高度生殖医療技術研究所（ARMT）2004/08/17 塩化ストロンチウムによるマウス卵活性化の手技 試薬一覧 試薬名 型式 メーカー 塩化ストロンチウム・６水和物 37340-30 関東化学 TYH（Ca-free） Mineral Oil ※使用する培養液はカルシウムが含まれていなければ、何でも構わないと思うが、ここでは TYH を使 用しました。 参考：TYH（Ca-free）の組成 100ｍL 中 試薬名 塩化ナトリウム NaCl 0.6976 g 塩化カリウム KCl 0.0356 g リン酸二水素カリウム KH2PO4 0.0162 g 硫酸マグネシウム Mg SO4 0.0143 g 炭酸水素ナトリウム NaHCO3 0.2106 g ピルビン酸ナトリウム Na-pyruvate 0.0055 g グルコース Glucose 0.1000 g 硫酸ストレプトマイシン Streptomycin SO4 0.0050 g ペニシリン G カリウム Penichillin G potassiumu 0.0060 g フェノールレッド Phenol red 0.0100 mL （BSA） （Bovine albumin） BSA は実施前日に必要量計量して、調整する。 試薬準備 １）TYH（Ca-free） （5ｍL） ２）10 倍濃度の塩化ストロンチウムストック溶液（10ｍL） 塩化ストロンチウム 0.267g 純水 10ｍL 100ｍM ３）培養用培地 HFF99 4.5mL SSS 合成血清 0.5mL 10% 1 （0.4000） g 高度生殖医療技術研究所（ARMT）2004/08/17 活性化方法 ① 実施当日（活性化数時間前） 、TYH（Ca-free）に BSA を溶解し、0.2μm フィルターでろ過滅菌後、 9ｍL に塩化ストロンチウムストック溶液 1ｍL を加え、塩化ストロンチウム最終濃度を 10ｍM に 調製。 ② 上記活性化培地と通常の培地でドロップを作製し、オイルを被せて、CO２インキュベーターにてガ ス平衡しておく。 ③ 卵を活性化培地で良く洗浄後、別の活性化培地に移し、１時間 CO２インキュベーターにて、活性 化処理。 ④ 卵を活性化培地から取り出し、培養用の培地で良く洗浄後、別の培養培地に移し、CO２インキュベ ーターにて、追加培養。 ⑤ 6∼9 時間後には第 2 極体及び前核が観察できる。 CO２インキュベーターにて、 活性化処理 1 時間 洗浄 洗浄 培養用培地 100μL drop 活性化培地 100μL drop CO２インキュベーターにて、 追加培養 2
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