結核感染診断検査Ｔ-スポット(R).ＴＢについて～特徴、測定方法、結果判読～ ◎藤本一満 1) ファルコバイオシステムズ総合研究所 1) 結核発病ﾘｽｸが高い者および発病後感染拡大ﾘｽｸが高い者に対する潜在性結核感染症(LTBI)の治療の有効性が確立し、結核感染診断の重要性は増した。LTBI の絶対基準がないため、LTBI に対して感度、特異度は直接推測することはできないが、従来、結核感染診断方法として行われてきたツ反は過去の BCG 接種や非結核性抗酸菌等の影響を受けるため特異度に問題があった。これに対して結核特異抗原の刺激によってﾘﾝﾊﾟ球から遊離されるｲﾝﾀｰﾌｪﾛﾝ-γ(IFN-γ)を測定する IFN-γ 遊離試験（IGRA）は、高特異度、信頼できる客観的な測定法、被験者の再診不要等からツ反に比べ有利な点をもつ。現在、IGRA として 2009 年にｸｫﾝﾃｨﾌｪﾛﾝ®TB ｺﾞｰﾙﾄﾞ(QFT)、2012 年に Tｽﾎﾟｯﾄ®TB(T-SPOT)が健康保険に収載され、両方法とも広く利用されている。今回、T-SPOT の特徴、測定方法および結果判読等について報告する。［結核の感染と発病］感染とは、結核菌に感染し体内に菌はいるが免疫で封じ込まれて活動せず潜伏している状態、発病とは、感染した後に免疫力低下、免疫抑制剤の使用などで体の抵抗力が弱くなり、結核菌が活動し始めて体の中で増殖している状態をいう。［T-SPOT の特徴］１．採血管：ﾍﾊﾟﾘﾝ血 1 本。２．採血から検査までの時間：最大 32 時間。３．検体保存温度：18～25℃。４．結核特異抗原：ESAT-6、CFP10 の 2 種。５．測定対象：25 万個の末梢血単核球(PBMC)当たりの IFNγ 産生細胞数。６．検出法： ELISPOT 法。７．検査日数：2 日。８．検査の自動化率：およそ 10%。９．感度、特異度：感度は活動性結核患者 80 名中 78 名が陽性 97.5%、特異度は結核感染ﾘｽｸの低い 111 名中 110 名が陰性 99.1%(試薬添付説明書より引用)。１０． QFT との相関性：結核菌感染ﾘｽｸの高い被験者による陽性一致率は 75/76(98.7%)、結核菌感染ﾘｽｸの低い被験者による陰性一致率は 97/97(100.0%)。［T-SPOT の測定方法］１．全血から PBMC を分離し、規定の細胞数に調製する。２．抗 IFN-γ 抗体を固相したﾏｲｸﾛﾌﾟﾚｰﾄの 4ｳｪﾙに 25 万個ずつ PBMC を分注し、ESAT-6、 CFP10 を加え 16～20 時間反応させる。３．ｳｪﾙを洗浄したのち、ALP 標識抗 IFN-γ 抗体を加え反応させる。４．ｳｪﾙを洗浄して非結合の抗体を除去後、基質試薬を加える。５．基質が分解されるとｳｪﾙ底の膜に暗青色のｽﾎﾟｯﾄとして染みつき、IFN-γ を産生したｴﾌｪｸﾀｰT 細胞の存在を表す（ELISPOT 法）。６．ｴﾘｽﾎﾟｯﾄﾘｰﾀﾞｰおよび目視確認にてｽﾎﾟｯﾄ数を計測する。７．一定の判定基準に従い、ｽﾎﾟｯﾄ数から結核感染の有無を判定する。［測定結果の判定法］１．（ESAT-6 のｽﾎﾟｯﾄ数）－（陰性ｺﾝﾄﾛｰﾙのｽﾎﾟｯﾄ数）を①とする。（CFP10 のｽﾎﾟｯﾄ数）－（陰性ｺﾝﾄﾛｰﾙのｽﾎﾟｯﾄ数）を②とする。２．陽性：①および②の両方、あるいは片方のｽﾎﾟｯﾄ数が 6 以上の場合。陰性：①および②の両方のｽﾎﾟｯﾄ数が 5 以下の場合。３．判定保留：①および②の両方の最大ｽﾎﾟｯﾄ数が 5～7 の場合。４．判定不可：陰性ｺﾝﾄﾛｰﾙのｽﾎﾟｯﾄ数が 11 以上の場合。陽性ｺﾝﾄﾛｰﾙのｽﾎﾟｯﾄ数が 20 未満の場合。図　T-SPOT 測定結果（陽性例）［結果分布］当社に T-SPOT の依頼のあった 21,266 検体(2013 年 2 月～2014 年 4 月)の結果分布をみたところ、陽性 8.1%、陰性 87.3%、陽性域の判定保留 1.5%、陰性域の判定保留 1.1%、判定不可 1.8%、PBMC 規定値未満 0.2%であった。［まとめ］ T-SPOT は、PBMC の洗浄およぶ細胞数の調製をすることで安定した検査結果が得やすく、感度および特異度が高いことから、結核感染者の特定が可能となる。当日は、よくある質問に対する回答を紹介する。連絡先 0774-46-1010