タンパク質発現まで検証済の cDNA クローン ウェスタンブロッティングで発現検証済 シークエンス確認済 Transfection ready 60 種類上のシャトルベクターに 簡単に組換え可 TrueORF Clone に ゴールドクローンが TM 誕生しました！ 製品内容 ● TrueORF Gold Clone ● TrueORF™ Clone ● PrecisionShuttle™ System ● TrueClone™ ● 精製ヒトタンパク質 01 TrueORF Gold Clone TrueORF Gold Clone 6,000 クローン以上 クローン数は 随時増えています！ タンパク質発現を検証済の cDNA クローン TrueORF™クローンの中で、 タンパク質発現まで検証済のクローンを TrueORF Gold クローンと呼んでいます。 特 長 ● ウェスタンで発現確認済 各 TurORF Gold クローンは、そのまますぐヒト細胞株にトランスフェ ● Transfection ready サブクローニングやプラスミド精製の必要はありません。TrueORF Gold クローンは、ほ乳類細胞でのタンパク質発現に必要とされる全てのエレ クションしてタンパク質発現にお使いいただけます。 メント ( プロモーター、ポリアデニル化シグナル、薬剤耐性マーカーなど ) と共にコンストラクトされています。 158 ̶ 106 ̶ 79 ̶ 48 ̶ 35 ̶ 23 ̶ HEK293 に下記をトランスフェクトした。 右：TrueORF Clone Myc/DDK-tagged hTERT ( 品番：RC217436) 左：空ベクター ● 60 種類のシャトルベクターに簡単に組換え可 （4 ページ参照） オリジンテクノロジー社では、カット＆ペーストで感単にインサートを トランスファーできるよう、同一のクローニング部位を持つシャトルベ ライセートを抗 DDK 抗体で検出、ｈTERT が大 量発現していることが確認できる。 クターを 60 種類以上取りそろえています。 ＊DDK は FLAG®タグ ● シークエンス確認済 ●蛍光タンパク質タグベクター 27 種類 ●エピトープタグベクター 23 種類 ●選択マーカー 8 種類 ●誘導ベクター 2 種類 ●バクテリア発現ベクター 5 種類 各 TrueORF Gold クローンは、シークエンスを完全に確認済みで、ク ロマトグラムファイルをオンライン上または商品に添付される USB データからご覧いただけます。TrueORF Gold クローンをお使いの場 合、変異や欠失、フレームシフトを心配する必要はありません。 オリジンテクノロジー社では、 ク ロ ー ン 単 品 販 売 の 他 に、 TrueORF トランスフェクショ ン済みの HEK293 細胞から抽 出したライセートを 12,000 種類以上、それらの細胞から精 製したヒトタンパク質を 5,000 種類以上も販売してい ます。 ２ 02 TrueORF™ TrueORF™ Clone ヒト 25,000 クローン以上 マウス 12,000 クローン以上 37,000 以上のタグ付き ORF(Open Reading Frame) クローン TrueORF™ クローンは、タグ付の融合タンパク質として発現するよう に設計されています。全ての TrueORF™は、TrueClone™の中からシーク エンスを確認して精製したプラスミドを鋳型にして、high fidelity のポ リメラーゼを用いた PCR により調製しています。 特 ● フレキシブル： TrueORF™ タグは PrecisionShuttle™ システムを用いて 簡単に変更可能 TrueORF™ は、pCMV6-Entry ベクターにクローニングされています。 PrecisionShuttle™ システムは豊富な品揃えで pCMV-Entry ベクターに 長 互換性のあるマルチクローニングサイト（MCS）を有します。簡単 ● 便利：タグ付きタンパク質を簡単に発現させる ツール 抗体を用いて発現させたタンパク質を簡単に検出・精製できます。 ・タグ抗体を用いてダウンストリームアッセイを行えるよう に C 末端側に Myc-DDK* タグまたは GFP タグがついています。 ・cDNA の上流に哺乳動物細胞の発現に最適な CMV プロモー ターとコザック配列を有しています。 な制限酵素処理とライゲーション反応を行うだけで、TrueORF™ の インサートをトランスファーでき、多様なエピトープタグを有した タンパク質を発現できます。 PrecisionShuttle™ システムの詳細は 4 ページをご覧ください。 ● 正確：TrueORF™およびインサートの配列は 検証・保証済み TrueORF™は、high fidelity のポリメラーゼを用いてシークエンスを ・精製済みのプラスミド DNA を 10μg お届けします。 確認した完全長 cDNA 由来のクローンです。 適 ● Transfection ready 用 サブクローニングやプラスミド精製の必要はありません。TrueORF ● 哺乳動物由来タグ付きタンパク質の過剰発現 Gold クローンは、ほ乳類細胞でのタンパク質発現に必要とされる （20 種類のタグの組み合わせが可能です） 全てのエレメント ( プロモーター、ポリアデニル化シグナル、薬剤 ● 外因的に誘導されたタンパク質の検出、イメージング 耐性マーカーなど ) と共にコンストラクトされています。 ● 過剰発現したタンパク質の精製 関連商品 ● タンパク質の相互作用と局在化の解析 ● TNT などのセルフリーシステムのタグ付きタンパク質発現 メーカー略号：ORG 品名 抗 DDK モノクローナル抗体 (4C5) 品番 包装 希望販売価格 TA50011-100 100μl \25,500 TA50011-1 1 mL \81,500 TA50011-5 5 mL ご照会 適用：WB, IP, IF, FC His-HA-BLK Myc-DDK*-BTK HA-BLK GFP His-DDK*-BTK His-DDK*-BLK Myc-DDK*-BLK His-BLK α-HA His-HA-BLK α-His α-Myc α-DDK* myc tag DDK* tag α-BTK α-BLK DDK* tag BLK または BTK タグを付加したタンパク質を HEK293 細胞を 用いて発現。ライセートをウエスタンブロット解析した。 ＊ Peptide sequence of the DDK-tag (Flag®): N-DYKDDDDK-C Flag® is a registered trademark of Sigma-Aldrich 3 PrecisionShuttle™ System 60 種類のタグ付きシャトルベクターに簡単に組換え可 TrueORF Gold クローンおよび TrueORF™ クローンのインサートは、 pCMV6 エ ン ト リ ー ベ ク タ ー に 組 み 込 ま れ て お り、簡 単 に PrecisionShuttle™ システムに組換えできます。 Precision Shuttle™ システムのベクターは、制限酵素処理とライゲー Myc-DDK* ションで簡単にインサートを交換できるように TrueORF™ エントリー ベクターと同一の MCS を有しています。TrueORF™ エントリーベク ターの ORF には、5ʼ 末端に Sgf I、3ʼ 末端に Mlu I 認識部位があります。 この２つの酵素を用いてタグを含まない ORF を切り出し、目的のベ クターに組み込みます。 商品リスト 希望販売価格はコスモ・バイオホームページ上の ” 商品検索” でご確認ください。 PrecisionShuttle™ エントリーベクター pCMV6-Entry 選択マーカー 品番 Tag Cell PS100001 Kan 品番 蛍光 pCMV6-AC-GFP PS100010 pCMV6-AN-GFP pCMV6-A-GFP C-Terminal Myc-DDK* Neo N-Terminal - ■蛍光タグ PrecisionShuttle™ システムベクター 選択マーカー Tag Green, dimer C-Terminal N-Terminal TurboGFP Amp Cell Neo PS100019 Green, dimer TurboGFP Amp Neo PS100026 Green, dimer pCMV6-AC-IRES-GFP PS100027 Green, dimer pCMV6-AN-RFP PS100033 Red,dimer pCMV6-AC-RFP PS100034 Red,dimer pCMV6-AN-YFP PS100035 Yellow, dimer pCMV6-AC-YFP PS100036 Yellow, dimer pCMV6-AC-FP602 PS100037 pCMV6-AC-FP635 PS100038 Far-red, dimer pCMV6-AC-mKate Amp Myc-DDK TurboRFP TurboRFP Neo Amp Neo Amp Neo Amp Neo TurboYFP Amp Neo TurboFP602 Amp Neo TurboFP635 Amp Neo PS100039 Far-red, monomer mKate Amp Neo pCMV6-AC-mGFP PS100040 Green, monomer mGFP Amp Neo pCMV6-AC-mRFP PS100041 Red, monome mRFP Amp Neo pCMV6-AC-mYFP PS100042 Yellow, monomer mYFP Amp Neo pCMV6-AC-mBFP PS100043 Blue, monomer mBFP Amp Neo pCMV6-AC-mCFP PS100044 Cyan, monomer mCFP pCMV6-AN-FP602 PS100045 pCMV6-AN-FP635 PS100046 Far-red, dimer pCMV6-AN-mKate PS100047 Far-red, monomer mKate Amp Neo pCMV6-AN-mGFP PS100048 Green, monomer mGFP Amp Neo pCMV6-AN-mRFP PS100049 Red, monomer mRFP Amp Neo pCMV6-AN-mYFP PS100050 Yellow, monomer mYFP Amp Neo pCMV6-AN-mBFP PS100051 Blue, monomer mBFP Amp Neo pCMV6-AN-mCFP PS100052 Cyan, monomer mCFP Amp Neo Red, dimer TurboYFP Amp Red, dimer Amp Neo TurboFP602 Amp Neo TurboFP635 Amp Neo pCMV6-AC-IRES-GFP-Puro PS100059 Green, dimer Amp Puro pTUNE-GFP Green, dimer Amp Neo PS100060 PrecisionShuttle™システム 1．Entry ベクターを SgfI および MluI で酵素消化し、ORF 部分を切り 出します 2．同様に PrecisionShuttle™システムベクターを酵素消化しライゲー ションします ■エピトープタグ（Mammalian 発現） PrecisionShuttle™ システムベクター ■選択マーカー（Mammalian 発現） PrecisionShuttle™ システムベクター 品番 Tag 選択マーカー 品番 選択マーカー Tag pCMV6-AC-His PS100002 C-Terminal His pCMV6-AC-Myc PS100003 pCMV6-AC-HA PS100004 pCMV6-AC-DDK PS100005 pCMV6-AC-Myc-His pCMV6-AC-Myc-DDK N-Terminal Amp Cell Neo Myc Amp Neo HA Amp Neo DDK Amp Neo PS100006 Myc-His Amp Neo PS100007 Myc-DDK Amp Neo pCMV6-AC-HA-His PS100008 HA-His Amp Neo pCMV6-AC-DDK-His PS100009 DDK-His Amp Neo pCMV6-AN-His PS100011 His Amp Neo pCMV6-AN-Myc PS100012 Myc Amp Neo pCMV6-AN-HA PS100013 HA Amp Neo pCMV6-AN-DDK PS100014 DDK Amp Neo pCMV6-AN-His-Myc PS100015 His-Myc Amp Neo pCMV6-AN-Myc-DDK PS100016 Myc-DDK Amp Neo pCMV6-AN-His-HA PS100017 His-HA Amp Neo pCMV6-AN-His-DDK PS100018 His-DDK Amp Neo pCMV6-AC PS100020 Amp Neo PS100053 FC Amp Neo FC Amp Neo pCMV6-AC PS100020 Amp Cell Neo pCMV6-AC-FC pCMV6-AC-FC-S PS100054 pCMV6-A-BSD PS100022 Amp Bla pCMV6-AN-FC PS100055 FC Amp Neo PS100056 FC Amp Neo Amp Neo 3DDK Amp Neo C-Terminal N-Terminal pCMV6-A-EM7-BSD PS100023 Amp/Bla Bla pCMV6-AN-FC-S pCMV6-A-Hygro PS100024 Amp Hyg pCMV6-AC-3DDK PS100057 pCMV6-A-Puro PS100025 Amp Puro pCMV6-AN-3DDK PS100058 pCMV6-A-GFP PS100026 pCMV6-AC-IRES-GFP PS100027 pCMV6-AC-IRES-GFP-Puro PS100059 Amp Myc-DDK Amp Neo Amp Puro ■大腸菌発現用 PrecisionShuttle™ システムベクター ■誘導発現用（Mammalian 発現） PrecisionShuttle™ システムベクター 品番 pTUNE Inducible PS100021 pTUNE-GFP PS100060 Tag C-Terminal Myc-DDK 3DDK 選択マーカー 品番 選択マーカー Tag C-Terminal pEX-N-His-GST PS100028 N-Terminal His-GST Amp pEX-N-GST PS100029 GST Amp pEX-N-His PS100030 His Amp Amp Cell Neo pEX-C-His PS100031 Amp Neo pEX-1 PS100032 N-Terminal 4 His Amp Amp Cell 03 TrueClone™ TrueClone™ ヒト マウス 5ʼ 側と 3ʼ 側に UTR を含む完全長 cDNA クローン TrueClone™ は cDNA ライブラリーから単離されたクローンで、完全 な ORF と 5ʼ 側と 3ʼ 側に非翻訳領域（untranslated region: UTR）を有し、 33,000 クローン以上 5,000 クローン以上 ● お買い得、時間が節約できる シングルコロニー由来の精製済みのプラスミド 10μg をお届けしま pCMV ベクターに組み込まれています。ORF を改良せずに、ネイティブ すのですぐに実験にお使いいただけます。他社のクローンの多くは のシス制御エレメントを有しており、ネイティブな条件下でのタンパク 大腸菌ストックですので、精製する必要があります。 質機能研究に適しています。 特 他社製品 グリセロールストックとして提供 長 ● ベクターを CMV シリーズに統一 Day1 シングルコロニーを プレーティング 使用していますが、TrueClone™は全て CMV ベクターシリーズのみ の使用です。T7 または SP6 プロモーターがついていますので、 すぐにタンパク質発現実験にお使いいただけます。また、この統一さ pCMV6-XL4 / 5 / 6 47007 bp 標準的な DNA 使用量 PCR 10 ng Transfection 200 ng Sequencing Reactions 125 ng 20 Enzyme Digests / Subcloning 500 ng 10 Protein Synthesis 1 μg ● すぐに実験可能 expression-ready、transfection-ready SacⅠ T7/SP6 Promoter Not Ⅰ EcoRⅠ Bgl Ⅱ Kpn Ⅱ Eco RⅤ Hind Ⅲ Sal Ⅰ XbaⅠ Not Ⅰ Sma Ⅰ すべて cDNA の上流に CMV プロモーターがついているため、タンパ ク質発現にすぐに使用できます。HEK293 細胞での使用例を以下に 示します。 AKT1-TrueClone Vector alone PTEN-TrueClone Vector alone FOX1A-TrueClone Vector alone MEK1 ERBB3 AKT1 PTEN FOX1A KDR-TrueClone Vector alone ERBB3-TrueClone Vector alone SV40 ori 50 80 MEK1-TrueClone Vector alone ColE1 polyA signal プラスミド分離 および確認 培養 実験 Human TrueClone™ Vector: Ampr Day4 1000 ングに適しています。 MCS Day3 実験回数 れたベクターシステムは機能性遺伝子のハイスループットスクリーニ CMV Promoter Day2 Start Here 実験開始 他社のクローンは異なる抗生物質マーカー付の多種類のベクターを f1 ori オリジン社製品 精製済みプラスミドとして提供 3 日も短縮！ Start Here Mouse TrueClone™ Vector: f1 ori T7Promoter CMV Promoter MCS SV40 ori pCMV6-Kan / Neo 4906 bp polyA signal Sac I EcoRI Hind III Sma I 適 Kan r/Neo r HSV TK ColE1 PolyA KDR 用 ● 哺乳動物細胞におけるネイティブタンパク質の過剰発現 ● ネイティブタンパク質の機能解析 ● 定量 PCR のテンプレート ● ノーザンブロットや FISH 解析などのハイブリダイゼーションベース のプローブ ● 商品数が豊富 ● TNT などのセルフリーシステムのタンパク質発現 ヒトゲノムの 98% 以上の転写産物を提供しています。その中には Q 他社で取り扱いのないクローニングが難しいクローンもございます。 ● 信頼できる品質 C ● cDNA の 5' 末端および、3' 末端領域のみの配列解析と制限酵素消化の 99% 以上のクローンが PCR 増幅ではなく cDNA ライブラリー由来 断片の大きさを解析することでインサートの確認を行っており、全長 のため、本来の転写産物です。PCR 増幅法によるクローンは、意図 の配列を読んでいません。 しないミューテーションによりお客様の実験に影響を与える可能性 ● 33,000 以上のヒト完全長 cDNA クローンのうち、8,000 クローンにつ があります。 きましては、ORF の配列確認済みでバリアントがないことを確認し ています（品番が TC3 からはじまるもの）。 ● マウス TrueClone™ のインサート配列は全て確認済みです。 5 04 5,000 種類以上の精製ヒトタンパク質 5,000 種類以上の精製ヒトタンパク質 HEK293 細胞で発現させたタンパク質！ 特 適 長 用 ● TrueORF cDNA クローンを使用して作製 ● 最適化された抗体作製のネイティブ抗原 ● 5,000 種類以上の完全長ヒトタンパク質をご用意 ● ELISA など抗体をベースとしたイムノアッセイのポジティブコント ● タンパク質構造、翻訳後修飾や機能を最適に保存 ロール ● 別途、バルクも対応可能（ご照会ください） ● タンパク質間相互作用 ● 発現システム間の比較 ほ乳類 酵母 昆虫 大腸菌 タンパク質の フォールディング と精製 最適 乏しい 低い 乏しい 翻訳後修飾 する 低い 低い しない 確実性と生理活性 天然型 活性あり 乏しい 乏しい 非常に 乏しい バイオケミカルアッセイやセルベース機能アッセイ 性状 品名：精製済リコンビナント完全長ヒトタンパク質 バッファー：10% glycerol, 100 mM glycine, 2 5mM Tris-HCl, pH7.3 保存：-80℃（凍結融解は避けてください） 精製方法：過剰発現タンパク質を抗DDKアフィニティカラムにより精製 タグ：C 末端 Myc-DDK 精製度：>80% by SDS-PAGE 濃度：>50μg/mL kDa 各精製ヒトタンパク質を 20μg ずつアプライ MRI1 GSTK1 SERPINA1 PCBD1 MAPK3 FCN1 NME1 PRKCD EPHB4 TARDBP エンドトキシン：<0.1 EU/μg of protein DDK-tag is the same as FLAG tag. FLAT® is a registered trademark of Sigma-Aldrich. 製品情報 188 メーカー略号：ORG 98 62 49 38 品番 包装 希望販売価格 各精製完全長ヒトタンパク質 TPxxxxxx 20 μg \187,000 ※ 品番の xxxxx は、コスモ・バイオホームページ上の商品検索に タンパク質名を入れて検索してください。 28 17 14 6 3 05 品名 各種 cDNA クローン、ヒト精製タンパク質 商品検索の仕方 コスモ・バイオ HP より オリジンテクノロジー社 HP より コスモバイオホームページ上の商品検索（詳細 ①オリジンテクノロジー社 HP 右上の検索 http://www.cosmobio.co.jp http://www.origene.com 検索、品番検索、抗体検索 ) にてお選びください。 欄にご希望の遺伝子名、タンパク質名を Accession No. からも検索可能です。詳細検索 入力します。 のキーワード検索をしてください。 ● Nuceleotide Sequence,Protein Sequence ● Accession or Catalog Number ● Keyword ②右のプルダウンメニューにより、ご希望の商品名を選択します。 ③右の GO ボタンを押すと検索が開始され、品番が表示されます。 6 ● 希望販売価格 ･･･「希望販売価格」は参考であり、販売店様からの販売価格ではございません。 記載の希望販売価格は２０１０年 8 月１日現在の希望販売価格です。 予告なしに改定される場合がありますので、ご注文の際にご確認下さい。消費税は含まれておりません。 ● 使 用 範 囲 ･･･ ● Protein Domain 記載の商品は全て、「研究用試薬」です。 人や動物の医療用・臨床診断用・食品用等としては使用しないよう、十分ご注意ください。 ● Gene Family
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