道衛研所報Rep. Hokkaido Inst Pub. Health, 51, 100-102 (2001) 柴胡の調製法と化学的品質評価乾燥条件と希エタノールエキス及び糖含量の変動 Preparation and Chemical Evaluation of Bupleurum Root Preparation Condition and Variation of Sugar and Dilute Ethanol-soluble Extract Contents 青柳光敏飯田修* 姉帯正樹 Mitsutoshi Aoyagi, Osamu Iida and Masaki Anetai 柴胡はミシマサイコBupleurumfalcatum L.またはその変種(セリ科)の根を基原とする生薬で, 『神農本草経』の上品に収録され,現在でも頻用される漢方の要薬である1). 近年,著者らは,同じセリ科植物を基原とする当帰,浜防風,川弓及び白止で,各々の生根を自然乾燥すると,乾燥に従いショ糖が増加し,それに伴って希エタノールエキス含量も増加することを明らかにしており,両者間には高い正の相関が認められることも報告している2-7)しかし, ミシマサイコには糖アルコールであるアドニトール(図1) が多く含まれている8)が,その一方でショ糖は検出されないという報告があり9),調製法の違いによる希エタノールエキス含量の変動,また,糖の種類やその割合などの関連性についても興味が持たれた. そこでミシマサイコ生根の乾燥条件を種々設定し,希エタノールエキス及び糖含量に与える影響を検討した.その際ショ糖の存在が確認されたので併せて報告する. 方法 1.ミシマサイコの根の採取時期及び乾燥法国立医薬品食品衛生研究所伊豆薬用植物栽培試験場の圃場で育成した根頭径1 cm前後のミシマサイコの根(1年生根)を2000年11月24日, 12月19日, 2001年1月16日及び 2月20日に掘上げた. 11月採取分については以下に述べる A∼Fの6法により,また12∼2月採取分については, A∼Cの3法により調製した(各々約20株使用).なお, 温風乾燥は送風定温恒温器(DK-83,ヤマト科学㈱製) 中, 50℃で72時間行った.低温(2.5±1.5℃)保存は家庭用冷蔵庫(GR-239UG,東芝㈱製)中で行った.調製は国立医薬品食品衛生研究所伊豆薬用植物栽培試験場で行った. 図1 アドニトール 10及び14日間,他は14日間)した後,温風乾燥して仕上げた. C :通気性のあるポリエチレン袋(商品名Ziplocベジタブルバック大,旭化成工業㈱製)に入れ,屋外日陰に放置(2月分は3, 7, 10及び14日間,他は14日間)した後,温風乾燥して仕上げた. D :網袋に入れ,低温保存(7, 14, 21及び28日間)した後,温風乾燥して仕上げた. E :通気性のあるポリエチレン袋に入れ,低温保存(7, 14, 21及び28日間)した後,温風乾燥して仕上げた. F :ビニール袋に入れ,低温保存(7, 14, 21及び28日間)した後,温風乾燥して仕上げた. 2.成分定量法 1)分析用試料の調製温風乾燥後の根を小型粉砕器(TSK-M10,高崎科学器械㈱製)で租粉砕後,高速振動試料粉砕機(TI-200, ㈱シーエムティ科学製)で微粉末とし,分析用試料A∼Fとした. 2)希エタノールエキス第十三改正日本薬局方生薬試験法･希エタノールエキス定量法に従った. 3)糖既報4,6,7)に従いHPLCを用いて分析した. A :直ちに温風乾燥した. B:網袋に入れ,屋外目陰で自然乾燥(2月分は3, 7, *国立医薬品食品衛生研究所伊豆薬用植物栽培試験場機器:日立L-6200型高速液体クロマトグラフ,カラム: AsahipakNH2P-504E (4.6φ ×250mm),移動相:アセトニトリル/水混液(3:1),流速:1.0mL/min,カラム -100- 温度:40℃,検出器:示差屈折計(エルマー社, ERC7522),注入量: 10μL. 3.ショ糖の単離及び同定 1月に調製した試料C (保存袋) 1 gにメタノール10mL を加えた後,超音波処理(50℃, 20分間)した.遠心分離 (3,000rpm, 10分間)後,上清を室温に放置した. 4カ月後,無色菱柱状晶30.6mg (mp179-181℃)を得, NMR及びIRスペクトルの解析を行い,ショ糖と同定した. 結果及び考察成分定量結果を表に示した.第十三改正日本薬局方では, 柴胡の希エタノールエキス含量は11.0%以上と規定されている.今回の試料は全て局方値を上回った.温風乾燥品A については11月が24.4%と最も低かった.一方, 2月が 31.1%と最も高く,収穫時期が遅くなるに従い含量が高くなる傾向にあった.また, 11月, 12月及び1月の試料は, 網袋品Bに比べ,保存袋品Cの含量が高かった. 2月の試料は網袋品Bと保存袋品Cに大きな差は認められなかった. 経時変化(2月)に注目すると,網袋品B及び保存袋品C いずれも10日目まで含量の増加が認められたが, 14日目に若干減少した.低温処理した網袋品D,保存袋品E及びビニール袋品Fはいずれも2週目に含量の低下が認められたが,低温網袋品Dはそれ以降時間と共に含量が増加した. しかし,低温保存袋品E及び低温ビニール袋品Fに一定の表種々の乾燥条件下で調製した柴胡の希エタノールエキス及び糖含量 -101- 傾向は認められなかった.これは2週目以降に発生したカビが影響しているのかもしれない. 次に,糖類を分析したところ2本のピークがクロマトグラム上確認された.各々の保持時間(5.9及び10.3分)はアドニトール及びショ糖の標準品と一致した.これまで, アドニトールはミシマサイコの特徴的成分として知られている8)が,ショ糖は含有されないとされている9).そこで今回の分析用試料中で最も高い希エタノールエキス含量を示した1月保存袋品Cをメタノールで抽出し,抽出液を室温に2カ月間放置したところ結晶が析出した.この結晶は NMR, IRスペクトルからショ糖と同定した. アドニトール含量は2.2∼5.4%と変動が小さかった.しかし,ショ糖含量は3.5∼17.8%と変動が大きく,希エタノールエキス含量の高いものはショ糖含量も高かった.また,希エタノールエキスとショ糖含量の間には正の相関 (r=0.826, n=30)が認められた. 各々の試料の温風乾燥直前における乾燥状態は,屋外乾燥品(11月, 12月及び1月分)の網袋品Bは7日目でほぼ乾燥が終了していたのに対し,保存袋品Cは生もしくは半生状態であった.すなわち,保存袋品Cは乾燥がゆっくり進行したためにショ糖の合成が十分に行われ,希エタノールエキス含量も高くなったと思われた.一方, 2月分は雨唆された. 柴胡の品質評価法については未だ確立しておらず,一般的に用いられている化学的な指標はサイコサポニンと希エタノールエキス含量である.このうち,希エタノールエキス含量についてのみ,日本薬局方で含量が規定されている. 希エタノールエキス含量は調製法により,比較的任意に含量を変えることが可能であることが今回明らかとなった. 含量の安定した生薬を供給するためには,調製法と成分変動の関係並びに成分の質的な変化を明らかにすることが重要であると考える.今後はサポニンなど他の成分についても検討を加えていきたい. 終りにあたり,栽培及び調製にご協力頂きました国立医薬品食品衛生研究所伊豆薬用植物栽培試験場技官栗原孝吾,山田和也両氏に深謝致します.また, NMRを測定して頂きました名城大学薬学部助教授高谷芳明博士に深謝致します. 文献 1)日本薬局方解説書編集委員会編:第十三改正日本薬局方解説書,廣川書店,東京1996, p.D-376 2)姉帯正樹,柴田敏郎,畠山好雄'. Natural Medicines, 51(4), 331 (1997) 天や曇天日が多く,乾燥期間中湿度が高く推移したため, 10日目まで網袋品Bは半生,保存袋品Cは生の状態が続いた結果,時間とともにショ糖が合成され希エタノールエキ 3)姉帯正樹,青柳光敏,林隆章,古屋博之,古木益夫:追衛研所報, 49, 16 (1999) 4)姉帯正樹,青柳光政,林隆章,畠山好雄:道衛研所報, ス含量が増加し,明確な差が認められなかったと思われる. また,低温網袋品Dについても,生に近い状態が保たれたために経時的に含量が増加したと考えられた. 以上のこと及び希エタノールエキスとショ糖含量間に正の相関が認められたことより,ミシマサイコの生根においても当帰など2-7)と同様に自然乾燥中にショ糖が生成し, 5)姉帯正樹,増田隆広,高杉光雄: Natural Medicines, 51 (5), 50, 6 (2000) 442 (1997) 6)姉帯正樹,畠山好雄:道衛研所報, 51, 13 (2001) 7)姉帯正樹,青柳光敏,古木益夫:道衛研所報, 51, 94 (2001) 8)名越規朗,富松利明:生薬, 23, 96 (1969) 9)富松利明:薬学雑誌, 89, 589 (1969) それに伴って希エタノールエキス含量が増加したことが示 -102-