P-128 ネオニコチノイド系農薬およびその代謝物質の固相抽出須藤勇紀, 柴田剛志, 伊藤智博, 久保田守, 大野桂二（和光純薬工業株式会社） 1. はじめに 2. 実験方法近年、ネオニコチノイド系農薬はミツバチが減っている現象の原因の一つと考えられており、そのため、EUでは使用を一部制限された。ネオニコチノイド系農薬は原因不明の体調不良を訴える患者の尿中からの代謝物の検出、河川などの水環境中からも検出するなど関心が高まっている。しかしながら、代謝物を含む分析報告は少ないため、今回、固相抽出法による分析条件を検討した。表1 HPLC条件機器カラム移動相A 移動相B グラジエント条件流量カラム温度注入量 Prominence LC-20A(島津製作所) Wakopak® Ultra C18-2 Φ2.1mm × 100mm 0.1%ギ酸・10mM酢酸アンモニウム水溶液 0.1%ギ酸・10mM酢酸アンモニウムメタノール溶液 0min.(A：B=80：20)→2-15min.(15：85) →15.1min.(80：20)→15.1-25(80：20) 0.1 mL/min 40 ℃ 5 μL 表2 MSの機器条件機器イオン化測定モード Curtain gas Collision gas Ion Spray Voltage Temperature Ion Source gas 1 Ion Source gas 2 3200 QTRAP (AB SCIEX社) ESI positive SRM 10 3 5500 600 70 80 サンプルは農薬8成分、代謝物質4成分の全12成分を濃度50 ng/mLに調液した。代謝物質は、ニテンピラムのCPFとCPMF、アセタミプリド、イミダクロプリド、チアクロプリド、ニテンピラムに共通の6-クロロニコチン酸、チアクロプリドのチアクロプリド-アミドとした。固相抽出カートリッジは和光純薬製の逆相モードのresep®RPP、逆相-強陽イオン交換のPresep®RPP-SCX、逆相-弱陽イオン交換の Presep®RPP-WCX、逆相-強陰イオン交換のPresep®RPP-SAX、逆相-弱陰イオン交換のPresep®RPP-WAXを用いて検討した。逆相-イオン交換では第1フラクションと第2フラクションを分析した。表3 各化合物の測定m/z 成分名分子量アセタミプリドイミダクロプリドチアクロプリドニテンピラムクロチアニジンチアメトキサムジノテフランフロニカミド CPF CPMF 6-クロロニコチン酸チアクロプリド-アミド 222.7 255.7 252.7 270.7 249.7 291.7 202.2 229.2 198.7 211.7 157.6 270.7 モニターイオン(m/z) プロダクトプリカーサー 223.0 126.1 73.1 256.9 210.1 176.1 253.5 126.0 73.1 271.2 126.0 225.2 250.0 132.1 169.1 292.0 211.2 181.2 203.1 129.1 87.1 230.1 203.1 148.0 199.1 128.1 181.2 212.1 126.2 73.1 158.1 122.1 78.1 271.6 125.8 73.1 3.結果 Presep®RPPは全成分において93～109 % と良好な回収率を得た。 Presep®RPP-SCXはジノテフラン58 %、それ以外の成分は88～104 %となり、ニテンピラム、CPMF、チアクロプリド-アミドは第2フラクションで回収した。 Presep®RPP-WAXはCPMFが不検出、それ以外は82～115 %となり、6-クロロニコチン酸を第2フラクションで回収した。 Presep®RPP-SAXはCPMF25 %、フロニカミド52 %、チアメトキサム23 %となり、ニテンピラム、6-クロロニコチン酸を第2フラクションで回収、クロチアニジンは第1フラクション、第2フラクション両方から検出された。 Presep®RPP-WCXは6-クロロニコチン酸が不検出、フロニカミド53 %、チアメトキサム 45 %となり、CPMFが第2フラクションからの検出、CPFがは第1フラクション、第2フラクション両方から検出された。 4.まとめサンプル1 mL(各濃度 50 ng/mL) サンプル1 mL(各濃度 50 ng/mL) +ギ酸10 μL+超純水1 mL サンプル1 mL(各濃度 50 ng/mL) +アンモニア水100 μL+超純水1 mL Presep® RPP-SCX or Presep® RPP-WAX Presep® RPP-SAX or Presep® RPP-WCX 1 %ギ酸水溶液3 mL 1 %アンモニア水溶液3 mL ①メタノール2 mLを用いて溶出 ①メタノール2 mLを用いて溶出 ②5 %アンモニア・メタノール溶液 2 mLを用いて溶出 ②5 %ギ酸・メタノール溶液 2 mLを用いて溶出 Presep® RPP メタノール4 mLを用いて溶出図2 固相抽出の実験フロー表4 各固相抽出カートリッジの回収率回収率(%) RPP アセタミプリドイミダクロプリドチアクロプリドニテンピラムクロチアニジンチアメトキサムジノテフランフロニカミド CPF CPMF 6-クロロニコチン酸チアクロプリド-アミド 97 93 94 101 104 101 100 98 99 100 96 109 SCX ① ② 100 N.D. 103 N.D. 91 N.D. N.D. 104 100 N.D. 100 N.D. 58 N.D. 88 N.D. 104 N.D. N.D. 104 97 N.D. N.D. 97 WAX ① ② 112 N.D. 110 N.D. 104 N.D. 82 N.D. 108 N.D. 108 N.D. 105 N.D. 115 N.D. 114 N.D. N.D. N.D. N.D. 109 111 N.D. SAX ① ② 94 N.D. 106 N.D. 102 N.D. N.D. 95 48 56 23 N.D. 101 N.D. 52 N.D. 123 N.D. 25 N.D. N.D. 101 99 N.D. WCX ① ② 98 N.D. 99 N.D. 98 N.D. 100 N.D. 105 N.D. 45 N.D. 98 N.D. 53 N.D. 80 10 N.D. 73 N.D. N.D. 99 N.D. Presep®RPPはネオニコチノイド系農薬およびその代謝物12成分を良好に回収することが可能であった。 Presep®RPP-SCXは CPFとCPMFの選択的回収が可能であり、 Presep®RPP-WAXおよびPresep®RPP-SAXは6-クロロニコチン酸を選択的に回収することが可能であった。今後、逆相-イオン交換での固相抽出条件の最適化と回収率の向上ならびに環境実試料への適用について検討する。