日エンドメトリオーシス会誌２０１３；３４：２０７−２１０ 207 〔一般演題／基礎〕マウス子宮内膜症モデルにおける薬用ハーブ・パルテノライドの抗炎症および病巣縮小効果鳥取大学医学部産科婦人科学教室高井緒絵理，谷口文紀，上垣崇，岩部寺川直樹，原田省富夫顕微鏡画像から総表面積を計測した．言子宮内膜症治療薬として，GnRH アゴニスト，．子宮内膜症病巣の組織所見低用量ピル，あるいはプロゲスチン製剤が応用病巣をホルマリン固定し，ヘマトキシリン・されているが，卵巣欠落症状などの副作用のたエオジン（H.E．）染色を行い，組織学的特徴めに長期投与が難しいこと，挙児希望のある患を確認した． Ki６７免疫組織化学染色法により，者には投与しにくいという問題点がある．薬用細胞増殖能を評価した．ハーブの一種であるパルテノライドは，ナツシ．子宮内膜症病巣の遺伝子発現ロギク（フィーバーフュー）から抽出される成病巣組織における遺伝子発現量は，Real time 分で，欧米では古くから片頭痛や関節炎などの RT―PCR で定量した．代表的な炎症性サイトカ緩和に用いられており，抗炎症効果を有するこインである Vascular endothelial growth factor とが知られている．本研究では，マウス子宮内（Vegf ），Interleukin（IL）―６（Il ―６），Leukemia 膜症モデルを用いて，天然型 NFκB 阻害剤で inhibitory factor（Lif ），および Monocyte che- ある薬用ハーブ・パルテノライドの効果につい motactic protein―１（Mcp―１）の遺伝子発現にて評価し，副作用の少ない新しい子宮内膜症治ついて検討した．成療薬の可能性について検討した．績子宮内膜の移植から対象と方法週後には，すべてのマウスにおいて囊胞状の子宮内膜症様病巣が形成．マウス子宮内膜症モデルの作製週齢の BALB／c マウスの卵巣摘出後にエされた．囊胞内容は漿液性で，直径約 ∼ mm ５μg／マウス／ストラジオール吉草酸（E２：０．大であり，多くは腹膜（主に切開創部），腸管週；富士製薬工業）を投与し，性ホルモン動態膜，あるいは子宮周囲にみられた（図を同調させた．＝週間後に，ドナーマウス（n ）から子宮組織を摘出し，約 mm２以下に細切したのちに，レシピエントマウス（n＝１６：パルテノライド群：n＝，対照群：n＝％DMSO（対照群）またはパルテノライド（１０mg／kg／回）を週投与した．投与ドナー卵巣摘出 E2 皮下注射（0.5mg/mouse）パルテノライド腹腔内注射（10mg/kg）子宮摘出）の腹腔内に子宮組織の半分量を注入した．子宮移植直後から AB）．レシピエント卵巣摘出子宮内膜組織注入病巣摘出回腹腔内週間後に，腹腔内に形成された囊胞状の子宮内膜症病巣を摘出した（図）．マウスあたりの病巣の個数と総重量を評価し， 0 図 1 2 3 4 5 6 （週）マウス子宮内膜症モデルの作製 208 高井ほか（A）（B）（C）（D）図マウス子宮内膜症様病巣（A）腹腔内に形成された病巣，（B）摘出した病巣，（C）（D）囊胞の H.E.染色像囊胞組織の内腔は，単層の上皮細胞で形成されモデルで用いられた量の２０％に減量したことており，ヒト子宮内膜症の初期病変に類似したと，子宮内膜組織を移植する際に注射器を用い病理学的特徴を示していた（図ずに注入したことが挙げられる．吉野らは，同 CD）．パルテノライドの投与により，病巣個数はマ様のマウスモデルに，p３８ MAPK 阻害薬を投８個から３．９個に有意に減少しウスあたり平均５．与することにより，マウス腹腔内洗浄液中のIL― ６た．病巣の総重量は対照の約４０％に低下し（６５．６および MCP―１蛋白濃度が低下したことを報 vs. ２９．６mg），総面積も約５０％減少した（５０．３告した〔１〕が，本研究では，それらの蛋白濃２ vs. ２５．７mm ）（図 ABC）．Ki―６７陽性細胞比８％から８．５％に低下した（図率は平均１７． D）．度は検出限界以下であり，比較できなかった．また，本実験で，マウスに腹腔内投与したパル病巣組織における炎症関連遺伝子発現は，パルテノライド量はサプリメントとして経口摂取さテノライド投与群では対照群に比して，れる量よりも多く，至適用量については今後のつの炎症性サイトカイン遺伝子の有意な発現減少がみられた（図 E）．考検討が必要である．これまで私どもは，子宮内膜症細胞の炎症性察サイトカインによる増殖進展機構および類腫瘍月経血逆流説による子宮内膜症の発生を模し性格に着目して研究を展開してきた．まず，子たマウスモデルを確立し，天然型 NF―κB 阻害宮内膜症患者の腹水中には IL―８，Tumor necro- 剤である薬用ハーブ・パルテノライドの効果を sis factor（TNF）α 等のサイトカイン濃度が高検証した．本研究成績から，パルテノライドがいこと，TNFα が NF―κB 経路を介して IL―８産子宮内膜症病巣の縮小や腹腔内炎症を抑える可生を誘導し，子宮内膜症間質細胞の増殖を促進能性が示された．すること，さらに COX―２遺伝子の発現を誘導マウスモデル作製における工夫としては，卵巣摘出後のエストロゲン投与量を従来のマウスして PGE２産生を促進することを明らかにした．〔２―４〕マウス子宮内膜症モデルにおける薬用ハーブ・パルテノライドの抗炎症および病巣縮小効果 209 （A） Number of lesions per mouse （B） 100 ＊ Total weight of lesions per mouse（mg） 8 6 4 2 ＊ 80 60 40 20 0 0 control parthenolide control parthenolide （D） Total volume of lesions per mouse（mm2） 80 ＊ 60 40 20 0 control 25 Ki67positive cells/field （%）（C）＊ 20 15 10 5 0 parthenolide control parthenolide （E）＊＊ 100 50 0 0 50 Parthenolide Control Mcp-1mRNA relative level Lif mRNA relative level 100 0 図 50 （%）＊ Control ＊ 100 Parthenolide Control （%）（%） Il-6mRNA relative level Vegf mRNA relative level （%）＊ 100 50 0 Parthenolide Control Parthenolide マウス子宮内膜症モデルにおけるパルテノライドの効果（A）マウスあたりの病巣個数，（B）総重量，（C）表面積，（D）上皮細胞における Ki６７染色陽性細胞比率，（E）炎症関連遺伝子発現．＊ p＜０．０５；＊＊p＜０．０１ vs. control. 昨年の本学会では，培養子宮内膜症間質細胞までに，急性白血病，乳癌や膵臓癌などにおいにおいて，パルテノライドが NF―κB 経路を介て，パルテノライドの NF―κB 活性阻害によるして IL―８産生を低下させ細胞増殖を抑制する６〕，子宮抗腫瘍効果が明らかにされており〔５，こと，および COX―２遺伝子発現を低下させて内膜症組織の進展にも重要な役割を果たすと考 PGE２産生を抑制することを報告した．えられる． NF―κB は，腫瘍の進展において種々の遺伝これらの成績から，新しい子宮内膜症治療薬子発現制御に関わることが知られている．これの候補として NF―κB 阻害作用を有するパルテ 210 高井ほかノライドに注目した．近年，パルテノライドなどの薬用ハーブは補完代替治療薬として注目されている．パルテノライドは副作用の少ない子宮内膜症薬剤として，術後の疼痛や，再発により長期の薬物治療が必要な患者，挙児希望のある患者などへの応用が期待できるものと考えられる．結論パルテノライドはマウス子宮内膜症モデルにおいて，抗炎症作用および病巣縮小効果を示し，新しい子宮内膜症治療薬となる可能性が示唆された．文献〔１〕Yoshino O et al. FR １６７６５３, a p３８ mitogenactivated protein kinase inhibitor, suppresses the development of endometriosis in a murine model. J Reprod Immunol ２００６；７２：８５−９３〔２〕Taniguchi F et al. TAK１ activation for cytokine synthesis and proliferation of endometriotic cells. Mol Cell Endocrinol ２００９；３０７：１９６−２０４〔３〕Sakamoto Y et al. Tumor necrosis factor-alphainduced interleukin―８（ IL ―８） expression in endometriotic stromal cells, probably through nuclear factor-kappa B activation : gonadotropinreleasing hormone agonist treatment reduced IL― ８ expression. J Clin Endocrinol Metab ２００３；８８：７３０−７３５〔４〕Takenaka Y et al. Lipopolysaccharide promoted proliferation and invasion of endometriotic stromal cells via induction of cyclooxygenase―２ expression. Fertil Steril ２０１０；９３：３２５−３２７〔５〕Jain NK et al. Antinociceptive and antiinflammatory effects of Tanacetum parthenium L. extract in mice and rats. J Ethnopharmacol １９９９；６８：２５１−２５９〔６〕Kwok BH et al. The anti-inflammatory natural product parthenolide from the medicinal herb Feverfew directly binds to and inhibits IkappaB kinase. Chem Biol ２００１；：７５９−７６６