( 3 9 8 ) 奈医誌. 0 .N a r aM e d .A s s . )4 1，3 9 8 4 0 3，平 2 アポリポ蛋白の免疫比濁法による測定と その診断的意義について 奈良県立医科大学中央臨床検査部 中井 忍，出国さよみ 忠 清水良純，波賀義正，間瀬 奈良県立医科大学病態検査学教室 岡本康幸，坂本貞和，辻井啓之，中野 博 STUDIESO NDETERMINATIONOFAPOLIPOPROTEINS BYTURBIDIMETRICIMMUNOASSA Y ANDTHEIRDIAGNOSTICSIGNIFICANCE SHINOBUNAKAI，SAYOMIIDETA， YOSHIZUMISHIMIZU，YOSHIMASAHAGAandTADASHIMASE ， TheD i v i s i o n0 1C四 d r a lC l i n i c a lL a b o r a t o r y ，NaraM e d i c a l U四 i v e r s i t y YASUYUKIOKAMOTO，SADAKAZUSAKAMOTO， HIROYUKITSUJIIandH I R O S H INAKANO D e p a r t m e n t0 1C l i n i c o L a b o r a t o r y D i a g : 即 s t i c s ，NaraM e d i c a lU n i v e r s i t y R e c e i v e dS e p t e m b e r2 0，1 9 9 0 Summa ηSerum l e v e l so fa p o l i p o p r o t e i n s were d e t e r m i n e di n3 8 6o u t p a t i e n t s w i t h o u to b v i o u sm e t a b o l i cd i s o r d e rbyt u r b i d i m e t r i cimmunoassay.Bys t u d i e sonl i n e a r i t y， r e p e a t a b i l i t y ， r e p r o d u c i b i l i t yandi n t e r f e r e n c e， t h i sa s s a ywasc o n f i r m e dt ob ea p p l i c a b l ef o r r o u t i n el a b o r a t o r yt e s t s .C l i n i c a lr e f e r e n c er a n g e si nseruml e v e l so fa p o l i p o p r o t e i n( a p o ) I I，B，C I I，C I I I，andEwere9 2 .5 6 1 7 3 .7 9，2 2 .1 1 4 0 .3 4，5 2 .5 3 1 1 0 .3 7，1 .3 9 5 .4 4， A -1，A 4 .2 7 1 2 .9 4and2 .8 7 6 .3 8m g / d l，r e s p e c t i v e l y .A l s o，c o m p a r a t i v es t u d i e sonskewnessand c o e f f i c i e n to fv a r i a t i o ni nd i s t r i b u t i o no fv a l u e swered o n ew i t hapoA 1andh i g h d e n s i t y o w d e n s i t yl i p o p r o t e i n(LDL)c h o l e s t e r o . 1 l i p o p r o t e i n(HDL)c h o l e s t e r o l，andapoB andl Thef i n d i n g ss u g g e s t e dt h a tl e v e l so fa p o l i p o p r o t e i n ss u c ha sA -1 andB a r er e l a t e dt o 1enumbers o fl i p o p r o t e i n ss u c ha s HDL and LDL，w h i l ec h o l e s t e r o lc o n t e n ti n p a r t ic 1 e sa swel. 1I nc o r o n a r yh e a r t l i p o p r o t e i n si sa f f e c t e dby q u a l i t a t i v ec h a n g e si np a r t ic -1r a t i o sweres i g n i f i c a n t 1 ye l e v a t e danda r es u g g e s t e dt ob e d i s e a s e s，apoBandapoB/A s e n s i t i v ei n d i c a t o r sf o rt h e s ed i s e a s e s . 聞 IndexTerms ，t u r b i d i m e t r i cimmunoassay ，c 1i n i c a lr e f e r e n c er a n g e， l i p o p r o t e i n ，coronary a p o l i p o p r o t e i n h e a r td i s e a s e ( 3 9 9 ) アポリポ蛋白の免疫比濁法による測定とその診断的意義について は，正常血糖で乳び血清あるいは TGが 4 0 0m g !d l以上 緒 言 アポリポ蛋白(アポ蛋白〉は， でないものとした. リポ蛋白を構成する蛋 白部分であるが，同時にリポ蛋白受容体との結合を介し た細胞内への脂質の取り込みやリポ蛋白リパーゼや L e c i t h i nc h o l e s t e r o la c y l t r a n s f e r a s eなどリポ蛋白代謝 また別に f r 巴s hな冠動脈疾患〔以下 CHDと略す) 7名 (すべて男性で，平均年齢 5 4才〉について検討した. 2 . 方法 I I，B，C I I，CI I I，Eは免疫比濁法 アポ蛋白 A 1，A 田 目 に重要な役割を演じる酵素の活性化に関与するなど多く (第一化学薬品製キット，アポオート「第一」使用)，血 の機能を有している 1) したがって，総コレステローノレ 清脂質は酵素法，また HDL-Chはリンタングステ γ 酸 (TCh)， トリグリセリド (TG)，高比重リボ蛋白コレス Mg++法による沈殿法にて測定し，低比重リポ蛋白コレ テローノレ (HDL-Ch) などの今日一般に行なわれている ステローノレ (LDL-Ch) は換算式を用いて計算した 3). な 脂質検査に加えてアポ蛋白の変動をみることは，脂質代 お測定は自動分析機日立 7 1 5 0にて行なった.臨床参考範 謝異常の病態を解析するうえで有用であると考えられる. 囲 (CRR) は既報により，度数分布計算による反復切断 アポ蛋白の測定系には一元免疫拡散法 (SRID法)，ロ ケット免疫電気泳動法〔ロケット法)，放射免疫測定法 (RIA法)，酵素免疫測定法 (EIA法)，免疫比濁法など各 補正法にて算出した 4). 成績はすべて平均士標準偏差で表現し，平均値の差の t u d e n tの t t e s tにて行なった. 検定は S 種の方法が応用されている 2). 今回我々は，自動分析機に 成 応用が可能な免疫比濁法によりアポ蛋白を測定し，基礎 的検討を行ない，また冠動脈疾患におけるその診断的意 績 1.免疫比濁法によるアポ蛋白測定の基礎的検討 a) 直線性 義についても検討した. アポ A-12 4 0m g !d l，アポ A-II7 3 . 0 m g ! d l，アポ B 対象および方法 I9 . 0m g !d l，アポ C I I I5 0 . 0m g ! d l， 2 1 5m g !d l，アポ C-I アポ E 8 . 0m g ! d lまで良好な直線性が得られた ( F i g .1 ) . 1.対象 本院各科外来を受診した 20-60才の男女あわせて 3 8 6名〔男 1 7 6名，女 2 1 0名〕を対象とした. これらの例 b) 同時再現性 3種の血清についてそれぞれ 2 0回測定を行ない，変動 2 0 C ト - ， / イ1 ' " ト . / ・ 0 / / / 。 ωJ ロl.~/" 0 9 0 "a J Z O-A 。 o ， . ， UIO ロ ， 阿 ， ， C一 個 a阿 F i g .1 .L in e a r i t i巴si nd e t 巴r m i n a t i o no fa p o l i p o p r o t e i nA 1，A I I，B，C I I，C I I IandE . 同 忍 〔 他 8名 〉 中 井 ( 4 0 0 ) 係 数 (CV) を求めた.各 CVはアポ A-10.88-1 .7 3 られなかった.アポ Bでは， 2 0才代の男性値よりも 3 0才 %，アポ A-II0.95-2.94%，アポ B 1 .25-2.80%，ア 0才代のアポ Bは男女と 代の男性値の方が高値となり， 5 I1.66-8.83%，アポ C-1 I I1.86-9.06%，アポ ポ C-I 0才代よりも高値となった.アポ C-IIでは 3 0才代の も4 E1 .20-11.09%で、あっ T こ. i E lL，アポ C-I I， CI I I， 0才代の男性値よりも有意に高値を示し， 4 0 男性値が 2 Eにおいて CVが 5 %を超えていたのはそれぞれ mean 才代の女性値よりも 5 0才代の女性値の方が有意に高値 =0.83，2.03，0.93mg/dlの低い濃度を示した血清で，中 0才以上の例で男性に比べ女性の方が となった.また、 3 ・高濃度にあった他の血清ではすべで CVが 5 %以下と I I Iにおいては， 5 0才代で男 有意に低値を示した.アポ C 良好な結果が得られた. 0才代よりも高値となった.アポ Eは ， 3 0才代の 女とも 4 c) 日差再現性 0才代の男性値よりも高値となり，かつ 5 0才 男性値が 2 3種類の血清を用いて 1 0日間の日差再現性を検討し 0才代よりも有意に高値となった.また 4 0才代の 代は 4 I I I，Eにおいて m巴an=3.090m g たところ，一部(アポ C 0才代よりも高値を示した. 女性値が 3 Tabl巴 2は対象例のうち TCh2 2 0mg/d l以下，かっ /d ， l 1.220mg/d l、 で CVニ 1 2 . 5 3% ， 1 0 . 0 8%であったも TG1 5 0mg/dl以下の条件に合致する例でのアポ蛋白の の〉を除いて CVが 5 %以下であった. d) 共存物質の影響 CRR，および正規分布型における歪度を示している. び 各アポ蛋白においてピリノレピン，ヘモグロビン，明L HDLの主要な構成蛋白であるアポ A-1，および LDL の影響についてそれぞれを添加し測定を行なったところ， の主要な構成蛋白であるアポ Bの分布型は査度の比較で アポ C I I Iを除いてピリノレピン 4 0mg/d l，ヘモグロピン みると同一例の HDL-Chや LDL-Chに比べ正規分布へ 5 5 0m g / d l，乳び 2 . 0%までほとんど影響はみられなかっ の適合度は良好であった.また変動係数も， HDL-Ch I I Iはピリノレビン 2 0m g /d lで約 1 8%の正誤差， た. アポ C 6 . 7 28.3%，LDL-Ch29.5%であるのに対し，アポ A-11 5 0m g /d lで 、 約1 6%の正誤差，乳び 2 . 0% ヘモグロビン 5 %，アポ B 1 8 . 5%といずれもアポ蛋白のほうが良好であ で約 8 %の正誤差となった. った. 2 . 各アポ蛋白の年齢別，性別変動と CRRの設定 Table1に年齢別，性別におけるアポ蛋白値の変動を 3 . リポ蛋白中コレステローノレと主要な構成アポ蛋白と の関係 HDLの主要な構成蛋白であるアポ A-1と HDL-Ch， 0才代と 4 0才代の例で女性が有意 示した.アポ A-Iは 2 に高値を示した.アポ A-IIについてはあきらかな差はみ LDLの主要な構成蛋白であるアポ B と LDL-Chの関係 Table1 . Seruml e v e l so fa p o l i p o p r o t 巴i nA-1，A-II，B，C I I，C I I I，andE Age 2 0 2 9 3 0 3 9 4 0 4 9 5 0 6 0 Age 2 0 2 9 3 0 3 9 4 0 4 9 5 0 6 0 Sex Male Female Male Female Male Female Male Female Sex Male Female Male F巴male Male Female 乱 i [a l e Female CaseNo 2 9 3 2 2 3 2 3 5 4 8 2 7 0 7 3 ) A-1 ( m g /dl 5 . 5 5 1 2 4.4土 2 4 . 7 3 * 1 3 8 . 9士2 3 . 3 2 1 2 6 . 3土2 7 . 6 5 1 3 9 . 2土2 .2 : : 1 =2 8 . 1 0 1 21 3 . 5 2 * 1 3 5 . 6土2 : 1 =2 7 . 2 6 1 2 8 . 5: 1 .6 6 1 3 5 . 7土2 AI I( m g /dl ) 3 2 . 6土51 7 3 0.4士 6 . 0 0 3 3.4士 5 . 6 2 3 2 . 5土7 . 0 6 3 1 .8 士6 . 8 6 3 2 . 0土5 . 4 2 . 1 5 3 2 . 7士8 3 3 . 2土6 . 7 3 7 6 . 2土2 5 . 7 6 8 4 . 7土2 0 . 2 3 9 8 . 0士2 8 . 7 6 8 4 .l : t2 2 . 1 9 .1 2 9 2 . 2土21 91 .5 土2 2 . 9 7 1 0 4 . 0士2 9 . 5 7 1 0 4 . 5土2 4 . 3 1 目 ) C -I I( m g /dl C -I I I( m g /dl ) E( 昭/d l ) 3 . 0 9土1.3 5 8 . 1 0 3 3 . 0 9士1 4 . 2 8土1.7 2 2 : 1 = 1 .3 1 0 3 . 1 6: 4 . 2 0士1.7 5 3 8 4* 3 . 5 4土1.4 4 . 7 6土2 . 1 2 2 1 4* 4 . 0 3士1.3 8 . 7 3士5 . 1 5 0 1 00 2土6 . 2 1 9 1 2 . 2 4土7 . 4 4 9 9 . 5 7士5 . 8 7 1 1 0 . 2 5土4 . 8 6 4 9 . 8 9士4 . 3 9 2 1 3 . 24 : : 1 =7 . 2 2 1 . 9 3 8ホ 1 0 . 5 8土3 4 . 3 6土1.4 1 1 : 1 = 1 .7 1 5 5 . 0 6: 5 . 3 0土1 . 9 1 6 9 3 4 . 6 9士1.1 5 . 0 5土1.2 9 9 5 . 5 0士1.5 6 8 6 . 1 1: : 1 =2 . 3 2 7 5 . 6 9土13 9 6 本 目 Dataa r ee x p r e s s e da smean土S D . p<0 . 0 5comparedw i t hmaled a t ao fsamea g e g r o u p . p<0.05，p<O.Olcomparedw i t ht h ep r e c e d i n gd e c a d e ' sd a t aw i t hsames e x 車 B( m g / dl ) 目 目 ( 4 0 1 ) アポリポ蛋白の免疫比濁法による測定とその診断的意義について Table2 .C l i n i c a lr 巴f e r e n c erange(CRR)andskewn 巴s sf o rnormald i s t r i ipoprot巴inA 1，A I I，B，C I I，C -I l ， HDL-Chand b u t i o no fapo! 五2 2 0m g /d l LDL-Chl e v e l si nc a s e swithseruml e v e l so fTCh三 andTG=150m g / d l( C a s enumber=186) 悶 AI I( m g /dl ) ) A-1 ( m g /dl CRR S k e w n e s s 四 B( m g / dl ) 9 2.56~ 1 7 3 . 7 9 0 . 0 5 5 0. 3 4 2 2. 1 1~ 4 0 . 0 5 5 C -I I( m g /dl ) CI I I( m g /dl ) E( m g / dl ) 4.27~12.94 2.87~6.38 0 . 1 4 5 回 1 .39~5. 4 4 CRR S k e w n e s s 52.53~110.37 0 . 2 0 7 0 . 1 4 5 0 . 2 8 6 HDL-Ch ( m g /dl ) ) LDL.Ch( m g /dl 34.6~86.4 68.9~146.0 CRR Skewn 巴S8 0 . 3 9 1 0 . 3 9 5 A b b r e v i a t i o n su s e da r ed e s c r i b e di nt h et e xt . 130 日 120 (一一︼¥切冨) 5 0 1 J口巨 110 ロロ 100 9日 ロ 80 70 口 口 60 50 40 30 20 ロ 10 40 80 120 160 240 200 a p oA -1 ( m g / d l ) 3 5 日 ロ 300 ロ (一旬、¥回g ) 4 0 1 4口、] ロ 250 日 口 口 200 1 5 0 100 50 B 20 口 口 口 60 100 140 180 2 2 0 a p oB( m g / d l ) F i g .2 .R e l a t i o n s h i p sb巴tw 巴巴na p o l i p o p r o t e i nA-1 andHDL-Ch， anda p o l i p o p r o t e i nB andLDL-Ch ( 4 0 2 ) 忍 ( 他 8名 〉 中 井 Table3 .L i p o p r o t 巴i np r o f i l ， ei np a t i e n t s with f r e s h coronary h巴a r t d i s e a s e s(CHD) C o n t r o l( n=1 8 6 ) ) CHD(n=7 TCh ( m g / dl ) HDL.Ch( m g /dl ) LDL.Ch( m g /dl ) a p oA.1 ( m g /dJ ) a p oB C m g /dJ ) HDL.Ch/A .1r a t i o LDL.Ch/Br a t i o B/A -1r a t i o 2 0 9 . 1土3 1 .3 9 2 4 2 . 3 3士7 . 6 5 9 1 2 6 . 7土2 45 0 1 1 2 5 . 9士2 9 . 8 0 8 1 1 5 . 3土 2 1 .5 2 8* 本 0 . 3 3 6土0 . 0 5 4. キ 11 6 6土 0 . 1 9 8 0 . 9 3士0 . 1 6 4ヰ キ ， ， 1 2 8 . 3土 2 1 .7 4 4 . 3 2 7 8，5士1 0 . 4 4 5土 0 . 0 5 3 1 .2 9 4土 0 . 1 5 5 0 . 6 3土 0 . 1 5 6 事 Dataa r ee x p r e s s e da smean土S D . *p<0 . 0 5，**p<0 . 0 1 comparedw i t hc o n t r o l V a l u e so fTCh，HDL.Cha n dLDL.Cha r eshowni nT a b l巴 2， A b b r e v i a t i o n su s e da r ed e s c r i b e di nt h et e xt . をF i g .2に示す.いずれも，良好な正の相関を示した と考えられるのに対して， リポ蛋白中の主要なアポ蛋白 が，各アポ蛋白に対するコレステローノレ値には上限が存 は各リポ蛋白の量的な変動〔粒子数〉をよく反映すると 在することが示唆される分布となった. 考えられる(例えば LDL 1粒子当たり l分子のアポ B 4 . CHD例におけるアポ蛋白の変動 がついていることが知られている 6 ) ) . よって，各アポ蛋 Table3は ， CHD例における脂質およびアポ蛋白値を 白の変動は，それぞれのリポ蛋自の量的な変動を表現す 示している.参考値に比べ，アポ A-1はほぼ正常であっ るものとしては脂質検査より優っているものと考えられ たが， HDL.Chは低値をとる傾向にあった一方， LDL- る.また， Chは高値とは言えない例も多く含まれており，全体とし 変動および質的変化の総和を表現じており，また，それ リポ蛋白中コレステローノレはリポ蛋白の量的 て有意な変化はなかったが，アポ Bはいずれの例でも高 らの比率はリポ蛋白の質的変化の一部を表現し得ると推 く参考値に対しでも明らかな高値を示した.そのためア 察された.さらに，アポ A-1と HDL.Ch，アポ B と ポ B/A-I比は高値を示した.また HDL.Ch/アポ A-1 LDレChの相関図から，各アポ蛋白に対するコレステロ 比は有意な低値を示し， LDL.Ch/アポ B比も低値を示し ーノレ値には上限が存在することが示唆される分布となっ ており，各アポ蛋自に対応するコレステローノレ濃度には た. 飽和量が存在するのではないかと考えられる.したがっ 考 案 て ， アポ蛋白とリポ蛋白中コレステローノレの比をとるこ 自動分析装置を用いての免疫比濁法によるアポ蛋白測 とによって各リポ蛋白の構造上の変化が推測できるかも 定は直線性，同時再現性， 日差再現性，共存物質の影響 しれない.最近我々は， HDL.Ch/アポ A-1比が HDLの の検討成績からみて， 日常のノレーチン検査に充分適応可 亜分画の変動と関連が深いという成績を得ている(臨床 能であると考えられた.また，アポ蛋白測定値の性差は 病理 i np r e s s ) . A-1および C-IIで軽度認められ， A-1では女性が，ま CHDでは， TChや LDL.Chが 高 値 を と る 傾 向 や た C-IIでは男性が高値を示す傾向がみられた.加令によ HDL-Chの低値傾向が認められたが，より明瞭な変化は る影響は B，C-IIおよび Eで年齢とともに次第に増加す アポ B~こ認められており，その結果アポ B/ A -1比は高 る傾向がみられた.今回求められた各アポ蛋白の CRR ， LDL-Ch/アポ B比は 値を示し， HDL.Ch/アポ A-1比 は，今までに報告されているものとほぼ一致した成績を それぞれ低下していた.これは，木疾患の危険因子の評 示している 5) 価にアポ Bの値や B!A-1比がより有用であることを示 ところで，今日一般的には， HDLや LDLなどのリポ 唆する所見と考えられる.また， LDL-アポ Bの増加に対 リポ蛋白中のコレステローノレである して， LDL.Chが正常な場合があり， CHDとの関連の深 HDL.Chや LDL-Chの変動により検討されている.しか いことが紹介されているが'l，このことも我々の成績を し，アポ A-1と HDL.Ch ，アポ Bと LDL.Chの歪度およ 支持するものと考えられる. 蛋白の変動は， び変動係数の比較から見てもわかるように， リポ蛋白中 コレステローノレは比較的多くの変動因子の影響を受ける アポリポ蛋白の免疫比濁法による測定とその診断的意義について 結 語 ( 4 0 3 ) 態.代謝 2 2:6 4 7 6 5 6，1 9 8 5 . 2 ) 古賀俊逸:アポ蛋白の免疫学的測定法.臨床検査 2 8:1 6 7 6 1 6 8 0， 1 9 8 4 . 以上の成績から 1.自動分析機での免疫比濁法によるアポ蛋白測定は日 3 ) Friedewald，W.T .，Levy，R .1 . andF r e d r i c k s o n， 常ルーチン検査に適応可能と思われた D .S . :E s t i m a t i o no ft h ec o n c e n t r a t i o no flow 2 . アポ蛋白測定値の性差は A-， I C-IIで軽度認めら d e n s i t yl i p o p r o t e i nc h o l e s t e r o li nplasma，w i t h o u t れ ， B， C-II， Eで加令による増加傾向が認められた u s eo ft h 巴 p r e p a r a t i v eu l t r a c e n t r i f u g e 3 . 各リポ蛋白の量的な変動を表現するものとしては Ch 巴m .1 8 :4 9 9 5 0 2，1 9 7 2 . 目 目 C l i n . 変動因子の多いリポ蛋白中コレステローノレよりも各リポ 4 ) 岡本康幸，中野博，波賀義正，清水良純，河本弘 蛋白を構成する主要なアポ蛋白の変動の方が優っている 美.生化学検査データの臨床参考範囲 (CRR)設定 と考えられた. 0:2 9 3 3 0 0， 1 9 8 9 . に関する検討.奈良医学雑誌 4 4 . リポ蛋白中コレステローノレはリポ蛋白の量的変動お 5 ) 野間昭夫，五島雄一郎，秦 蔑哉.免疫比濁法によ よび質的変化の総和を表現すると考えられた. るアポ蛋白 A-I， A-II， B， C -II， C I I I， Eの 5 . 主要なアポ蛋白とリポ蛋白中コレステローノレとの比 正常値の検討.動脈硬化 1 6:8 3 2，1 9 8 8 . 率は， リポ蛋白の質的変化の一部を表現すると推察され 6 ) Schaefer，E .J .，Eisenberg，S . andLevy，R .I . た L i p o p r o t e i na p o l i p o p r o t e i nm e t a b o l i s m .] .L i p i d 6 . CHDの危険因子の評価にアポ Bや B/A-I比の有 R e s .1 9 :6 6 7 6 8 7，1 9 7 8 . 用 性 が 示 唆 さ れ た 7 ) Sniderman，A.，Shapiro，S .，Marpole，D .，S k i n - 文 献 1)山本章，山村卓，横山信治:アポ蛋白異常と病 ner，B . ， Teng，B . andKwiterorich，P .O .J r . P r o c . Na t . l Acad. S c i . USA7 7・6 0 4 6 0 8，1 9 8 0 .
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