手足口病について - 検査法の視点から ○近平 雅嗣，荻 美貴 （健康科学研究センター感染症部），藤本 嗣人(国立感染症研究所) 【背景と目的】 感染症発生動向調査における病原体検索の黎明期 から，地方衛生研究所が調査に携わってきた手足口病 は，ヘルパンギーナ等と共に夏季に患者が集中する代 表的なエンテロウイルスの乳幼児感染症で，成人の感染 も報告されている．口腔粘膜や手足に出現する水泡を伴 う発疹は短期間で軽快し，一般に手足口病は予後良好と されるが，稀に中枢神経系や心筋などの合併症により重 症化する．中でも，1997 年以降のエンテロウイルス 71 型 (EV71)による手足口病では，東アジアを中心に重症例 や死亡例が多く報告され，兵庫県内でも死亡例から本ウ イルスを検出した．患者からは EV71 に加えて，コクサッ キーA6(CA6)や CA10 等の A 群を主体に様々なエンテ ロウイルスが検出される． 表 エンテロウイルス属の型 群 A B 型 コクサッキーA: 2，3，4，5，6，7，8，10，12，14，16 エンテロ: 71，76，89，90，91 コクサッキーA: 9 コクサッキーB: 1，2，3，4，5，6 エコー: 1 ~ 7，9，11 ~ 21，24 ~27，29 ~33 エンテロ: C D 69，73 ~ 75，77 ~ 88，97，100，101 コクサッキーA: 1，11，13，17，19，20，21，22，24 ポリオ: 1，2，3 エンテロ: 96 エンテロ: 68，70 新版)を精査した． 【検査の概要】 1. 手足口病起因病原体の主体は CA16， EV71，CA6 及び CA10 である． 2. ウイルス分離に用いる細胞は RD-18S，RD-A，HEL （ヒト肺 2 倍体細胞），Vero 等多岐に渡っている． 3. 細胞分離したウイルス同定のための抗 CA16， EV71， CA6， CA10 血清は，エコーウイルスや CA 同定に用いる汎用プール血清には含まれない ため，それぞれに対する単味抗血清を用いることに なる． 4. 遺伝子検査では VP1 領域と VP4-VP2 領域を増幅 するが，型同定は VP1 領域が基準となっており， 配列が 75％以上一致すれば同一型となる． 【考察】 2000 年頃までは，分離ウイルスの中和による同定が 一般的であったが，型間や株間でも細胞感受性が異なり， さらに細胞も継代を続けることでウイルス感受性に差が生 じるなど，細胞分離では安定性のある結果を求めること が難しい． このため，ウイルス分離によらず臨床検体からのダイ レクトなゲノム解析による型別を行うことが多くなった．た だ，この方法はすべての型のエンテロウイルスを検出•型 別することを主眼に開発されたため，検出感度が高いと は言い難い．ゲノム多様性が高い VP1 領域ではプライマ ーのミスマッチによる偽陰性も多く，比較的保存性の高い VP4-VP2 領域で解析する研究所も多い． 普遍的なエンテロウイルス検査法の開発が望まれる． エンテロウイルスの同定は，細胞や乳のみマウスで 分離後に，中和反応によって血清型別が行われてきた． 最近は，分離ウイルスの血清反応と併行して，ウイルス VP1 領域の配列から型別したり，臨床検体から直接抽出 したゲノムの配列からウイルスを同定するようになった．と ころが，血清型と遺伝子型が一致しない株が見出される など，遺伝子検査法の発展により，検査を取り巻く状況は 複雑になっている． 本発表では，手足口病の現状と検査法の課題につい てまとめた． 【方法】 現在，検査実施に最も利用されている手足口病病原 体検査マニュアル(2016 年現在にネット上で得られる最 図 検査マニュアルによるエンテロウイルスの同定手順
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