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cDNA Library(Plasmid DNA)

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cDNA Library(Plasmid DNA)
Mouse Kidney
Code No. 9530
Size : 5 μg
Shipping at -20℃
Stored at -20℃
Lot No.
Concentration:200 μg/ml
Description:
This cDNA library is constructed according to a method based on
Gubler and Hoffman procedure (Gene 25, 263-269 (1983)). This
library is unidirectionally cloned by using oligo(dT)18 Linker Primer
which contains the restriction enzyme site of Not I and Bam H I (Bgl
II)-Sma I Adaptor. Prior to cloning, low molecular weight cDNA
(less than 300 bp) is almost removed by size fractionation. As the
library is amplified once on solid medium plate, it keeps its original
library. Plasmid DNA is purified from amplified library with a plasmid
extraction kit.
Application:
PCR screening of known or unknown cDNA
Supplied form: 10 mM Tris-HCl(pH8.0)
1 mM EDTA
Cloning vector:
The pAP3neo vector used in this library can express in mammalian cells
as it contains SV40 promoter. Also it contains f1 ori which is necessary
for synthesis of ssDNA, and T7 and T3 RNA polymerase promoter for
RNA synthesis.
GenBank Accession No. AB003468
coprecipitant.
Quality Control data:
1) Number of independent clones (before amplification): 2.1 x 106
2) Insert size determination
The insert size distribution of this library was determined by PCR. The
15 colonies were randomly picked and subjected to PCR using T7 and
T3 RNA polymerase promoter primers.
Average insert size: 1.1 kbp
3) Detection of housekeeping genes by PCR
Using 10 ng of this library as a template, cDNAs of the following three
housekeeping genes were detected by PCR.
Expression level in each cell
(1) β-Actin
(2) Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase
(3) Transferrin Receptor
high
moderate
low
Reference:
1) Gubler, U. and Hoffman, B.J. (1983) Gene 25, 263-269.
2)Kobori, M., Ikeda, Y., Nara, H., Kato, M., Kumegawa, M., Nojima, H., and
Kawashima, H., (1998) Genes To Cells , 3,459-475.
Cloning site:
The cloning site is Bgl ll*/ Not l.
*The Bgl II site was destroyed after cloning of Insert cDNA using Bam H I
(Bgl II)-Sma I adaptor (TaKaRa Cat.# 4501, 4585P).
mRNA Source:
Pooled from 200 BALB/c males, ages 9-11 weeks
Purity:
(1) Non-specific DNase activity is not detected after incubation of
DNA in the restriction enzyme reaction buffer at 37。C for 16 hrs as
evaluated by agarose gel electrophoresis.
(2) E. coli Genomic DNA may be present in this library because this
product is extracted with a commercial plasmid extraction kit.
Note:
E. coli tRNA used in preparation of this library is almost removed by size
fractionation. Pellet paintTM Co-Precipitant(Novagen, Inc.)is used as a
Note : This product is intended to be used for research purpose only.
They are not to be used for drug or diagnostic purposes, nor are they
intended for human use. They shall not to be used products as food,
cosmetics, or utensils, etc.
Takara products may not be resold or transfered, modified for resale
or transfer, or used to manufacture commercial products without
written approval from TAKARA BIO INC.
If you require licenses for other use, please call at +81 77 543 7247 or
contact from our website at www.takara-bio.com .
U. S. Patent 5,436,149 for LA Technology is owned by TAKARA BIO INC.
Produced by TAKARA BIOTECHNOLOGY(DALIAN)CO,. LTD.
V2007.03Da
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For more information, access to ; www.takara.com
cDNA Library(プラスミドDNA型)
Mouse Kidney
Code No. 9530
Size : 5 μg
Shipping at -20℃
Stored at -20℃
Lot No. (英文面をご覧ください。)
濃度
200 μg/ml
●Quality Control Data
1) Number of Independent Clones(増幅前) 2.1×106
2) Insert cDNAの確認
cDNAライブラリーのInsert size は、ランダムに拾い上げた15コロニーの
Insert cDNAをpolymerase chain reaction(PCR)で増幅して確認してい
ます。
Average Insert Size 1.1 kbp
3) Housekeeping geneのPCRによる検出
●製品説明
本製品は Gubler and Hoffman の方法
(Gene 25:263-269,(1983))に基
づいて作製したcDNAライブラリーです。制限酵素 Not I 認識部位を有する
oligo(dT)18リンカープライマーとBam H (
I Bgl II)-Sma Iアダプターを用い
て、unidirectional cloning してあります。さらに、クローニングの前にサ
イズ分画を行い、約300bp以下の断片をある程度除去しています。ライ
ブラリーはプレート培養法により1度だけ増幅した後、プラスミド抽出Kit
を使用してプラスミドDNAを調製しており、プライマリーライブラリーを
できるだけ保っています。
●用途
新規あるいは既知のcDNAのPCRスクリーニング
●形状
10 ngのcDNAライブラリーをテンプレートとしたPCRにより以下の3種の
cDNAを増幅して検出しています。
(1)β-Actin
(発現量 High level)
(2)Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase
(発現量 Moderate level)
(3)Transferrin Receptor
(発現量 Low level)
●参考文献
1)Gubler, U. and Hoffman, B.J. (1983) Gene 25, 263-269.
2)野島博
(1994)実験医学別冊バイオマニュアルシリーズ2「遺伝子ライブ
ラリーの作製法」,79-94
10 mM Tris-HCl(pH8.0)
1 mM EDTA
●クローニングベクター
cDNAライブラリーに使用しているベクター pAP3neo は、SV40プロモー
ターを有し哺乳動物細胞で発現可能です。また、ssDNA生成に必要なf1
ori、RNA合成のためのT7 およびT3RNAポリメラーゼプロモーターを含ん
でいます。
GenBank Accession No. AB003468
3)Kobori, M., Ikeda, Y., Nara, H., Kato, M., Kumegawa, M., Nojima, H.,
and Kawashima, H., (1998) Genes To Cells , 3,459-475.
●クローニングサイト
Insert cDNAは、pAP3neoのBgl II*/ Not Iサイトにクローニングしています。
*Adaptor, Bam H(
I Bgl ll)-Sma l(製品コード 4501, 4585P)を用いてクロー
ニングしているため、クローニング後のBgl IIサイトは潰れています。
●mRNA Source
Pooled from 200 BALB/c males, ages 9-11 weeks
●純度
(1)制限酵素反応用バッファー中、DNAを37℃で16時間放置後、アガロー
スゲル電気泳動を行い、そのDNA泳動パターンにより、non-specific
DNaseがないことを確認しています。
(2)プラスミドDNAの調製は、プラスミド抽出kitを使用しており、宿主の
ゲノムDNAが混入している場合があります。
●備考
ライブラリー 作 製 時にE. coli tRNAを 使 用していますが、サイズ分 画
の過程である程度除去しています。また、共沈剤にpellet paintTM CoPrecipitant(製品コード NV625)を使用しています。
●注意
・本製品は研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、
臨 床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、 化粧品、家庭用品等として使用しないでください。
・タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡の ための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。
V2007.03Da
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製品についての
技術的なお問い合わせ先
TaKaRa テクニカルサポートライン
Tel 077-543-6116
Fax 077-543-1977
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