Chlamydia pneumoniae-IgM-sELISA medac Ελληνικά 0123 432-TMB-VPG/010512 ΚΑΤAΣΚΕΥΑΣΤΗΣ medac Gesellschaft für klinische Spezialpräparate mbH Fehlandtstraße 3 D-20354 Hamburg MAΡΚΕΤΙΝΓΚ medac Gesellschaft für klinische Spezialpräparate mbH Geschäftseinheit Diagnostika Theaterstraße 6 D-22880 Wedel Τηλέφωνο: Φαξ: ++49/ 4103 / 8006 - 348 ++49/ 4103 / 8006 - 359 ΔΙΕΥΘΥΝΣΗ ΠΑΡΑΓΓΕΛΙΩΝ Τηλέφωνο: Φαξ: ++49/ 4103 / 8006 - 111 ++49/ 4103 / 8006 – 113 432-TMB-VPG/010512 Chlamydia pneumoniae-IgM-sELISA medac Ενζυμικός ανοσοπροσδιορισμός για την ανίχνευση των αντισωμάτων IgM των χλαμυδίων πνευμονίας Cat. no.: 432-TMB ΜΟΝΟ ΓΙΑ IN VITRO ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗ ΧΡΗΣΗ ΕΙΣΑΓΩΓΗ Τα χλαμύδια είναι gram-αρνητικά παθογόνα βακτήρια. Έχουν έναν υποχρεωτικά ενδοκυττάριο κύκλο ζωής σε βλεννογόνες επιφάνειες, ενδοθηλιακά κύτταρα, λείες μυϊκές ίνες και, σύμφωνα με πρόσφατα ευρήματα σε ορισμένες ιστικές δομές του κεντρικού νευρικού συστήματος. Τα χλαμύδια εξαρτώνται από φωσφαγώνα των κυττάρων του ξενιστή και αποτελούν ως εκ τούτου ενεργειακά παράσιτα. Το γένος των χλαμυδίων περιλαμβάνει τέσσερα είδη: C. trachomatis, C. psittaci, και C. pecorum. Το C. trachomatis είναι υποχρεωτικά παθογόνα για C. psittaci είναι παθογόνο για τον άνθρωπο και για Μέχρι σήμερα, το C. pecorum έχει απομονωθεί μόνο από Τα C. pneumoniae, C. pneumoniae και τον άνθρωπο. Το διάφορα είδη ζώων. ζώα. Οι λοιμώξεις από Chlamydia pneumoniae εμφανίζονται παγκοσμίως. Το φάσμα των ασθενειών, επιπλέον της γρίπης, περιλαμβάνει την ιγμορίτιδα, τη φαρυγγίτιδα, τη βρογχίτιδα, τη χρόνια αποφρακτική πνευμονία και την αντιδραστική αρθρίτιδα. Η αιτιολογική συσχέτιση με το άσθμα λοιμωδών καταστάσεων, τη σαρκοείδωση, τον καρκίνο του πνεύμονα, την αρτηριοσκλήρυνση, το οξύ έμφραγμα του μυοκαρδίου, το εγκεφαλικό επεισόδιο, τη σκλήρυνση κατά πλάκας, και την όψιμη εμφάνιση νόσου του Alzheimer έχει συζητηθεί. Σύμφωνα με τους Grayston και Saikku (1989), που πρώτοι περιέγραψαν τα είδη χλαμυδίων, σχεδόν κάθε άνθρωπος μολύνεται και ξαναμολύνεται από τα χλαμύδια κατά τη διάρκεια της ζωής του. Τα τις περισσότερες φορές ασθενή και/ή διάχυτα συμπτώματα που συνοδεύουν τη λοίμωξη από C. pneumoniae καθιστούν την ανίχνευσή τους δύσκολη. Μη ανιχνεύσιμες μολύνσεις μπορούν να οδηγήσουν σε χρόνια εξέλιξη της ασθένειας με δυσάρεστες συνέπειες. Η διάγνωση της λοίμωξης από C. pneumoniae βασίζεται στην απομόνωση των παθογόνων από κυτταρικές καλλιέργειες, άμεση ανίχνευση του αντιγόνου, τεστ πολλαπλασιασμού νουκλεϊκών οξέων και σερολογία. Απομόνωση των παθογόνων από κυτταρική καλλιέργεια απαιτεί τις περισσότερες φορές 432-TMB-VPG/010512 1 ειδικές άδειες, είναι χρονοβόρα, απαιτεί ειδικά εργαστήρια και είναι μόνο σε μερικές περιπτώσεις επιτυχής. Η άμεση μέθοδος ανοσοφθορισμού και ο ενζυμικός ανοσοπροσδιορισμός δεν έχουν ευρεία χρήση. Έχει αναφερθεί ότι έχουν χαμηλή ευαισθησία και ειδικότητα. Για την ανίχνευση αντισωμάτων για ειδικά είδη ο μικροανοσοφθορισμός θεωρείται η μέθοδος αναφοράς. Η μέθοδος του μικροανοσοφθορισμού είναι επίπονη, υποκειμενική και απαιτεί εμπειρία. Το τεστ αυτό δεν είναι τυποποιημένο. Η χρήση διαφορετικών αντιγόνων και διαφορετικών ορίων για παλιές, πρόσφατες ή τρέχουσες μολύνσεις έχουν ως αποτέλεσμα μεγάλες διαφορές στα αποτελέσματα μεταξύ εργαστηρίων. Το κιτ Chlamydia pneumoniae-sELISA medac χρησιμοποιεί καλά καθαρισμένο και ειδικό αντιγόνο. Η ανίχνευση των αντισωμάτων IgM, IgA και IgG επιτρέπει την αξιολόγηση της κατάστασης της λοίμωξης και βοηθάει στην επιλογή κατάλληλης θεραπευτικής αγωγής. Το κιτ Chlamydia pneumoniae-sELISA medac καλύπτει τις ανάγκες για τυποποίηση, αντικειμενικότητα, επαναληψιμότητα και αυτοματοποίηση των εργαστηρίων ρουτίνας. 432-TMB-VPG/010512 2 ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ Η πλάκα είναι επικαλυμμένη με ειδικά καθαρισμένο αντιγόνο για τα C. pneumoniae. Τα ειδικά αντισώματα για C. pneumoniae του δείγματος συνδέονται στο αντιγόνο. Η συζευγμένη υπεροξειδάση των αντιανθρώπινων IgM αντισωμάτων συνδέεται στα αντισώματα IgM (P = υπεροξειδάση). Επώαση με TMB (*). Η αντίδραση σταματάει με την προσθήκη θειϊκού οξέος. Η απορρόφηση μετριέται φωτομετρικά. Πλεονεκτήματα της εξέτασης Υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα. Τα αποχωριζόμενα strips επιτρέπουν την αποτελεσματική χρήση της εξέτασης. 432-TMB-VPG/010512 3 ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΑ ΤΟΥ ΚΙΤ Cat. no.: 432-TMB 1. MTP Μικροπλάκα: 12 x 8 πηγαδάκια, (τυπωμένο με CPM, με πλαίσιο και αποξηραντικό, αεροστεγώς συσκευασμένα σε σακούλα αλουμινίου), διασπώμενα, φόρμα-U, καλυμμένα με ειδικό αντιγόνο για C. pneumoniae και FCS, έτοιμα για χρήση. 2. CONTROL Αρνητικός μάρτυρας: 1 φιαλίδιo 1,5 ml, ανθρώπινος ορός, έτοιμος για χρήση, χρωματισμένος κυανός που περιέχει NBCS, φαινόλη, ProClinTM 300 και gentamycin sulfate. 3. CONTROL + Θετικός μάρτυρας: 1 φιαλίδιo 1,5 ml, ανθρώπινος ορός, έτοιμος για χρήση, χρωματισμένος κυανός που περιέχει BSA, φαινόλη, ProClinTM 300 και gentamycin sulfate. 4. WB Ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης: 1 φιαλίδιο με 100 ml PBS/Tween (10x), pH 7,2 - 7,4, περιέχει ProClinTM 300. 5. BAC-DIL Διαλύμα αραίωσης: 1 φιαλίδιο με 110 ml PBS/Tween/NBCS, pH 7,0 7,2, έτοιμο για χρήση, χρωματισμένο κυανό, περιέχει ProClinTM 300. 6. CON Σύμπλοκο: 4 φιαλίδια με 4,5 ml έκαστο, αντι-ανθρώπινα IgM κατσίκας, HRP-συζευγμένα, έτοιμο για χρήση, χρωματισμένο ερυθρό, περιέχει BSA, φαινόλη, ProClinTM 300 και gentamycin sulfate. 7. TMB TMB-Υπόστρωμα: 1 φιαλίδιο με 10 ml, έτοιμο για χρήση. 8. STOP Διάλυμα τερματισμού: 2 φιαλίδια με 11 ml έκαστο, 0,5 M sulfuric acid (H2SO4), έτοιμο για χρήση. 9. RF-ABS IgG/Rf- Δεσμευτικό: 1 φιαλίδιo με 4 ml, αντι-ανθρώπινο ΙgG αντίσωμα κατσίκας, έτοιμο για χρήση, περιέχει 0,1 % sodium azide. 432-TMB-VPG/010512 4 1. ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ ΥΛΙΚΟ/ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΟ Κιτ εξέτασης ΚΑΤΑΣΤΑΣΗ κλειστό ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ 2...8 °C Μικροπλάκα ανοιγμένο Μάρτυρες Ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης Διαλύτης δείγματος Σύμπλοκο TMB-Υπόστρωμα Διάλυμα τερματισμού ανοιγμένο αραιωμένο 2...8 °C σε σακούλα με αποξηραντικό 2...8 °C 2...8 °C ανοιγμένο ανοιγμένο ανοιγμένο ανοιγμένο 2...8 2...8 2...8 2...8 IgG/Rf- Δεσμευτικό ανοιγμένο 2...8 °C °C °C °C °C ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ Μέχρι την ημερομηνία λήξης 12 εβδομάδες 12 εβδομάδες 12 εβδομάδες 12 εβδομάδες 12 εβδομάδες 12 εβδομάδες Μέχρι την ημερομηνία λήξης 12 εβδομάδες Μη χρησιμοποιείτε τα αντιδραστήρια μετά την ημερομηνία λήξης. 2. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΑΙ ΥΛΙΚΑ ΠΟΥ ΧΡΕΙΑΖΟΝΤΑΙ ΑΛΛΑ ΔΕ ΧΟΡΗΓΟΥΝΤΑΙ 2.1. Ύδωρ για ένεση (H2O redist.). Η χρήση απιονισμένου ύδατος μπορεί να παρεμποδίσει τη διαδικασία της εξέτασης. 2.2. Μικροπιπέτες ρυθμιζόμενου όγκου. 2.3. Καθαροί γυάλινοι ή πλαστικοί περιέκτες για ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης και του δείγματος. αραίωση του 2.4. Κατάλληλη συσκευή για πλύση μικροπλάκας (π.χ., ELISA washer). 2.5. Επωαστήρας για 37 °C. 2.6. Συσκευή ανάγνωσης 620 - 650 nm. 3. μικροπλάκας με φίλτρα για 450 nm and ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Πριν την έναρξη της διαδικασίας της εξέτασης, όλα τα περιεχόμενα του κιτ θα πρέπει να έλθουν σε θερμοκρασία δωματίου (RT). Υπολογίστε τα πηγαδάκια που χρειάζονται. 3.1. Μικροπλάκα Μετά από κάθε αφαίρεση strips η σακούλα αλουμινίου θα πρέπει να σφραγιστεί και πάλι σφιχτά μαζί με το αποξηραντικό. Η φύλαξη και η σταθερότητα υποδεικνύονται στον στο κεφάλαιο 1. 432-TMB-VPG/010512 5 3.2. Ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης Αναμίξτε ένα μέρος ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης (10x) με εννιά μέρη ύδατος για ένεση(π.χ., 50 ml ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης (10x) με 450 ml ύδατος). 10 ml αραιωμένου ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης χρειάζονται για οκτώ πηγαδάκια. Οι κρύσταλλοι στο ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης (10x) πρέπει διαλυθούν με θέρμανση (μέγιστο 37 °C) ή/και ανακάτεμα θερμοκρασία δωματίου. να σε Μην αναμιγνύετε τα ειδικά αντιδραστήρια της εξέτασης (μικροπλάκα, μάρτυρες, σύμπλοκο) με αντίστοιχα αντιδραστήρια διαφορετικών παρτίδων. Αντιθέτως, διαλύτης δείγματος, ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης, ΤΜΒΥπόστρωμα, IgG/RF-Δεσμευτικό και διάλυμα τερματισμού μπορούν να χρησιμοποιηθούν αδιακρίτως σε όλα τα κιτ προσδιορισμού χλαμυδίων και μυκοπλάσματος με τη μέθοδο elisa. Δεν πρέπει κατασκευαστών. να χρησιμοποιούνται αντιδραστήρια διαφορετικών Έγκυρα και επαναλήψιμα αποτελέσματα λαμβάνονται μόνο αν ακολουθηθεί με ακρίβεια η διαδικασία της εξέτασης. 4. ΔΕΙΓΜΑ 4.1. Η εξέταση είναι κατάλληλη για δείγματα ορού αλλά όχι για πλάσμα. Τα δείγματα των ασθενών μπορούν να αποθηκευτούν για 7 ημέρες στους 2-8 °C. Τυχόν μακροχρόνια αποθήκευση να γίνεται στη κατάψυξη σε θερμοκρασία ≤ -20 °C. Να αποφεύγονται πολλαπλές αποψύξεις και επανακαταψύξεις των δειγμάτων. 4.2. Για να αποφευχθεί παρεμβολή από συνίσταται προσρόφηση των IgF/Rf υψηλούς IgG τίτλους και RF 4.3. Προετοιμασία των ορών, π.χ. απενεργοποίηση δε χρειάζεται. Ωστόσο, οι οροί δε θα πρέπει να είναι επιμολυσμένοι με μικροοργανισμούς ούτε να περιέχουν ερυθρά αιμοσφαίρια. 5. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΕΞΕΤΑΣΗΣ 5.Α IgG/RF ΔΕΣΜΕΥΣΗ Προσοχή: Οι μάρτυρες είναι έτοιμοι για χρήση. Οι όγκοι που απαιτούνται στα παρακάτω προσδιορισμό. είναι μόνο για μονό 5.Α.1. Ορός: 10 μl ορού διαλύονται με 240 μl δείγματος διαλύτη. (Αραίωση 1:25) 432-TMB-VPG/010512 6 5.Α.2. Δέσμευση: 30 μl IgG/Rf-Δεσμευτικού και 30 μl αραιωμένου ορού αναμιγνύονται (αραίωση 1:50) και επωάζονται για 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (RT). Εναλλακτικώς : Η δέσμευση μπορεί να διεκπεραιωθεί ολονύχτια σε 2 - 8 °C. 5.Α.3. Η αραίωση της εξέτασης είναι τώρα 1:50. 5.Β. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΕΞΕΤΑΣΗΣ 5.B.1. Κόψτε τη σακούλα αλουμινίου πάνω από τη σύνδεση και βγάλτε τον απαιτούμενο αριθμό strips (δείτε 3.1.). Τα strips είναι έτοιμα υποβληθούν σε πρόπλυση. για χρήση και δε χρειάζεται να 5.B.2. Βάλτε με πιπέτα 50 µl διαλύτη δείγματος στο πηγαδάκι A1 ως τυφλό (δείτε 6.A.) και εις διπλούν 50 µl αρνητικού μάρτυρα, 50 µl θετικού μάρτυρα και τα αραιωμένα δείγματα ασθενών. Αν χρειαστεί, τα πηγαδάκια της μικροπλάκας μπορούν διατηρηθούν σε υγρό θάλαμο μέχρι και για 30 λεπτά θερμοκρασία δωματίου πριν τη διαδικασία. να σε 5.B.3. Επωάστε τα πηγαδάκια της μικροπλάκας για 60 λεπτά (± 5 λεπτά) στους 37 oC (± 1 °C) σε υγρό θάλαμο ή σκεπασμένες με κάλυμμα. 5.B.4. Μετά την επώαση πλύνετε τα πηγαδάκια της μικροπλάκας τρεις φορές με 200 µl ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης ανά πηγαδάκι. Προσέξτε να είναι πλήρη όλα τα πηγαδάκια. Μετά την πλύση στραγγίστε τα πηγαδάκια της μικροπλάκας σε διηθητικό χαρτί. Μην αφήνετε τα πηγαδάκια να στεγνώσουν! Συνεχίστε αμέσως! 5.B.5. Προσθέστε σύμπλοκο (κόκκινο χρώμα) σε κάθε πηγαδάκι. Προσθέστε 50 µl σύμπλοκο με πιπέτα στα πηγαδάκια αν η εξέταση γίνεται με το χέρι. Παρακαλώ σημειώστε: Όταν δουλεύετε με αυτοματοποιημένα όργανα, προσθέστε 60 µl σύμπλοκο με πιπέτα σε κάθε πηγαδάκι λόγω της μεγαλύτερης εξάτμισης στους θαλάμους επώασης των αυτόματων συσκευών. Η καταλληλότητα του κιτ για χρήση σε αυτόματους αναλυτές επιβεβαιώθηκε κατά την αξιολόγηση του. Παρόλα αυτά συστήνεται να επιβεβαιώνεται η συμβατότητά του με τον αναλυτή που χρησιμοποιεί το εργαστήριο. 432-TMB-VPG/010512 7 5.Β.6. Επωάστε τα πηγαδάκια της μικροπλάκας πάλι για 60 λεπτά (± 5 λεπτά) στους 37 °C (± 1 °C) σε υγρό θάλαμο ή σκεπασμένα με κάλυμμα. 5.Β.7. Μετά την επώαση (δείτε 5.Β.4.). πλύνετε ξανά τα πηγαδάκια της μικροπλάκας 5.Β.8. Προσθέστε 50 µl TMB-Υποστρώματος σε κάθε πηγαδάκι και επωάστε τα πηγαδάκια της μικροπλάκας για 30 λεπτά (± 2 λεπτά) στους 37 °C (± 1 °C) σε υγρό θάλαμο ή σφραγισμένα με κάλυμμα επώασης στο σκοτάδι. Τα θετικά δείγματα γίνονται κυανά. 5.Β.9. Σταματήστε την αντίδραση προσθέτοντας 100 µl διαλύματος τερματισμού σε κάθε πηγαδάκι. Τα θετικά δείγματα γίνονται κίτρινα. Καθαρίστε τα πηγαδάκια της μικροπλάκας από κάτω πριν από τη φωτομετρική ανάγνωση και φροντίστε να μην υπάρχουν φυσαλίδες αέρα στα πηγαδάκια. Η ανάγνωση θα πρέπει να γίνει μέσα σε 15 λεπτά μετά την προσθήκη του διαλύματος τερματισμού! 432-TMB-VPG/010512 8 5.C. ΠΙΝΑΚΑΣ ΓΙΑ ΤΗN IgG/Rf-ΔΕΣΜΕΥΣΗ Ένδειξη ανά προσδιορισμό 10 μl ορός + 240 μl Διαλύτη 250 μl; αραίωση 1:25 ↓ 30 μl IgG/Rf – Δεσμευτικό + 30 μl αραιωμένος ορός 60 μl; αραίωση 1:50 ↓ Vortex ↓ Επωάστε για 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου ή όλη την νύχτα, σε 2 - 8 °C ↓ Αραίωση της εξέτασης 1:50 5.D. ΠΙΝΑΚΑΣ ΓΙΑ ΤΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ Τυφλό(A1) Διαλύτης δείγματος Αρνητικός μάρτυρας Θετικός μάρτυρας Δείγμα 50 µl - Αρνητικός μάρτυρας 50 µl - Θετικός μάρτυρας 50 µl - Δείγμα 50 µl Επωάστε για 60 λεπτά στους 37 °C, πλύνετε 3 x με 200 µl ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης. Σύμπλοκο 50/60 µl*) 50/60 µl*) 50/60 µl*) 50/60 µl*) Επωάστε για 60 λεπτά στους 37 °C, πλύνετε 3 x με 200 µl ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης. TMB-Υπόστρωμα 50 µl 50 µl Επωάστε για 30 λεπτά στους 37 Διάλυμα Τερματισμού 100 µl o 50 µl 50 µl C στο σκοτάδι. 100 µl 100 µl 100 µl Φωτομετρική ανάγνωση στα 450 nm (ref. 620 - 650 nm) *) χειροκίνητη/αυτόματη διαδικασία 432-TMB-VPG/010512 (δείτε 5.Β.5.) 9 6.A. ΥΠΟΛΟΓΙΣΜΟΣ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ (ΕΓΚΥΡΟΤΗΤΑ) Διαβάστε τις τιμές OD στα 450 nm (μήκος κύματος αναφοράς 620 650 nm). Αφαιρέστε την τιμή OD από το τυφλό (πηγαδάκι A1) από όλες τις άλλες OD τιμές. Η τιμή OD του τυφλού πρέπει να είναι < 0,100. Η μέση τιμή OD του Αρνητικού μάρτυρα θα πρέπει να είναι < 0,100. Η τιμή OD του Θετικού μάρτυρα θα πρέπει να είναι > 0,800. Cut-off = μέση τιμή OD του Αρνητικού μάρτυρα + 0,380 Γκρίζα ζώνη = Cut-off ± 10% Επαναλάβετε την προδιαγραφών. διαδικασία εάν τα αποτελέσματα είναι εκτός 6.B. ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ: 6.B.1. 6.B.2. ΠΟΙΟΤΙΚΗ Αποτέλεσμα Aξιολόγηση OD < Γκρίζα ζώνη OD Cut-off ± 10 % OD > Γκρίζα ζώνη αρνητικό αμφίβολο θετικό HMIΠΟΣΟΤΙΚΗ OD δείγματος OD cut-off < 0,9 0,9 - 1,1 Cut-off-index: > 1,1 Aξιολόγηση αρνητικό αμφίβολο θετικό Δείγματα με οπτική πυκνότητα μέσα στη γκρίζα ζώνη πρέπει να επανεξετάζονται μαζί με φρέσκα δείγματα που θα συλλεχθούν 14 μέρες αργότερα με σκοπό να καθοριστεί η αλλαγή τίτλου. Τα αποτελέσματα πρέπει πάντα να ερμηνεύονται σε συνδυασμό με κλινικά ευρή ματα και πρόσθετες διαγνωστικές παραμέτρους. Υψηλές συγκεντρώσεις αιμοσφαιρίνης, βιλιρουβίνης και λιπιδίων στον ορό δεν επηρεάζουν τα αποτελέσματα. Σπάνια, οι υψηλές συγκεντρώσεις λιπιδίων στον ορό μπορούν να επηρεάσουν τα αποτελέσματα Αντίδραση με αντιπυρηνικά αντισώματα, ετερόφυλα αντισώματα και αντισώματα της C. trachomatis και C. psittaci δεν μπορούν να αποκλειστούν. 432-TMB-VPG/010512 10 6.C. ΕΙΔΙΚΑ IgM-/IgA-/IgG-ΕΡΜΗΝΕΙΑ Θερικά αποτελέσματα IgM IgA IgG COI* COI COI Ερμηνεία >1,1 + <0,9 - <0,9 - 1. Ορολογικός δείκτης λοίμωξης σε αρχικό στάδιο ή πολυκλωνικής ενεργοποίησης B-κυττάρων. Επανελέγξτε τα IgM, IgA και IgG μετά από 14 ημέρες. >1,1 + >1,1 + <0,9 - 2. Ορολογικός δείκτης οξείας λοίμωξης. Επανελέγξτε τα IgG μετά από 14 ημέρες. >1,1 + <0,9 - >1,1 + 3. Ορολογικός δείκτης οξείας λοίμωξης. >1,1 + >1,1 + >1,1 + 4. Ορολογικός δείκτης οξείας λοίμωξης. <0,9 - >1,1 + >1,1 + 5. Ορολογικός δείκτης τρέχουσας λοίμωξης1. Επανελέγξτε τα IgA και IgG μετά από 14 ημέρες. <0,9 - <0,9 - >1,1 + 6. Ορολογικός δείκτης παρελθούσας λοίμωξης. Σε περίπτωση κλινικής υποψίας επανελέγξτε μετά από 14 ημέρες για IgA κα IgG αντισώματα. <0,9 - >1,1 + <0,9 - 7. Ορολογικός δείκτης αρχικής φάσης της λοίμωξης μεμονομένων, επιμενόντων IgA2. Επανελέγξτε τα IgM, IgA και IgG μετά από 14 ημέρες. <0,9 - <0,9 - <0,9 - 8. Καμία ορολογική ένδειξη τρέχουσας ή παρελθούσας λοίμωξης 3. Σε περίπτωση κλινικής υποψίας επανελέγξτε τα IgM, IgA και IgG μετά από 14 ημέρες. * Cut-off-Index=Δείκτης κατωφλίου Σχόλιο: Οριακά αποτελέσματα μπορεί να υποδεικνύουν αρχόμενη αποδρομή. Συνίσταται επανέλεγχος μετά από 14 ημέρες. 432-TMB-VPG/010512 λοίμοξη ή σε 11 1 Μιά τρέχουσα λοίμωξη μπορεί να οφείλεται σε: - χρόνια λοίμωξη με ανθεκτικά παθογόνα: Οι τιμές COI των αντισωμάτων παραμένουν σταθερές για αρκετές εβδομάδες. - οξεία λοίμωξη: Οι τιμές COI των αντισωμάτων αυξάνονται σημαντικά. - υψηλή συγκέντρωση IgG: Δεν μπορεί να αποκλεισθεί οξεία λοίμωξη. Κατά τον Grayston et al. (1989), οι τίτλοι MIF IgG titres ≥ 1:512 υποδεικνύουν οξεία λοίμωξη. 2 Σε μεμονομένες περιπτώσεις μπορεί να υπάρχουν μεμονομένα επιμένοντα IgA αντισώματα. Το ανοσολογικό αυτό φαινόμενο εμφανίζετα σε σε διάφορες βακτηρτιακές λοιμώξεις. Δεν μπορεί να εκτιμηθεί η κλινική συσχέτιση. 3 Σε περίπτωση πρόσφατης οξείας λοίμωξης από C. pneumoniae τα αποτελέσματα των ορολογικών αντισωμάτων μπορεί να είναι αρνητικά, παρά τα κλινικά συμπτώματα και την θετική ανίχνευση αντιγόνου. Εάν επιθυμείτε την ορολογική επιβεβαίωση ενός θετικού αντιγονικού αποτελέσματος ή μία παρακολούθηση, συνιστούμε έλεγχο μετά από 14 ημέρες από τη ορομετατροπή. 432-TMB-VPG/010512 12 7. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΕΠΙΔΟΣΗΣ Τα παρακάτω χαρακτηριστικά διαγνωστική αξιολόγηση. λειτουργία προσδιορίστηκαν κατά τη 7.A. ΕΙΔΙΚΟΤΗΤΑ ΚΑΙ ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ Μελετήθηκαν 121 ΙgM αρνητικό οροί με την MIF μέθοδο στα C. pneumoniae (31 ασθενείς με κλινική υποψία λοίμωξης (1) και 90 από ασθενείς με καλλιέργεια θετική στα C. trachomatis (2) καθώς και 159 ΙgM αρνητικό οροί (Elisa αναφοράς) από δότες αίματος (3) (άντρες και γυναίκες 20-60 ετών), για τον προσδιορισμό της ειδικότητας. Μελετήθηκαν οροί από 38 ασθενείς με υποψία για αναπνευστική λοίμωξη (4) για τον προσδιορισμό της ευαισθησίας. Με την MIF μέθοδο ανιχνεύθηκαν αντισώματα της C. pneumoniae σε όλους τους ορούς. Ομάδα ασθενών Ειδικότητα IgΜ Ασθενείς χωρίς ΙgM αντισώματα της C. pneumoniae με την MIF μέθοδο: (1) ασθενείς με υποψία χλαμυδιακής λοίμωξης (n=31) (2) STD ασθενείς (n=90) Οροί χωρίς ΙgM αντισώματα της C. pneumoniae με ELISA αναφοράς (3) Δότες αίματος (n=159) Ομάδα ασθενών 90 % (28/31) 98 % (88/90) 99 % (157/159) Ευαισθησία IgM Ασθενείς με αντισώματα C. pneumoniae με μέθοδο MIF: (4) Ασθενείς με αναπνευστική λοίμωξη (n=38) 432-TMB-VPG/010512 97 % (37/38) 13 7.B. ΑΚΡΙΒΕΙΑ Δείγμα NC BC PC N° 1 N° 2 Διακύμανση Intra-Assay Δείγμα OD SD CV (%) n 0,036 0,503 1,216 0,844 0,719 0,003 0,027 0,047 0,063 0,042 8 5 4 7 6 21 21 21 21 21 NC BC PC N° 3 N° 4 Διακύμανση Inter-Assay (n = 11) SD CV (%) OD 0,035 0,521 1,225 0,051 0,848 0,003 0,027 0,063 0,004 0,061 9 5 5 8 7 NC = Αρνητικός Μάρτυρας BC = Ασθενώς Θετικός Μάρτυρας (δεν περιλαμβάνεται στο κιτ) PC = Θετικός Μάρτυρας ΓΕΝΙΚΕΣ ΣΥΜΒΟΥΛΕΣ ΓΙΑ ΤΟ ΧΕΙΡΙΣΜΟ Μην ανταλλάσσετε τα φιαλίδια ή τα βιδωτά καπάκια αποφύγετε την επιμόλυνση του ενός από το άλλο. Τα αντιδραστήρια θα πρέπει να σφραγίζονται αμέσως μετά τη χρήση ώστε να αποφευχθεί η εξάτμιση και η μικροβιακή τους επιμόλυνση. Μετά τη χρήση, τα αντιδραστήρια θα πρέπει να φυλάσσονται κάτω από τις συνθήκες που συνιστώνται ώστε να διατηρηθούν μέχρι την ημερομηνία λήξης. Μετά τη χρήση, όλα τα περιεχόμενα του κιτ εξέτασης θα πρέπει να φυλάσσονται στην αρχική συσκευασία, για να αποφευχθεί το ανακάτεμα τους με αντιδραστήρια άλλων συστημάτων εξέτασης ή άλλων παρτίδων (δείτε επίσης 3.). τους για να ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΥΓΕΙΑ ΚΑΙ ΤΗΝ ΑΣΦΑΛΕΙΑ Οι τοπικοί επαγγελματικοί κανονισμοί για την υγεία και την ασφάλεια θα πρέπει να γίνονται σεβαστοί. Τα αντιδραστήρια ανθρώπινης προέλευσης έχουν εξεταστεί και βρέθηκε ότι είναι αρνητικά για HBsAg, για αντισώματα έναντι του HIV-1/2 και για HCV. Ωστόσο, συνίσταται αυτά τα υλικά καθώς και εκείνα που είναι ζωικής προέλευσης(δείτε τα περιεχόμενα του κιτ), θα πρέπει να τα χειρίζεστε ως δυνητικά μολυσματικά και να λαμβάνετε όλα τα απαραίτητα μέσα προστασίας. ΚΑΤΑΣΤΡΟΦΗ ΤΩΝ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Τα υπολείμματα χημικών και παρασκευασμάτων θεωρούνται γενικά επικίνδυνα απόβλητα. Η απαλλαγή από το είδος αυτό των αποβλήτων ρυθμίζεται από εθνικούς και τοπικούς νόμους και κανονισμούς. Επικοινωνήστε με τις τοπικές αρχές ή με εταιρίες διαχείρισης αποβλήτων που θα σας δώσουν συμβουλές σχετικά με το πώς να απαλλαγείτε από επικίνδυνα απόβλητα. Ημερομηνία Έκδοσης: 01.05.2012 432-TMB-VPG/010512 14 ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ Balin, B.J., Gérard, H.C., Arking, E.J., Appelt, D.M., Branigan, P.J., Abrams, J.T., Whittum-Hudson, J.A., Hudson, A.P.: Identification and localization of Chlamydia pneumoniae in the Alzheimer’s brain. Med. Microbiol. Immunol. 187, 23-42 (1998). Christiansen, G., Boesen, T., Hjerno, K., Daugaard, L., Mygind, P., Madsen, A.S., Knudsen, K., Falk, E., Birkelund, S.: Molecular biology of Chlamydia pneumoniae surface proteins and their role in immunopathogenicity. Am. Heart J. 138, 491-495 (1999). Danesh, J., Collins, R., Peto, R.: Chronic infections and coronary heart disease: is there a link? Lancet 350, 430-436 (1997). Elkind, M.S., Lin, I.F., Grayston, J.T., Sacco, R.L.: Chlamydia pneumoniae and the risk of first ischemic stroke. The Northern Manhattan stroke study. Stroke 31, 1521-1525 (2000). Gérard, H.C., Schumacher, H.R., El-Gabalawy, H., Goldbach-Manksy, R., Hudson, A.P.: Chlamydia pneumoniae present in the human synovium are viable and metabolically active. Microb. Pathog. 29, 17-24 (2000). Grayston, J.T.: Epidemiology of Chlamydia pneumoniae (TWAR). In: Chlamydia Research. Angelika Stary (ed.). Proceedings of the Third Meeting of the European Society for Chlamydia Research, Vienna, Austria, 11.14. September, 211-214 (1996). Grayston, J.T., Aldous , M.B., Easton, A., Wang, S.P., Kuo C.C., Campbell, L.A., Altman, J.: Evidence that Chlamydia pneumoniae causes pneumonia and bronchitis. J. Infect. Dis. 168, 1231-1235 (1993). Gupta, S., Leatham, E.W., Carrington, D., Mendall, M.A., Kaski, J.C., Camm, A.J.: Elevated Chlamydia pneumoniae antibodies, cardiovascular events, and azithromycin in male survivors of myocardial infarction. Circulation 96, 404-407 (1997). Gurfinkel, E., Bozovich, G., Daroca, A., Beck, E., Mautner, B.: Randomised trial of roxithromycin in non-Q-wave coronary syndromes: ROXIS pilot study. Lancet 350, 404-407 (1997). Hahn, D.L., Peeling, R.W., Dillon, E., McDonald, R., Saikku, P.: Serologic markers for C. pneumoniae in asthma. Ann. Allergy Asthma Immunol. 84, 227-233 (2000). Hunter, S.F., Hafler, D.A.: Ubiquitous pathogens: Links between infection and autoimmunity in MS? Neurology 55, 164-165 (2000). Kuo, C. C., Jackson, L.A., Campbell, L.A., Grayston, J.T.: Chlamydia pneumoniae(TWAR). Clin. Microbiol. Rev. 8, 451-461 (1995). Layh-Schmitt, G., Bendl, C., Hildt, U., Dong-Si, T., Jüttler, E., Schnitzler, P., Grond-Ginsbach, C., Grau, A.J.: Evidence for infection with Chlamydia pneumoniae in a subgroup of patients with multiple sclerosis. Ann. Neurol. 47, 652-655 (2000). 432-TMB-VPG/010512 15 Maass, M., Bartels, C., Engel, P.M., Mamat, U., Sievers, H.H.: Endovascular presence of viable Chlamydia pneumoniae is a common phenomenon in coronary artery disease. J. Am. Coll. Cardiol. 31, 827-832 (1998). Muhlestein, J.B.: The link between Chlamydia pneumoniae and atherosclerosis. Infect. Med. 14, 380-382, 392, 426 (1997). Saikku, P.: Chronic Chlamydia pneumoniae infections. In: Chlamydia Research. Angelika Stary (ed.). Proceedings of the Third Meeting of the European Society for Chlamydia Research, Vienna, Austria, 11.-14. September. 215-218 (1996). Saikku, P., Leinonen, M., Mattila, K., Ekman, M.R., Nieminen, M.S., Mäkela, P.H., Huttunen, J.K., Valtonen, V.: Serological evidence of an association of a novel Chlamydia, TWAR, with chronic coronary heart disease and acute myocardial infarction. Lancet 2, 983-986 (1988). Saikku, P., Leinonen, M., Tenkanen, L., Linnanmäki, E., Ekman, M.R., Manninen, V., Manttari, M., Frick, M.H., Huttunen, J.K.: Chronic Chlamydia pneumoniae infection as a risk factor for coronary heart disease in the Helsinki Heart Study. Ann. Intern. Med. 116, 272-278 (1992). Samra, Z., Soffer, Y.: IgA antichlamydial antibodies as a diagnostic tool for monitoring of active chlamydial infection. Eur. J. Epidemiol. 8, 882-884 (1992). Schumacher, H.R.: Chlamydial Arthritis. In: Chlamydia Research. Pekka Saikku (ed.). Proceedings of the 4th Meeting of the European Society for Chlamydia Research, Helsinki, Finland, 20.-23. August. 229 (2000). Sriram, S., Stratton, C.W., Yao, S.: Chlamydia pneumoniae infection in the central nervous system in multiple sclerosis. Ann. Neurol. 46, 614 (1999). Stille, W., Just-Nübling, G.: Argumente für eine Antibiotika-Therapie der Arteriosklerose. Chemotherapie Journal 6, 1-5 (1997). 432-TMB-VPG/010512 16
© Copyright 2024 Paperzz
