Noboru Inoue, D.V.M., Ph.D., E-mail: [email protected] National Research Center for Protozoan Diseases Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine, Obihiro, Hokkaido 080-8555, Japan トリパノソーマ・パラシテミアカウント法ウエットスメア法ウエットスメアの作製 1）尾の先端を 1 mm ほど切断し、2〜3 µl の血液を直接清潔なスライドグラス上に採取する。 2）清潔なカバーガラスを血液にかぶせる。原虫数の算定 1）対物 40 倍、接眼 10 倍のレンズを用いてスメアを観察し、1 視野あたりの原虫数を求める。原虫を算定する際に数える視野数の目安原虫がほとんどいないとき： 40 視野 1 視野あたり 1〜10 匹： 20 視野 1 視野あたり 10〜20 匹： 5 視野 1 視野あたり 20〜50 匹： 1 視野 1 視野あたり 50 匹以上：血球計算盤法を行う 2）次の計算式で血液中のおよその原虫濃度をもとめる。（前に鳴海君と作製したコンバージョンテーブルから導き出した計算式です。）原虫濃度（cells/ml）= 3.27×106×（１視野あたりの原虫数）0.944 例えば 40 視野に原虫が 1 匹見つかった場合原虫濃度 = 3.27×106×（1÷40）0.944 = 3.27×106×0.0250.944 = 100509 cells/ml 血球計算盤法感染血液 5 µl を PSG 2.5 ml と混合（500 倍希釈）して血球計算盤で原虫数を算定し、原虫濃度をもとめる。（注意）500 倍以下の希釈率では赤血球濃度が高く、原虫を血球計算盤でカウントしずらくなります。 Noboru Inoue, D.V.M., Ph.D., E-mail: [email protected] National Research Center for Protozoan Diseases Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine, Obihiro, Hokkaido 080-8555, Japan バフィコート法 1）ヘマトクリット管に 1/4 採血し、遠心する。データの比較検討を可能とするため毎回採血量を同じにする。 2）遠心後、バフィコートから約 1 mm 血漿側をアンプルカッターで切断する。 3）バフィコートを清潔なスライドグラス上に押しだす。（ヘマトクリット管底部の粘土を注射針などで押してやると簡単にバフィコートがでてきます） 4）清潔なカバーグラスをかぶせてバフィコートのウエットスメアを作製する 5）スメアの全領域を 100 倍程度の低倍率で観察し、原虫を検出する。（注意）バフィコートで検出できる原虫濃度は 1000〜10000 cells/ml ぐらいです。