JP 2012-223171 A 2012.11.15 (57)【要約】 【課題】新規有胞子性乳酸菌、光学純度の高いＬ−乳酸 の効率的な製造方法及び新規有胞子性乳酸菌を含む食品 および薬品に関する。 【解決手段】 スクロースからの乳酸の生成が陽性であ ることを特徴とする新規な有胞子性乳酸菌バチラスコア ギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ） Ｆ６−２株を用い、スクロース、酵母エキスを含有する 培地で増殖させることにより光学純度に優れたＬ−乳酸 の生産性を非常に高めることができる。また、新規有胞 子性乳酸菌バチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）Ｆ６−２株を含有する食品或い は医薬品を特徴とする。 【選択図】図１ (2) JP 2012-223171 A 2012.11.15 【特許請求の範囲】 【請求項１】 スクロースからの乳酸の生成が陽性であることを特徴とする有胞子性乳酸菌バチラスコ アギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）Ｆ６−２株。 【請求項２】 請求項１記載の有胞子性乳酸菌バチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇ ｕｌａｎｓ）Ｆ６−２株をスクロース、酵母エキスを含有する培地で増殖させることを特 徴とするＬ−乳酸の製造方法 【請求項３】 請求項１記載の有胞子性乳酸菌バチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇ 10 ｕｌａｎｓ）Ｆ６−２株を用いて培地温度４０−７０℃、ｐＨ５∼８に保ちながら乳酸発 酵するＬ−乳酸製造方法。 【請求項４】 請求項１記載の有胞子性乳酸菌バチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇ ｕｌａｎｓ）Ｆ６−２株を含有することを特徴とする食品。 【請求項５】 請求項１記載の有胞子性乳酸菌バチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇ ｕｌａｎｓ）Ｆ６−２株を含有することを特徴とする医薬品。 【発明の詳細な説明】 【技術分野】 20 【０００１】 本発明は新規有胞子性乳酸菌、光学純度の高いＬ−乳酸の効率的な製造方法及び該有胞 子性乳酸菌を含む食品および薬品に関する。 【背景技術】 【０００２】 微生物バチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）は耐熱性乳 酸菌として知られており、１９４９年に中山らが胞子の形をした菌として分離したもので ある。（非特許文献１）。また、乳酸を大量に生成する乳酸菌は基本的にどの菌も便秘、 軟便の改善を行う整腸効果が知られており、広く実用に供されている技術である。 【０００３】 30 とりわけバチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）はコレス テロール低減（特許文献１）やインフルエンザウィルス予防（特許文献２）効果があるこ とが報告されている有用菌でもある。 【０００４】 一方、バチラスコアギュランスを含む乳酸菌は糖分を代謝し、乳酸を合成することも知 られている。乳酸は食品分野では酸味料あるいは保存料として、誘導体化され、例えば乳 酸カルシウムとして幅ひろく利用されている。更に、乳酸は工業分野では乳酸エチルのよ うに溶媒として、あるいは化学的に重合しポリ乳酸にすることによりフィルム、繊維ある いはプラスチックとして利用することができる。重合された乳酸ポリマーは石油由来では ない植物由来ポリマーであり、優れた生分解性、機械的性質、成形性を有することから、 40 将来、石油由来ポリマーの代替ポリマーの１つとして有望視されている。 【０００５】 乳酸発酵では、先ず糖質資源であるコーン、さつまいも等に含有される多糖類である“ でんぷん”をアミラーゼなどの酵素で加水分解し、単糖類であるグルコースに転化する。 次に、適度な栄養源のもと乳酸菌を増殖させ、乳酸菌によりグルコースを乳酸に転化させ る。あるいはサトウキビ、てんさいのショ糖を直接乳酸菌で発酵し乳酸を得ることもでき る。ただし、乳酸発酵においては、微生物が活動する適切なｐＨ（４−１０程度）が存在 し、この範囲外のｐＨでは乳酸菌の活動が停滞あるいは死滅するため、培地のｐＨを一定 に保つ必要があり、中和剤の添加しながら発酵を進める。中和剤としてはアンモニア、炭 酸カルシウム、苛性ソーダ等のアルカリ剤が使用され、乳酸は発酵溶液中に乳酸アンモニ 50 (3) JP 2012-223171 A 2012.11.15 ウムや乳酸カルシウムのような乳酸塩として存在することになる。バッチ式による乳酸発 酵では溶液中の乳酸塩濃度が５−２０ｗｔ％程度まで乳酸発酵を進めることができる。 【０００６】 乳酸発酵が終了した時点で乳酸は単離精製する必要がある。例えば、硫酸を添加し、乳 酸塩から硫酸塩として沈殿・濾別除去した後に、残った乳酸を電気透析、膜分離を行い、 最終的に蒸留により精製する。あるいは、低分子アルコールにより乳酸とアルコールのエ ステル化を進め、エステルとして蒸留することもできる。この場合、得られた乳酸エステ ルは加水分解し、アルコールと乳酸に分離させ乳酸を精製する。 【０００７】 乳酸発酵を行う菌としてはラクトバチラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクト 10 コッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃ ｕｓ）属などの細菌微生物、リゾパスオリザエ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）属の ような真菌が知られている。 【０００８】 リゾパスオリザエ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）の栄養要求性が低い利点はある ものの、乳酸生成速度は低く１０％程度の発酵液を得るために２週間も要する。また、糖 質分の７０％程度しか消費しないので、糖分利用効率としては良いとは言えない 【０００９】 バチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）は耐熱性乳酸菌で あるので４０℃から７０℃にかけて発酵が可能である。５０℃以上の発酵では無滅菌培地 20 状態で乳酸発酵することが可能であり、通常乳酸発酵に必要な滅菌装置が不必要で経済的 に有利である。例えば、非特許文献２においては、生ゴミからの無滅菌乳酸発酵がバチラ スコアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＮＢＲＣ１２５８３により 行われている。これによれば、ラクトプランタラム（Ｌａｃｔ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）菌 株では４５℃以上ではほとんど、菌体の増殖が行われないが、バチラスコアギュランス（ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）ＮＢＲＣ１２５８３菌株では７０℃近くまで菌 体の増殖、発酵が可能であることが開示されている。 【００１０】 しかしながら、上記のバチラスコアギュランスＮＢＲＣ１２５８３の培養液１Ｌ当たり 、１時間の平均乳酸発酵速度は１．３６ｇ／Ｌ／ｈと生産性は低い結果しか示されていな 30 い。さらに、乳酸に対して酢酸も１２％程度生成し、乳酸を目的とした発酵としては良い 結果とは言えない。また、特許文献３では、バチラスリンチェニフォルマイス（Ｂａｃｉ ｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ＴＹ７を用いた高温無滅菌乳酸発酵がＭＲＳ培 地によりなされているが、生産性は２．５ｇ／Ｌ／ｈ程度である。 【００１１】 酵母エキス（Ｙｅａｓｔ）を乳酸菌増殖栄養源として使用し乳酸発酵を行う事例は公知 の事実であり多数報告されている。例えば非特許文献３においては、滅菌処理した廃糖蜜 培地に酵母エキスの量を変化させて、エンテロコッカスファエカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏ ｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）ＲＫＹ１乳酸菌株による乳酸発酵量と栄養源の関係を詳細 に検討している。その結果表１に示すような酵母エキスと生産性の関係が得られている。 酵母エキス５ｇ／Ｌでは乳酸生産性は０．９ｇ／Ｌ／ｈであるのに対して酵母エキス２０ ｇ／Ｌでは５．３ｇ／Ｌ／ｈと増加する。このように酵母エキス量と乳酸生産性は明確な 関係がある。しかしながら酵母エキスは多く使用すると発酵速度は向上するものの高価で あるため、経済的に不利となる。 【００１２】 40 (4) JP 2012-223171 A 2012.11.15 【表１】 10 【００１３】 つまり、酵母エキスの量が増加するほど乳酸発酵速度は増加し、酵母エキスの乳酸菌増 殖の栄養源としての明確な効果が認められている。この実験では酵母エキスの量が２０ｇ ／Ｌ以上で乳酸の生産速度が５ｇ／Ｌ／ｈを超える。 【００１４】 非特許文献４では同じくＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ ＲＫＹ１を用 いてコーンスティープリカー（ＣＳＬ）により乳酸発酵を行っている。この文献によれば 、乳酸１００ｇを生成するために表２示すようにコーンスティープリカー（ＣＳＬ）を０ −２５ｇ培地に添加すると発酵時間７８−２４ｈが必要であることがわかる。平均発酵速 度は１．２１−４．１４ｇ／Ｌ／ｈとなっている。この実験でも乳酸の生産速度が遅く、 20 ＣＳＬの量が２５ｇ／Ｌでも５ｇ／Ｌ／ｈには到達しない。 【００１５】 【表２】 30 【先行技術文献】 【特許文献】 【００１６】 【特許文献１】特開２０１０−９５５３２ 【特許文献２】特開２００８−１３５４３ 【特許文献３】特開２００６−３３３８４７ 40 【非特許文献】 【００１７】 【非特許文献１】日本農芸化学会誌 Ｖｏｌ．２３ Ｎｏ．１２（１９４９）ｐ．５１３ −５１７ 【非特許文献２】Ｋｅｎｊｉ Ｓａｋａｉ ａｎｄ Ｙｕｔａｋａ Ｅｚａｋｉ，Ｏｐｅ ｎ Ｌ−Ｌａｃｔｉｃ Ａｃｉｄ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｒｅｆ ｕｓｅ Ｕｓｉｎｇ Ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｉｃ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎ ｓ ａｎｄ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓｅ Ｉｎ ｓｉｔｕ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｓｃ ｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，１０１−６（２００６），ｐｐ． 50 (5) JP 2012-223171 A 2012.11.15 ４５７−４６３ 【非特許文献３】Ｙｏｕｎｇ−Ｊｕｎｇ Ｗｅｅ，Ｊｉｎ−Ｎａｍ Ｋｉｍ，Ｊｏｎｇ− Ｓｕｎ Ｙｕｎ，Ｈｗａ−Ｗｏｎ Ｒｙｕ，Ｕｔｉｌａｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｇａｒ ｍｏｌａｓｓｅｓ ｆｏｒ ｅｃｏｎｏｍｉｃａｌ Ｌ（＋）−ｌａｃｔｉｃ ａｃｉ ｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｂａｔｃｈ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｎ ｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ，Ｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３５（２００４）ｐｐ．５６８−５７３ 【非特許文献４】Ｈｕｒｏｋ Ｏｈ，Ｙｏｕｎｇ−Ｊｕｎｇ Ｗｅｅ，Ｊｏｎｇ−Ｓｕｎ Ｙｕｎ，Ｓｅｕｎｇ Ｈｏ Ｈａｎ，Ｓａｎｇｗｏｎ Ｊｕｎｇ，Ｈｗａ−Ｗｏｎ Ｒ ｙｕ，Ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ａｇｒｉｃｕｌｔｕ 10 ｒａｌ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ａｓ ｃｈｅａｐ ｒａｗ ｍａｔｅｒｉａｌｓ，Ｂｉｏ ｒｅｓｏｕｒｃｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９６（２００５）ｐｐ．１４９２−１４９８ ． 【非特許文献５】Ｔｉｎａ Ｍｉｃｈｅｌｓｏｎ，Ｋａｒｉｎ Ｋａｓｋ，Ｅｎｅ Ｔａ ｌｋｓｅｐ，Ｉｎｄｒｅｋ Ｓｕｉｔｓｏ，Ａｌｌａｎ Ｎｕｒｋ，Ｌ（＋）−Ｌａｃｔ ｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｅｒ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ ＳＩＭ７ ＤＳＭ １４０４３ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ Ｌａｃｔｏ ｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｓｐ．Ｌａｃｔｉｓ ＤＳＭ ２００７ ３，３９（２００６）ｐｐ．８６１−８６７． 【発明の概要】 20 【発明が解決しようとする課題】 【００１８】 以上の技術背景を考慮し、発明者らは無滅菌スクロース培地において、高速かつ安定し た乳酸発酵を行うため、バチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎ ｓ）のスクリーニングを行い、ついに耐熱性の高い新規菌株バチラスコアギュランス（Ｂ ａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）Ｆ６−２株を完成するに至った。又、該菌株を使 った光学純度の高く生産速度の大きいＬ−乳酸の製造方法を完成した。さらに、該乳酸菌 を使用した食品或いは医薬品を開発するに至った。以下にその説明をする。 【課題を解決するための手段】 【００１９】 30 本発明の１は、スクロースからの乳酸の生成が陽性であることを特徴とする有胞子性乳 酸菌バチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）Ｆ６−２株であ ることを特徴とすることもできる。 【００２０】 本発明の２は、本発明の１記載の有胞子性乳酸菌バチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌ ｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）Ｆ６−２株をスクロース、酵母エキスを含有する培地で増 殖させるＬ−乳酸の製造方法であることを特徴とすることもできる。 【００２１】 本発明の３は、本発明の１記載の有胞子性乳酸菌バチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌ ｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）Ｆ６−２株を用いて培地温度４０−７０℃、ｐＨ５∼８に 40 保ちながら乳酸発酵するＬ−乳酸製造方法であることを特徴とすることもできる。 【００２２】 本発明の４は、本発明の１記載の有胞子性乳酸菌バチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌ ｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）Ｆ６−２株を含有する食品を特徴とすることもできる。 【００２３】 本発明の５は、本発明の１に記載の有胞子性乳酸菌バチラスコアギュランス（Ｂａｃｉ ｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）Ｆ６−２株を含有する医薬品を特徴とすることができる 。 【発明の効果】 【００２４】 50 (6) JP 2012-223171 A 2012.11.15 本発明の新規有胞子性乳酸菌バチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕ ｌａｎｓ）Ｆ６−２株は、糖質源としてスクロース、酵母エキスを含有する培地において 、温度４０−７０℃およびｐＨ５∼８に保つことで乳酸発酵ができるものである。したが って、従来のデンプン等の糖質源をアミラーゼ酵素で糖化処理していた工程あるいはスク ロースをスクラーゼ酵素でグルコース、フルクトースに分解していた工程を省くことがで きる。また、発酵速度（単位体積・時間あたりの乳酸生成量）は極めて速く、従来使用す る酵母エキス量と同量で、２倍以上発酵速度が得られるため、能率の良い乳酸発酵が可能 であり、乳酸発酵時間およびコストを大幅に低下させることができる。 【図面の簡単な説明】 【００２５】 10 【図１】 本実施例の乳酸発酵温度と生成乳酸量との関係である。 【図２】 本実施例の乳酸発酵時のｐＨと生成乳酸量との関係である。 【図３】 本実施例の人工胃酸試験時間と乳酸菌数の関係である。 【発明を実施するための最良の形態】 【００２６】 本発明の１の乳酸菌バチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ ）Ｆ６−２株は、次に示す菌学的性質を有する。 （１）菌の形態 直径の大きさ ：０．８∼０．９μｍ 細胞の形状 ：桿状 20 運動性 ：なし 芽胞形成 ：あり （２）菌の生理学的性質 酸素 ：好気性、通性嫌気性、嫌気性でも生育 グラム染色 ：不定 グルコース ：陽性 フルクトース ：陽性 スクロース ：陽性 マンノース ：陽性 メリビオース ：陽性 30 マルトース ：陽性 【００２７】 上記乳酸菌バチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）Ｆ６− ２株は独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物奇託センターに平成２２年１２月２ ０日付けでＮＩＴＥＰ−１０２２として寄託されている。以下、図表を用い実施例に基づ いて本発明の乳酸菌、Ｌ−乳酸製造方法を詳細に説明する。 【実施例１】 【００２８】 準備した発酵培地を攪拌装置付きの発酵槽に入れる。その後、同様の培地で、発酵培地 の１％の容量で予め２４ｈ発酵を行った植菌用乳酸発酵液を植菌する。発酵中は攪拌棒を ５０ｒｐｍに保ち、攪拌を行う。発酵培地には表３に示した組成の培地を使用した。 【００２９】 40 (7) JP 2012-223171 A 2012.11.15 【表３】 10 【００３０】 本発明１の乳酸菌が増殖し、発酵が進むと次第に低下するｐＨを６．０に保つために、 ２８％アンモニア水をポンプで逐次滴下する。発酵槽温度は５３℃に保った。発酵終了後 に発酵液をＨＰＬＣで分析し乳酸量を決定した。 【００３１】 表４はバチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）Ｆ６−２株 による乳酸発酵結果である。酵母エキス１０ｇ／Ｌにおいて、平均乳酸生成速度は７．６ ６ｇ／Ｌ／ｈに達した。最大発酵速度は酵母エキス１２．５ｇ／Ｌにおいて１６．９ｇ／ Ｌ／ｈに達した。酵母エキス１５ｇでは発酵時間は１１．９時間で終了しており、バチラ スコアギュランスＦ６−２は極めて高速な乳酸発酵を行うことが判明した。これらの乳酸 20 生産速度は上述した従来の文献（非特許文献３、４）のチャンピオンデータよりもはるか に大きいことがわかる。 【００３２】 【表４】 30 【実施例２】 【００３３】 比較例のため、バチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）Ｎ ＢＲＣ１２５８３、バチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ） ＳＩＭ−７ ＤＳＭ１４０４３を使って同様に発酵を行った。培地は表３のものを使用し 、酵母エキスは５ｇ／Ｌとした。培地ｐＨは６．０に保持し、発酵槽温度は５３℃とした 。 【００３４】 40 (8) JP 2012-223171 A 2012.11.15 【表５】 10 【００３５】 結果を表５に示す。表５からわかるように、比較例ではスクロース培地で乳酸発酵試験 を行ったが、バチラスコアギュランスＳＩＭ７ ＤＳＭ１４０４３およびバチラスコアギ ュランスＮＢＲＣ１２５８３ともに、スクロース培地では極めて発酵速度が本発明に比べ て１／１００∼１／１０と遅いことが判明した。 【００３６】 非特許文献５においてはバチラスコアギュランスＳＩＭ−７ ＤＳＭ１４０４３株をグ ルコース培地（１２７ｇ／Ｌ）において、酵母エキス７．５ｇ／Ｌで乳酸発酵を行ってい 20 る。この場合、平均乳酸発酵速度は２．８ｇ／Ｌ／ｈであり、本発明の乳酸生産速度に比 べて格段に遅いことがわかる。 【実施例３】 【００３７】 最適な乳酸発酵温度を調べる目的で、表３の発酵培地（酵母エキス５ｇ／Ｌ）において 、発酵温度を変化させた。発酵実験は全て２４ｈで強制的に終了させ、ＨＰＬＣによる乳 酸分析を行った。培地ｐＨは６．０に保ちながら乳酸発酵を行った。 【００３８】 図１は発酵培地を有機酸分析ＨＰＬＣで分析し、生成乳酸量を調べ、発酵温度との関係 を示したものである。図に示されるように温度５３℃で最も乳酸生産性が良いことが判明 30 した。即ち、本発明のバチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ ）Ｆ６−２株による乳酸発酵においては５３℃という高温でも十分に大きい乳酸発酵速度 を有する。特にこうした高温で発酵を行うと他の細菌の感染・増殖を抑えることができ、 発酵後の滅菌が必要なくなり工業的に大きなメリットである。 【実施例４】 【００３９】 発酵温度５３℃における最適な乳酸発酵ｐＨを調べる目的で、表３の発酵培地（酵母エ キスは５ｇ／Ｌ）において、発酵培地ｐＨを変化させ、乳酸発酵実験を行った。乳酸発酵 実験は全て２４ｈで強制終了し、ＨＰＬＣによる乳酸分析を行った。 【００４０】 40 図２に実験結果を示す。図に示されるように、ｐＨ６．０において乳酸生産性が最も高 いことが判明した。 【実施例５】 【００４１】 実施例４における発酵乳酸２Ｌをロータリーエバポレーターで１１０℃、８０ｔｏｒｒ に保ちつつ１５％まで濃縮した。その後、乳酸モル量の０．５モルに相当する濃硫酸を加 え、乳酸アンモニウムからアンモニウムイオンを遊離させ、硫安を塩析させた。硫安は遠 心分離機を用いて、２３４０Ｇ、１０分で固液分離した。液体分はジムロート冷却管付き の三口フラスコに投入した。ジムロート冷却管は液体窒素トラップを介して真空コントロ ーラー付き真空ポンプに繋げた。フラスコはオイルバスで１２０℃から２００℃に２ｈか 50 (9) JP 2012-223171 A 2012.11.15 けて段階的に加熱し、真空度を５００ｔｏｒｒから１０ｔｏｒｒまで低下させ、縮合した 。その後、オクチル酸スズを０．３％加え、さらに２００℃、１０ｔｏｒｒ、２ｈ縮合し た後、ジムロート管を外し、ジムロート管の代わりに、留去用フラスコを取り付け、再び ２００℃、１０ｔｏｒｒで減圧した。三つ口フラスコ内で還流しているラクチドを留去用 フラスコに３時間かけて留去した。この時、ラクチドの歩留りは乳酸からの理論歩留りに 対して８２％であった。 【００４２】 このラクチドを光学異性体分離カラム（ＣＰ−Ｃｙｃｒｏｄｅｘｔｒｉｎ−β−２，３ ，６−Ｍ−１９）を備えたガスクロマト分析システム（島津ＧＣ−２０１０）にて分析を 行ったところ、乳酸の光学純度はＬ−乳酸９８．４％であった。したがってバチラスコア 10 ギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）Ｆ６−２を使用することで、光学 純度の高いＬ−乳酸発酵の製造が可能であることが判明した。 【実施例６】 【００４３】 実施例４における固形分離した菌体を純水で洗浄、濾別した後、温風乾燥機内で６０℃ 、１３５分間乾燥した。さらに真空デシケーターで１０ｔｏｒｒ、２４ｈ常温乾燥した。 （菌体Ａ） 【００４４】 実施例４における固形分離した固形分を純水で洗浄、濾別した後、温風乾燥機内で６０ ℃、１８０分乾燥した。さらに、電気炉（５０℃）で４８ｈ乾燥した。（菌体Ｂ） 20 【００４５】 試験管内に純水１０ｍｌおよび０．５２ｇＭＲＳを含む液体培地に上記で回収した菌体 をそれぞれ植菌し５０℃の恒温槽内に保持した。発酵実験後、菌体Ａは６時間で発酵が確 認できた。菌体Ｂは全く発酵しなかった。 【実施例７】 【００４６】 実施例１におけるバチラスコアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ） Ｆ６−２を人工胃液９ｍｌ（０．２％ＮａＣｌ、０．３５％ペプシン（１：５０００）、 １Ｍ ＨＣｌでｐＨ２．０およびｐＨ３．０に調整）に１ｍｌ（菌体乾燥重量０．００５ ｇ（０．００５％））添加し、３７℃、１、２、３、４時間ずつ処理した。その後、各処 30 理液を１０の７乗および８乗に希釈した。その希釈液からスパチュラで表３に示した組成 の寒天培地に植菌して５０℃で培養した。２４時間後にコロニー数をカウントし、生菌数 を推定した。その結果を図３に示す。図３からわかるように、本菌体はｐＨ２および３に おいて菌数の減少が少なく、胃酸に耐えうる菌であることが判明した。 【産業上の利用可能性】 【００４７】 本発明の乳酸菌により、スクロースから、少ない酵母エキス等の栄養源で有胞子乳酸菌 および乳酸を製造することができる。また、製造された乳酸菌は耐酸性に優れ、食品およ び医薬品として広く使用することができる。乳酸発酵速度も極めて高く、製造された乳酸 は光学純度が高いＬ−乳酸であるため、食品添加物あるいはポリ乳酸等のポリマー等にも 使用することができ、安価なＬ−乳酸を提供することができる。 40 (10) 【図１】 【図２】 【図３】 JP 2012-223171 A 2012.11.15 (11) JP 2012-223171 A 2012.11.15 フロントページの続き (51)Int.Cl. ＦＩ テーマコード（参考） Ａ６１Ｐ 1/12 (2006.01) Ａ６１Ｐ 1/12 Ｃ１２Ｒ 1/07 (2006.01) Ｃ１２Ｎ 1/20 Ａ Ｃ１２Ｒ 1:07 Ｆターム(参考) 4C087 AA01 AA02 BC64 NA14 ZA66 ZA72 ZA73
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