乳製品・グルテン粉・ペットフード中のメラミン分析

乳製品・グルテン粉・ペットフード中のメラミン分析
登録番号 FTD006
１． AgraQuant® MELは、乳製品・グルテン粉・ペットフード中のメラミン測定用ELISAキット
２．定量範囲は2-250ppm
３．有効期限は6ヶ月、冷蔵保存（2～8℃）
■抽出方法
１．ミルク（希釈倍率100）
① 試験管にミルク1mLを分取する。
② メタノール/水：60/40 (v/v)を9mL加え、振とうまたはボルテックスミキサーでよく混合する。
③ この溶液を更に試料希釈液注1で10倍希釈する。
（②の溶液0.1mLに、試料希釈液を0.9mL加える）
注１）試料希釈液は、ELISAキットに同封
２．粉ミルク（希釈倍率500）
① 試験管に粉ミルク1gを量り取る。
② 50℃の水を5mL加え、溶解する。
③ 溶解した溶液1mLを別の試験管へ移す。
④ メタノール/水：60/40 (v/v)を9mL加え、振とうまたはボルテックスミキサーでよく混合する。
⑤ この溶液を更に試料希釈液注1で10倍希釈する。
（④の溶液0.1mLに、試料希釈液を0.9mL加える）
３．グルテン粉（希釈倍率500）
① グルテン粉を均質化する。
② 試験管に0.2ｇを量り取る。
③ 酸性メタノール/水：60/40 (v/v）注2を10mL加える。キャップを閉める。
注２）メタノール/水：60/40 (v/v) 100mLに１N 塩酸を1mL添加し調製する。
④ 1分間ボルテックスミキサーで混合した後、1分間超音波抽出を行う。
⑤ この溶液を更に試料希釈液注1で10倍希釈する。
（④の溶液0.1mLに、試料希釈液を0.9mL加える）
⑥ 遠心分離（10,000rpm、10分間）を行う。
⑦ 上清を0.45μmのフィルターでろ過し、ろ液を分取する。
４．ペットフード（湿）（希釈倍率100）
① 試料はブレンダーでザラザラしたプリン状になるまで均質化する。
② 試験管に2gを量り取る。
③ メタノール/水：60/40 (v/v)を10mL加え、キャップを閉める。
ボルテックスミキサーで１分間混合する。
④ ボルテックスミキサーにかけ、1分間超音波をかける。
⑤ さらにボルテックスミキサーで1分間混合し、5分間静置する。
⑥ 静置して分離した上清を遠心分離（10,000rpm、5分間）にかける。
⑦ 上澄みを0.45μmのフィルターでろ過し、ろ液を分取する。
⑧ この溶液を更に試料希釈液注1で20倍希釈する。
（⑦の溶液0.05mLに、試料希釈液を0.95mL加える）
５．ペットフード（乾）（希釈倍率200）
① 試料は、ブレンダー又はコーヒーグラインダーを使って均質化する。
② 試験管に1gを量り取る。
③ メタノール/水：60/40 (v/v)を10mL加える。キャップを閉める。
④ 1分間ボルテックスミキサーで混合した後、1分間超音波抽出を行う。
⑤ 更に1分間ボルテックスミキサーで混合した後
⑥ 5分間静置し分離させる。
⑦ 静置して分離した上清を遠心分離（10,000rpm、5分間）にかける。
⑧ 上澄みを0.45μmのフィルターでろ過し、ろ液を分取する。
⑨ この溶液を更に試料希釈液注1で20倍希釈する。
（⑧の溶液0.05mLに、試料希釈液を0.95mL加える）
■定量範囲
・粉ミルク、グルテン粉
：10-250 ppm
・ミルク、ペットフード（湿）： 2-50 ppm
・ペットフード(乾）
： 4-100 ppm
＊定量計算に用いるデータシートはホームページの製品一覧からダウンロード可能です。
■回収率
・ミルク（10-50ppm）
： 91-115％
・粉ミルク（10-250ppm）
： 91-128％
・グルテン粉（100-250ppm）
： 102-110%
・ペットフード（湿）(10-40ppm) ： 83-98%
・ペットフード（乾）（40-80ppm) ： 80-95%
■ELISAキット内容
１．抗体コートウェル（12×8ウェル）
２．メラミン標準溶液（0,20,100,500ppb）各2mL
３．メラミン酵素複合体液7mL（緑キャップ）
４．基質液14mL（青キャップ）
５．反応停止液14mL（赤キャップ）
６．試料希釈液100mL
７．20倍濃縮洗浄溶液25mL（青キャップ）
■ELISA操作方法(簡易版）
注）ご使用の際には、キットに同封されている英文取扱い説明書を必ずご確認ください。
最新の情報が記載されています。
１）標準溶液と試料を抗体コート
ウェルに150μLずつ入れる。
２）酵素複合体液を50μLずつ抗体
コートウェルに加え、静かに１分
間攪拌する。室温で30分間静置
する。
３）ウェル内の溶液を捨てる。
ミルク、粉ミルク、ペットフードの
場合は脱イオン水で4回洗浄し、
グルテン粉の場合は洗浄液を
用いる。
４）紙タオルにウェルを叩き付け、
水滴を完全に除く。
５）基質液を1ウェルにつき100μL
ずつ加え、室温で30分間静置す
る。
６）反応停止液を1ウェルにつき
100μLずつ加える。
７）マイクロプレートリーダーで
450nmと副波長630nmの吸
光度を読み取る。

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