Poster

LEUKEMIA INHIBITOR FACTOR (LIF)’in SIĞIR EMBRĐYO GELĐŞĐMĐ ÜZERĐNE
ETKĐSĐ
Özlem Celasin 1, Arzu Çaputçu Taş1, Sezen Arat1
1. TÜBĐTAK, MAM-Gen Mühendisliği ve Biyoteknoloji Enstitüsü, Gebze, Kocaeli,
[email protected]
SONUÇ
GĐRĐŞ
Nüklear Transfer(NT) ve Đn Vitro Fertilizasyon (IVF) ile sığır embriyosu üretimi,
genetik kaynakların korunması, transgenik hayvanların oluşturulması ve hayvan
ıslahı konusunda önemli bir yer tutmaktadır. Bu teknolojiler ile nesli tükenmekte
olan bireylerin geri kazandırılması sağlanabilmektedir. Büyüme faktörlerinin
embriyo gelişimi üzerine olumlu etkileri olduğu gösterilmiştir.
Leukemia inhibitor faktör (LIF) bir sitokindir ve blastosistin implantasyonu ve
gebeliğin devamı için gerekli olduğu düşünülmektedir. In vitro elde edilen sığır
blastosistlerinden LIFr ve gp130 transkipsiyon faktörü, implantasyon öncesi
dönemde salgılanırken in vivo embriyolar da moruladan hatch blastosist safhasına
kadarki zaman süresince salgılanır. LIF aynı zamanda kök hücrelerin
farklılaşmamasını da sağlayan bir faktördür.
Bu çalışmada; in vivo dönemde salgılanan LIF’in embriyo kültür ortamına
eklenmesinin blastosist gelişimine etkileri araştırılmıştır. Sonuçlara göre; LIF’in
serum varlığında blastosist gelişimi üzerine olumlu etkileri olduğu gösterilmiştir.
MATERYAL ve METOD
Olgunlaşmamış sığır yumurtaları mezbaha materyalinden aspire edilerek elde
edilmiştir. Aspirasyonu takiben; %10 FCS, 50 µg/ml sodyum piruvat, 50ng/ml
EGF, 5 µg/ml bLH, 0.5 µg/ml bFSH, 100ng/ml IGF-1 ve %1 penisilin/streptomisin
içeren TCM199 medyumunda 38,5◦C %5CO2’li inkübatörde 18 saat tutularak
olgunlaştırılmıştır. Olgunlaşan yumurtalara 133V/500µm 30µs 1 atış yapılarak
füzyon uygulanmış ve sonrasında CaI ile 5 dk (5µM), CD (2.5
µg/ml)+Cycloheximide (CHX, 10µg/ml) kombinasyonu ile 1 saat ve CHX ile 4
saat muamele edilerek aktive edilmişlerdir.
Aktivasyondan sonra füzyon çiftleri 8mg/ml BSA’lı Sage cleavage®
medyumunda 72 saat kültüre edildikten sonra üç gruba ayrılmıştır. Gruplar
aşağıdaki gibidir:
1.grup: Sage + 4mg/ml BSA+%5FCS,
2.grup: Sage + 4mg/ml BSA+%5FCS+1000U/ml LIF
3.grup: Sage + 4mg/ml BSA + 1000U/ml LIF
Đn vitro çalışmalarda fazla sayıda ve yüksek kalitede blastosist elde edilmesi
hedeflenir. Yaptığımız çalışma ile de kültür ortamına ilave edilen LIF’in blastosist
gelişimine etkisi araştırılmıştır.
Bölünme oranları karşılaştırıldığında ikinci grubun oranının (%57,69) diğer iki gruba
(1; %51,22 ve 3; %33,93) göre yüksek olduğu tespit edilmiştir. Đstatistiki olarak
değerlendirildiğinde; birinci ve ikinci grup arasında anlamlı fark görülmezken
üçüncü grup ile diğer gruplar arasında anlamlı fark görülmüştür (p ≥0,05).
Blastosist gelişim oranları incelendiğinde ise; ikinci grubun blastosist gelişiminin
(%18,27) diğer gruplara (1; %14,23 ve 3; %5,38) göre yüksek olduğu görülmüştür.
Đkinci ve üçüncü grup arasında anlamlı fark görülmüştür (p ≥0,05).
Blastosistlerin total hücre sayıları Hoechst boyası ile boyanmıştır. Hücre sayıları
değerlendirildiğinde gruplar arasında anlamlı fark bulunmamıştır (Tablo 1).
Sonuç olarak; serumlu medyum ortamına ilave edilen 1000U/ml LIF’in blastosist
gelişimi üzerine olumlu etkisi olduğu görülmüştür. Elde edilen sonuç daha önce
büyüme faktörleri ile yaptığımız çalışmalar ile benzerlik göstermektedir. Serum
ilavesi olmadan eklenen büyüme faktörleri yada LIF’in blastosist gelişimini
sağladığı fakat istenen sayıda blastosist gelişimine imkan vermediği belirlenmiştir.
Bu çalışma ile denemeler devam etmektedir.
Tablo 1: LIF’in Blastosist Gelişimi Üzerine Etkisi
LIF’in Blastosist Gelişimi Üzerine Etkisi
GRUPLAR
Oosit Sayısı
Bölünme Oranları
Blastosist Oranları
Blastosist Hücre Sayı
Ortalama
GRUP 1
(4 mg/ml BSA+%5 FCS)
274
126/246
%51,22
35/246
%14,23
91,91
GRUP 2
(4 mg/ml BSA+%5 FCS+1000U/ml
LIF)
104
60/104
%57,69
19/104
%18,27
94,82
GRUP 3
(4 mg/ml BSA +1000U/ml LIF)
56
19/56
%33,93
3/56
%5,38
72
ayrılarak Sage blastocyst® medyumunda 4 gün daha kültüre edilmişlerdir.
Bölünme ve blastosist oranları Oneway-Anova testi ile istatistiki olarak
değerlendirilmiştir.
Elde edilen blastosistler Hoechst boyası ile boyanarak total hücre sayıları tespit
edilmiştir.
Resim 2: Sage + 4 mg/ml BSA +
%5FCS + 1000 U/ml LIF grubundan
elde edilen blastosist
Resim 3: Sage + 4 mg/ml BSA + 1000
U/ml LIF grubundan elde edilen
blastosist
Resim 1 : Sage + 4 mg/ml BSA + %5FCS grubundan elde edilen
blastosist
Bu çalışma TÜBĐTAK-KAMAG 106G005 projesi ile desteklenmiştir. www.turkhaygen.gov.tr

Download Report