LC Technical Note 清涼飲料水中のカテキン類の分析　第2報 145 GL Sciences Inc. GL7700高速液体クロマトグラフィーを用いた、カテキン類の分析をご紹介します。今回、カテキン８成分・カフェイン・没食子酸の計１０成分をUV検出器と電気化学検出器（ECD）を直列に接続して分析しました。 UV検出器で感度の得られにくい成分[ガロカテキン（GC）やエピガロカテキン（EGC）]などに対して、ECDではより高感度に分析できましたのでご報告します。 (R. Hirano) カテキン類10成分の標準品分析例 1. Gallic acid 2. Gallocatechin 3. Epigallocatechin 4. Catechin 5. Caffeine 6. Epigallocatechin gallate 7. Epicatechin 8. Gallocatechin gallate 9. Epicatechin gallate 10. Catechin gallate UV検出器 mAU 4 1 (GA) (GC) (EGC) (C) (EGCG) (EC) (GCG) (ECG) (CG) ( 1 mg/L) ( 1 mg/L) ( 1 mg/L) ( 1 mg/L) ( 1 mg/L) ( 1 mg/L) ( 1 mg/L) ( 1 mg/L) ( 1 mg/L) ( 1 mg/L) 5 2 10 9 8 6 7 4 2 0 3 0 10 30 1. Gallic acid 2. Gallocatechin 3. Epigallocatechin 4. Catechin 5. Caffeine 6. Epigallocatechin gallate 7. Epicatechin 8. Gallocatechin gallate 9. Epicatechin gallate 10. Catechin gallate 0.6 uA 0.8 電気化学検出器（ECD） 20 Time (min) 40 (GA) (GC) (EGC) (C) (EGCG) (EC) (GCG) (ECG) (CG) ( 1 mg/L) ( 1 mg/L) ( 1 mg/L) ( 1 mg/L) ( 1 mg/L) ( 1 mg/L) ( 1 mg/L) ( 1 mg/L) ( 1 mg/L) ( 1 mg/L) 1 0.4 2 7 4 10 6 0.2 3 9 8 5 0 HPLC 条件・システム・カラム・温度・　検出器・　注入量・　流速 10 20 Time (min) 30 ・　溶離液 GL7700 HPLC system InertSustain C18 (5 m, 150 x 4.6 mm I.D.) 40℃ UV 280 nm ECD 1200 mV vs Ag/AgCl (ED723, Diamond) 10 μL　1.0 mL/min バックナンバーやアプリケーション検索はこちらから・・・ 40 : A) 0.1% H3PO4 in H2O (pH 2.1)*　B) CH3OH/CH3CN = 9/1, v/v Time(min) 0.0 15.0 30.0 30.1 40.0 A（vol％） 90 80 60 90 90 B（vol％） 10 20 40 10 10 *超純水1 Lに特級りん酸（85%）1mLを添加したもの http://www.gls.co.jp/hplc.html GL Sciences　LC　Technical　Note 検量線－UV（GC、EGC：0.5～10 μg/mL、その他８成分：0.1～10 μg/mL） 350000 350000 GA GC C EGCG ECG 面積 250000 200000 R = 0.9999 EGC Caffeine EC GCG CG 300000 250000 R2 = 0.9999 150000 面積 300000 2 R2 = 0.9984 100000 R2 = 0.9999 150000 R2 = 0.9996 100000 R2 = 0.9999 50000 200000 R2 = 0.9999 R2 = 0.9999 50000 R2 = 0.9999 0 R2 = 0.9996 0 0 2 4 6 8 10 12 0 2 4 6 濃度（μg/mL） 8 10 12 濃度（μg/mL）検量線－ECD（0.05～1 μg/mL） 300000 300000 200000 200000 150000 R2 = 0.9990 R2 = 0.9999 100000 R2 = 0.9998 R2 = 0.9999 EGC Caffeine EC GCG CG 250000 面積 250000 R2 = 0.9997 R2 = 0.9999 150000 R22 = 0.9994 R = 0.9929 100000 50000 50000 0 0 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 0 0.2 0.4 濃度（μg/mL） 0.6 0.8 1 濃度（μg/mL）実サンプル分析例① ＜前処理方法＞試料をGLクロマトディスク25A(0.45μm) でろ過後、超純水で10倍希釈 5 6 8 1 市販ペットボトル入り緑茶(UV) 2 9 10 4 3 7 0 mAU mAU 2 20 5 10 0 1 40 拡大図 9 7 10 0 3 4 20 Time (min) 8 6 2 0.6 市販ペットボトル入り緑茶(ECD) 20 Time (min) 30 5 2 0 0.4 3 4 20 Time (min) 8 7 40 拡大図 9 10 0.2 1 6 40 ＜前処理方法＞試料をGLクロマトディスク25A(0.45μm) でろ過後、超純水で100倍希釈 2 3 5 6 8 4 7 1 9 10 uA 10 0.26 0.28 0.30 0.32 0.34 0 uA 面積 R2 = 0.9994 R2 = 0.9999 GA GC C EGCG ECG 0 10 20 Time (min) 30 40 1.2 GL Sciences　LC　Technical　Note 実サンプル分析例② ＜前処理方法＞試料をGLクロマトディスク25A(0.45μm) でろ過後、超純水で10倍希釈 5 6 8 9 1 市販ペットボトル入り烏龍茶(UV) 10 2 4 3 7 0 mAU mAU 2 20 5 10 0 1 拡大図 10 7 0 3 9 4 40 8 6 2 20 Time (min) 10 20 Time (min) 市販ペットボトル入り烏龍茶(ECD) 30 uA uA 0.6 ＜前処理方法＞試料をGLクロマトディスク25A(0.45μm) でろ過後、超純水で100倍希釈 2 5 6 8 1 3 9 10 7 4 5 20 Time (min) 0.4 0 2 3 6 4 8 拡大図 9 7 40 10 0.2 1 40 0.20 0.22 0.24 0.26 0.28 0 0 10 20 Time (min) 30 40 実サンプル分析例③ ＜前処理方法＞試料をGLクロマトディスク25A(0.45μm) でろ過後、超純水で10倍希釈 1 5 6 9 2 20 市販ペットボトル入り紅茶(UV) mAU 5 7 10 8 10 0 mAU 2 34 0 1 7 34 40 拡大図 9 6 8 10 0 2 20 Time (min) 0.6 市販ペットボトル入り紅茶(ECD) 20 Time (min) 30 uA 5 67 3 1 2 20 Time (min) 0.4 3 6 7 40 拡大図 9 0.2 2 4 9 4 0 1 40 ＜前処理方法＞試料をGLクロマトディスク25A(0.45μm) でろ過後、超純水で100倍希釈 5 uA 10 0.26 0.28 0.30 0.32 0.34 0 0 10 20 Time (min) 30 40 GL Sciences　LC　Technical　Note 電気化学検出器　ED723 Cat.No. 6001-72300 ■　測定方式：アンペロメトリック、パルスアンペロメトリック、スキャン ■　メンテナンス性に優れたダイヤモンド電極を使用可能 ■　セルオーブン標準搭載（20～45℃）カラム GLクロマトディスク InertSustain C18 5μm, 150 x 4.6 mm I.D. Cat.No. 5020-04645 水系25A　0.45 μm Cat.No. 5040-28512 （直径はサンプル処理量に応じてご選択下さい） DG7760 分析装置：GL7700 シリーズカテキン分析システム ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ 脱気装置送液ポンプオートサンプラー UV検出器カラムオーブン電気化学検出器 DG7760 PU7710 AS7720 UV7750 CO7730 ED723       ED723 ジーエルサイエンスでは、分析ノウハウときめこまやかなフォローもお付けしたシステム提案を行っております。お近くの営業所やカスタマーサポートセンターまでお気軽にお問い合わせください。ホームページはこちらから・・・ http://www.gls.co.jp/hplc.html 〒163-1130　東京都新宿区西新宿6丁目22番1号　新宿スクエアタワー30F TEL.03(5323)6611　FAX.03(5323)6622 TEL.03(5323)6611 TEL.06(6357)5060 TEL.045(985)7900 TEL.024(534)2191 TEL.029(858)3700 TEL.043(248)2441 TEL.048(667)1611 TEL.052(931)1761 TEL.082(233)1101 TEL.092(738)6633 FAX.03(5323)6622 FAX.06(6357)4580 FAX.045(985)7901 FAX.024(536)1518 FAX.029(858)3780 FAX.043(248)2485 FAX.048(667)1656 FAX.052(931)1814 FAX.082(233)1110 FAX.092(738)6636 ｶｽﾀﾏｰｻﾎﾟｰﾄｾﾝﾀｰ T E L . 0 4 ( 2 9 3 4 ) 1 1 0 0 FAX.04(2934)3361 東大横東筑千北名広九京営業阪支浜支北営業波営業葉営業関東営業古屋営業島営業州営業部店店所所所所所所所データに起因して生じたいかなる損害に対しても、当社は責任を負うものではありません。また、記載事項を予告なしに改訂する場合があります。あらかじめご了承ください。ジーエルサイエンス LC テクニカルノート