 1 で用意したマイクロチューブにセットする、
15. 50 μL の Buffer EB をスピンカラムの底の中央に注ぎ、1 分放置したのち、15,000
回転、4℃で 1 分間遠心し、樹脂に吸着した DNA をマイクロチューブに回収する。
参考: 使用する溶液
TE(DNA を溶解させる緩衝液)
10 mM
トリス HCl (pH 8.0)、
PCR 反応後の溶液に 2 μL の 3 M 酢酸ナトリウム (pH5.2) と 50 μL の 99.5%エタノールを加え、15 秒間
ボルテックスする。
15,000 回転、4℃で 1 分間遠心する。
1 mM EDTA
Buffer P1(大腸菌を懸濁する緩衝液)
50 mM グルコース、 25 mM トリス HCl(pH8.0)、 10 mM EDTA(pH8.0)
2.
室温で 15 分間放置する。
3.
15,000 回転にて 4℃で 20 分間遠心する。
4.
上清をマイクロピペットで除去する。
5.
125 μL の 70%エタノールを加える。
6.
15,000 回転にて 4℃で 10 分間遠心する。
7.
上清をマイクロピペットで除去する。
8.
50℃のヒートブロックで 1 分間置き、残存のエタノールを完全に蒸発させる。
9.
15 μL のホルムアミドを加えて、15 秒間ボルテックスし、スピンダウンする。
10. オートシーケンスの専用チューブに移す。
Buffer P2(大腸菌の細胞を破砕する溶液、室温保存)
11. サンプルを 95℃で 2 分間処理後、氷上で急冷する。
0.2 N NaOH、 1% SDS
12. ABI310 オートシーケンサーにセットし、解析をスタートする。
Buffer N3(ゲノム DNA を沈殿させるために使用、氷冷しておく)
5 M 酢酸カリウム 60 mL 酢酸 11.5 滅菌水 28.5 mL
41
42
☆参考: プラスミドベクターの一例
☆参考: インサート DNA の塩基配列
このプラスミドベクターを XbaI と BamHI で処理して、インサート DNA を挿入しています。
以下の文字列は大腸菌に導入したプラスミド DNA のインサートの部分の塩基配列です(両端の下線の部
分でベクターDNA と接続している。この文字列を解読して光るタンパク質のアミノ酸配列に変換してください。
実際に遺伝子導入した緑色蛍光タンパク質の DNA は遺伝子 A~C のどれかです。
ヒント: ATGという文字列を探す(300 番目近くにあるものがそうです)。ATGからあとの文字列を 3 個ずつ次
のページの暗号表にしたがってアミノ酸に変えていく。例えば遺伝子 A についてはTGAという文字列が出て
きたら終わりです。その直前のアミノ酸がチロシン-アスパラギン.となれば正解です。
構成成分であるアミノ酸
遺伝子 G
1
TCTAGAATTCGAGCGGGATTTTATGGCTTTTTTAGGTATTTTTGTAAGGGTAAAATAGGC
61
CCATCAAACAGCATTAGAAATGCTAATCAGCCCAAAAAACAAAAGCAATCTTTTTTTGTT
121 GCTAAAAGATAAAAATAAGTCGAGGCTGTGGTAACATATCCCACAGATTAAAGAAAGTCA
181 TAAGACTTGAATCTTCAGAATTTTAAAAAGCAGTTTTGCCAACGTAAGATTTTTGAAGTT
241 TTCGACCAACAATACCGTTACTGGTATTTGTCTGTTAAAGATAAGCATTTTTGCTGGAGG
301 AAAACCATATGGCTAGCAAAGGAGAAGAACTCTTCACTGGAGTTGTCCCAATTCTTGTTG
361 AATTAGATGGTGATGTTAACGGCCACAAGTTCTCTGTCAGTGGAGAGGGTGAAGGTGATG
421 CAACATACGGAAAACTTACCCTGAAGTTCATCTGCACTACTGGCAAACTGCCTGTTCCAT
481 GGCCAACACTAGTCACTACTCTGTGCTATGGTGTTCAATGCTTTTCAAGATACCCGGATC
541 ATATGAAACGGCATGACTTTTTCAAGAGTGCCATGCCCGAAGGTTATGTACAGGAAAGGA
601 CCATCTTCTTCAAAGATGACGGCAACTACAAGACACGTGCTGAAGTCAAGTTTGAAGGTG
661 ATACCCTTGTTAATAGAATCGAGTTAAAAGGTATTGACTTCAAGGAAGATGGCAACATTC
721 TGGGACACAAATTGGAATACAACTATAACTCACACAATGTATACATCATGGCAGACAAAC
781 AAAAGAATGGAATCAAAGTGAACTTCAAGACCCGCCACAACATTGAAGATGGAAGCGTTC
841 AACTAGCAGACCATTATCAACAAAATACTCCAATTGGCGATGGCCCTGTCCTTTTACCAG
901 ACAACCATTACCTGTCCACACAATCTGCCCTTTCGAAAGATCCCAACGAAAAGAGAGACC
961 ACATGGTCCTTCTTGAGTTTGTAACAGCTGCTGGGATTACACATGGCATGGATGAACTGT
1021 ACAACTGAGGATCC
43
185
44
遺伝子B
遺伝子 R
1
TCTAGAATTCAAGCGGGATTTTATGGCTTTTTTAGGTATTTTTGTAAGGGTAAAATAGGC
61
CCATCAAACAGCATTAGAAATGCTAATCAGCCCAAAAAACAAAAGCAATCTTTTTTTGTT
1
TCTAGAATTCGAGCGGGATTTTATGGCTTTTTTAGGTATTTTTGTAAGGGTAAAATAGGC
61
CCATCAAACAGCATTAGAAATGCTAATCAGCCCAAAAAACAAAAGCAATCTTTTTTTGTT
121 GCTAAAAGATAAAAATAAGTCGAGGCTGTGGTAACATATCCCACAGATTAAAGAAAGTCA
121 GCTAAAAGATAAAAATAAGTCGAGGCTGTGGTAACATATCCCACAGATTAAAGAAAGTCA
181 TAAGACTTGAATCTTCAGAATTTTAAATAGCAGTTTTGCCAACGTAAGATTTTTGAAGTT
181 TAAGACTTGAATCTTCAGAATTTTAAAAAGCAGTTTTGCCAACGTAAGATTTTTGAAGTT
241 TTCGACCAACAATACCGTTACTGGTATTTGTCTGTTAAAGATAAGCATTTTTGCTGGAGG
241 TTCGACCAACAATACCGTTACTGGTATTTGTCTGTTAAAGATAAGCATTTTTGCTGGAGG
301 AAAACCATATGGCTAGCAAAGGAGAAGAACTCTTCACTGGAGTTGTCCCAATTCTTGTTG
301 AAAACCATATGGCTAGCTCCGAGGACGTCATCAAGGAGTTCATGCGCTTCAAGGTCCGCA
361 AATTAGATGGTGATGTTAACGGCCACAAGTTCTCTGTCAGTGGAGAGGGTGAAGGTGATG
361 TGGAGGGCTCCGTCAACGGCCACGAGTTCGAGATCGAAGGCGAAGGCGAGGGCCGACCGT
421 CAACATACGGAAAACTTACCCTGAAGTTCATCTGCACTACTGGCAAACTGCCTGTTCCAT
421 ACGAAGGCACCCAGACCGCCAAGTTGAAGGTCACCAAGGGCGGCCCATTGCCCTTCGCCT
481 GGCCAACACTAGTCACTACTCTGTCCCATGGTGTTCAATGCTTTTCAAGATACCCGGATC
481 GGGACATCTTGTCCCCACAGTTCCAGTACGGCTCCAAGGCCTACGTCAAGCACCCGGCCG
541 ATATGAAACGGCATGACTTTTTCAAGAGTGCCATGCCCGAAGGTTATGTACAGGAAAGGA
541 ACATCCCCGACTACTTGAAGTTGTCCTTCCCAGAAGGCTTCAAGTGGGAGCGCGTCATGA
601 CCATCTTCTTCAAAGATGACGGCAACTACAAGACACGTGCTGAAGTCAAGTTTGAAGGTG
601 ACTTCGAGGACGGCGGCGTCGTCACCGTCACCCAGGACTCCTCATTGCAGGACGGCGAGT
661 ATACCCTTGTTAATAGAATCGAGTTAAAAGGTATTGACTTCAAGGAAGATGGCAACATTC
661 TCATCTACAAGGTCAAGTTGCGCGGCACCAACTTCCCCTCCGACGGCCCGGTCATGCAGA
721 TGGGACACAAATTGGAATACAACTATAACTCACACAATGTATACATCATGGCAGACAAAC
721 AGAAGACCATGGGCTGGGAGGCCTCCACCGAGCGCATGTACCCCGAGGACGGCGCCTTGA
781 AAAAGAATGGAATCAAAGTGAACTTCAAGACCCGCCACAACATTGAAGATGGAAGCGTTC
781 AGGGCGAGATCAAGATGCGCTTGAAGTTGAAGGACGGCGGCCACTACGACGCCGAGGTCA
841 AACTAGCAGACCATTATCAACAAAATACTCCAATTGGCGATGGCCCTGTCCTTTTACCAG
841 AGACCACCTACATGGCCAAGAAGCCCGTCCAGTTGCCCGGCGCCTACAAGACCGACATCA
900 ACAACCATTACCTGTCCACACAATCTGCCCTTTCGAAAGATCCCAACGAAAAGAGAGACC
901 AGTTGGACATCACCTCCCACAACGAGGACTACACCATCGTCGAGCAGTACGAGCGCGCCG
961 ACATGGTCCTTCTTGAGTTTGTAACAGCTGCTGGGATTACACATGGCATGGATGAACTGT
961 AGGGCCGCCACTCCACCGGCGCCTAAGGATCC
1021 ACAACTGAGGATCC
45
46
☆参考: 遺伝暗号表(DNA の塩基配列とアミノ酸の対応)
遺伝子 O
1
TCTAGAATTCGAGCGGGATTTTATGGCTTTTTTAGGTATTTTTGTAAGGGTAAAATAGGC
61
CCATCAAACAGCATTAGAAATGCTAATCAGCCCAAAAAACAAAAGCAATCTTTTTTTGTT
第
1
文
字
121 GCTAAAAGATAAAAATAAGTCGAGGCTGTGGTAACATATCCCACAGATTAAAGAAAGTCA
U
181 TAAGACTTGAATCTTCAGAATTTTAAAAAGCAGTTTTGCCAACGTAAGATTTTTGAAGTT
C
241 TTCGACCAACAATACCGTTACTGGTATTTGTCTGTTAAAGATAAGCATTTTTGCTGGAGG
301 AAAACCATATGGCTAGCAAGGGCGAGGAGAATAACATGGCCATCATCAAGGAGTTCATGC
A
361 GCTTCAAGGTGCGCATGGAGGGCTCCGTGAACGGCCACGAGTTCGAGATCGAGGGCGAGG
421 GCGAGGGCCGCCCCTACGAGGGCTTTCAGACCGCTAAGCTGAAGGTGACCAAGGGTGGCC
481 CCCTGCCCTTCGCCTGGGACATCCTGTCCCCTCAGTTCACCTACGGCTCCAAGGCCTACG
G
541 TGAAGCACCCCGCCGACATCCCCGACTACTTCAAGCTGTCCTTCCCCGAGGGCTTCAAGT
UUU
UUC
UUA
UUG
CUU
CUC
CUA
CUG
AUU
AUC
AUA
AUG
GUU
GUC
GUA
GUG
U
Phe/F
Phe/F
Leu/L
Leu/L
Leu/L
Leu/L
Leu/L
Leu/L
Ile/I
Ile/I
Ile/I
Met/M
Val/V
Val/V
Val/V
Val/V
UCU
UCC
UCA
UCG
CCU
CCC
CCA
CCG
ACU
ACC
ACA
ACG
GCU
GCC
GCA
GCG
第2文字
C
Ser/S
UAU
Ser/S
UAC
Ser/S
UAA
Ser/S
UAG
Pro/P
CAU
Pro/P
CAC
Pro/P
CAA
Pro/P
CAG
Thr/T
AAU
Thr/T
AAC
Thr/T
AAA
Thr/T
AAG
Ala/A
GAU
Ala/A
GAC
Ala/A
GAA
Ala/A
GAG
601 GGGAGCGCGTGATGAACTTCGAGGACGGCGGCGTGGTGACCGTGACCCAGGACTCCTCCC
☆参考 アミノ酸の名称と略号
661 TGCAGGACGGCGAGTTCATCTACAAGGTGAAGCTGCGCGGCACCAACTTCCCCTCCGACG
1 文字
A
C
D
E
F
G
H
I
K
L
M
N
P
Q
R
S
T
V
W
Y
721 GCCCCGTAATGCAGAAGAAGACCATGGGCTGGGAGGCCTCCTCCGAGCGGATGTACCCCG
781 AGGACGGCGCCCTGAAGGGCGAGATCAAGATGAGGCTGAAGCTGAAGGACGGCGGCCACT
841 ACACCTCCGAGGTCAAGACCACCTACAAGGCCAAGAAGCCCGTGCAGCTGCCCGGCGCCT
901 ACATCGTCGGCATCAAGTTGGACATCACCTCCCACAACGAGGACTACACCATCGTGGAAC
961 AGTACGAACGCGCCGAGGGCCGCCACTCCACCGGCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAGC
1021 GGCCGCGACTCTAGAATTCCAAGCTT
47
186
3 文字
Ala
Cys
Asp
Glu
Phe
Gly
His
Ile
Lys
Leu
Met
Asn
Pro
Gln
Arg
Ser
Thr
Val
Trp
Tyr
英語名
Alanine
Cysteine
Aspartic Acid
Glutamic Acid
Phenylalanine
Glycine
Histidine
Isoleucine
Lysine
Leucine
Methionine
Asparagine
Proline
Glutamine
Arginine
Serine
Threonine
Valine
Tryptophan
Tyrosine
日本語名
アラニン
システイン
アスパラギン酸
グルタミン酸
フェニルアラニン
グリシン
ヒスチジン
イソロイシン
リジン
ロイシン
メチオニン
アスパラギン
プロリン
グルタミン
アルギニン
セリン
スレオニン
バリン
トリプトファン
チロシン
48
A
Tyr/Y
Tyr/Y
終了
終了
His/H
His/H
Gln/Q
Gln/Q
Asn/N
Asn/N
Lys/K
Lys/K
Asp/D
Asp/D
Glu/E
Glu/E
UGU
UGC
UGA
UGG
CGU
CGC
CGA
CGG
AGU
AGC
AGA
AGG
GGU
GGC
GGA
GGG
G
Cys/C
Cys/C
終了
Trp/W
Arg/R
Arg/R
Arg/R
Arg/R
Ser/S
Ser/S
Arg/R
Arg/R
Gly/G
Gly/G
Gly/G
Gly/G
☆参考: SDS-PAGE 用ゲルの作製
準備するもの
7.
濃縮ゲル溶液に重合反応開始剤 TEMED を加えて混合し、すみやかに分離ゲルの上に重層する。
8.
コームを挿し込み、30 分間静置してゲルを重合させる。
9.
濃縮ゲルが固まったら、クリップ、ゴム、コームを抜き、すぐに純水でレーンを洗浄する。
10. 泳動槽にゲルをセットして、1× SDS-PAGE 泳動 buffer で満たしてサンプルをチャージする。
ガラスプレート
コーム
シール用ゴム板
クリップ
手順
1.
2 枚の泳動用ガラスプレートをイソプロピルアルコールでよく拭き、乾燥
させてからストッパーのゴムをはさみクリップで固定する。分離ゲルを注ぐ
目安となる線をコームの先から 1.5 cm のところに引いておく。
2.
必要な溶液
下記の表 1 に従って、TEMED 以外の試薬を 50 ml のチューブ内で混合し、
分離・濃縮ゲル溶液をそれぞれ調製する。
3× タンパク質溶解液
表 1 SDS-PAGE 用ゲルの組成
12.5% ポリアクリルアミド分離ゲル(9 ml)
150 mM
Tris-HCl(pH6.8)
6%
SDS
30%
グリセロール
純水
3 ml
0.03%
ブロモフェノールブルー
30% アクリルアミド溶液
3.75 ml
7%
β-メルカプトエタノール
分離ゲル buffer〔1M Tris-HCl(pH8.8), 0.4% SDS〕
2.25 ml
10% 過硫酸アンモニウム(APS)
40 µl
N,N,N’,N’-テトラメチルエタン-1,2-ジアミン(TEMED)
5 µl
1× SDS-PAGE 泳動 buffer
ポリアクリルアミド濃縮ゲル(3 ml)
純水
1.8 ml
30% アクリルアミド溶液
450 µl
濃縮ゲル buffer〔1M Tris-HCl(pH6.8), 0.4% SDS〕
750 µl
10% 過硫酸アンモニウム(APS)
20 µl
N,N,N’,N’-テトラメチルエタン-1,2-ジアミン(TEMED)
5 µl
3.
分離ゲル溶液に重合反応開始剤 TEMED を加えて混合し、すみやかにガラスプレートの隙間に注ぐ。
4.
マイクロピペットを使って、分離ゲルの上から純水をぎりぎりいっぱいまで重層する。
5.
30 分~1 時間室温で静置してゲルを重合させる。
6.
分離ゲルが固まったら、純水を取り除き水気を切る。
スケジュール
クマーシーブリリアントブルー
5%
メタノール
7.5%
酢酸
50
.
16:00~18:00 実習「大腸菌による組換えタンパク質の大量発現」
18:00~19:00 夕食(生協食堂他)
19:00~20:30 ポスターセッション「生命を理解するための教材と探究活動」
7 月 31 日(木曜日)
8:45~ 9:00 実験結果の観察と解析
9:00~10:00 講義「遺伝子とタンパク質-遺伝情報の解読」
10:00~11:00 実習「無細胞合成系によるタンパク質の合成-1:mRNA の合成」
11:00~12:00 実習「PCR による DNA の増幅」
12:00~13:00 昼食(生協食堂他)
13:00~14:00 講義「生体分子って何?-生体分子を視てみよう!パソコンで触ってみよう-」
14:00~15:00 実習「無細胞合成系によるタンパク質の合成-2:タンパク質の試験管内合成」
15:00~16:00 実習「電気泳動による DNA の分析」
16:00~17:30 講義「タンパク質はマラリアを無くす切り札」
および研究センター(城北キャンパス、プロテオリサーチ領域)の見学
18:00~20:00 講師等との交流会(セトリアン2階)
8 月 1 日(金曜日)
8:45~ 9:00
実験結果の観察と解析
9:00~10:00
実習「電気泳動によるタンパク質の分析」
10:00~11:00 講義「ヒトのタンパク質は何種類?」
11:00~12:00 実習「質量分析によるタンパク質の分析」
12:00~13:00 昼食(生協食堂他)
13:00~14:45 生命科学教育の事例紹介および講義「無細胞タンパク質合成実験の新学習指導要領生物
への導入」
15:30~18:30 研究センター(重信キャンパス、プロテオメディシン領域、プロテオイノベーション領域)の見学
19:00~20:00 夕食(生協食堂他)
20:00~20:30 結果の観察
宿舎に移動
8 月 2 日(土曜日)
講義「生命って?私って?」
0.25%
SDS:ドデシル硫酸ナトリウム
15:00~16:00 講義「遺伝子とタンパク質-タンパク質の多様性」
実験結果の観察と解析
SDS
略語
14:00~15:00 開講式/概要説明
9:00~10:30
0.1%
Tris: トリスヒドロキシメチルアミノメタン
7 月 30 日(水曜日)
8:45~ 9:00
Tris
グリシン
CBB 染色液
49
20:30
25 mM
192 mM
10:30~11:30 実験結果の解析および発表の準備
11:30~12:30 昼食(弁当)
12:30~13:45 結果の考察と発表(各グループで実施)
13:45~14:00 閉講式
56
187
平成26年度サイエンス・リーダーズ・キャンプ
タンパク質研究の先端技術を活用した実践型次世代生命科学教育
「業務成果報告書」
発
行
日 平成 27 年 (2015 年) 3 月 10 日
編 集 ・ 発 行 国立大学法人 愛媛大学
プロテオサイエンスセンター
〒790-8577 松山市道後樋又 10 番 13 号
問い合わせ先 愛媛大学
林 秀則
[email protected]
高崎健康福祉大学 片山 豪
[email protected]
印
刷 不二印刷株式会社
〒790-0054 松山市空港通 2 丁目 13-30