CHROMATOGRAPHY CONSUMABLES Product Specifications Thermo Scientific MAbPac Protein A カラムモノクローナル抗体分析用アフィニティーカラム Thermo Scientific™ MAbPac™ Protein Aカラムは、高速分析が可能なアフィニティーカラムです。このカラムを使用すると、細胞で培養したモノクローナル抗体の濃度を高速かつ正確に定量することができます。製品の特長・無多孔性のポリマー基材に親水性の表面・リガンドは組み換え（recombinant ）した Protein A ・濃度 0 .025 mg/mL ∼ 5 mg/mLの mAb定量・高速分析が可能で、分析時間は2分・堅牢性に優れており、2000回注入データあり・流速2 mL/minでも低圧はじめに近年、モノクローナル抗体（mAb ）は治療用性に優れており、良好な再現性が得られます。カラムのフォーマットは不活性なのタンパク質として注目されています。組 Thermo Scientific PEEK™を使用しておみ換えモノクローナル抗体の開発初期段階り、カラムサイズは4.0 x 35 mmです。では、たくさんの培養細胞（harvest cell culture、 HCC ）が使用され、生産された IgG アプリケーションの濃度をスクリーニングする必要がありまモ HCCクローンによる生産効率も含めて、す。 mAbの濃度測定には、 Protein Aをリガンノクローナル抗体には正確な定量が要求ドに持つアフィニティークロマトグラフィーされます。ユニークな MAbPac Protein A が利用されています。MAbPac Protein Aカカラムの充填剤は、高速で正確な分離、幅ラムは、高速かつ正確に IgGの濃度が測定で広い濃度で直線性が得られるといった特きるカラムです。また、 IgGのキャリーオー長があります。高速で精度の高い分析結バーを抑制するので、幅広い濃度範囲で直果が得られるため、複数回の注入で再現性線性が得られます。を確認したり、再分析の必要性を低減したりできます。特許取得済みの親水性ポリカラムテクノロジーマーは高速のマストランスファーを可能 MAbPac Protein Aカラムは無多孔性のポにするため、シャープなピーク形状が得らリマーを基材としており、中心の疎水性ジれます。低いバックプレッシャーで高効ビニルベンゼンの周りを親水性の表面で率が得られるため、分析のオートメー覆っています。特許取得済みの充填剤はション、ハイスループット、より正確な定量高速のマストランスファーを可能にし、値が期待できます。このカラムのフォーキャリーオーバーを抑制して効果的な分離を実現します。組み換えした Protein A のリガンドは、アミン基で親水性表面に共有結合しています。このため、非常に堅牢サンプルの注入、マットは、 Thermo Scientific バイオコンパチブルシステムを使用して、保持、溶出、分取を自動かつ高速で行えるようにデザインされています。 mAbの高速濃度測定モノクローナル抗体の濃度を測定する場合、高速かつ正確に分析することが重要になります。図1は、 HCCサンプルを10 µL注入して、 MAbPac Protein Aカラムで分析した例です。カラムに保持されない成分が最初に溶出されます。次に、低い pH（pH=2.5）を利用して目的の mAbを溶出させます。高速のマストランスファーは、効果的な分離をご提供します。分析時間は、カラム平衡化を含めて2分です。クロマトグラムの右上に、 IgG抗体のピーク面積から得られた検量線を記載しています。ユニークな充填剤表面は、正確な定量と幅広い濃度範囲での測定（0.025 mg/mL ∼ 5 mg/mL ）を可能にします。 5,200 面積 mAU x min 40 4,000 30 20 10 0 3,000 0 mAU MAbPac Protein A, 4 × 35 mm 2 mL/min 50 mM リン酸ナトリウム、150 mM NaCl, 5% アセトニトリル（pH 7.5）移動相B: 50 mM リン酸ナトリウム、150 mM NaCl, 5% アセトニトリル（pH 2.5）グラジエント: 時間 %A %B 0 100 0 0.2 100 0 0.21 0 100 0.8 0 100 0.81 100 0 2.0 100 0 カラム温度: 25 ºC 検出: UV（280 nm）注入量: 10 µL サンプル培養細胞（Harvest cell culture、HCC）カラム: 流速: 移動相A: カラムに保持されない成分 20 40 60 80 100 ウサギIgGの量（µg） 2,000 IgG 1,000 -200 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 Min 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0 図1：MAbPac Protein Aカラム（4.0 x 35 mm）によるHCCの分析 mAbの精製アフィニティークロマトグラフィーで濃縮および精製を行 MAbPac Protein Aカラムは、い、次にサイズ排除クロマトグラフィーやイオン交換カラムを組み合わせる二次元クロマトグラフィー（2D-LC ）にも便利です。その固定相は mAbのみを結合および溶出させるので、シャープなピークが得られ、濃縮が可能です。図2は、 HCCを50 µL注入した場合のクロマトグラムです。96ウェルプレートに IgGをタイムベーストリガーにより分取しました。この時、流速2 mL/minで200 µL分取し、分取した時間は0.1 minです。 MAbPac Protein Aカラムを利用して、効果的に HCCを分離、濃縮、精製することができました。 MAbPac Protein A, 4 × 35 mm 2 mL/min 50 mM リン酸ナトリウム、、pH 7.5） 60 mM NaCl（移動相B: 50 mM リン酸ナトリウム、、pH 2.5） 60 mM NaCl（グラジエント: 時間 %A %B 0 100 0 0.2 100 0 0.21 0 100 0.8 0 100 0.81 100 0 2.0 100 0 カラム温度: 25 ºC 検出: UV（280 nm）注入量: 50 µL サンプル: 培養細胞（Harvest cell culture、HCC）カラム: 流速: 移動相A: カラムに保持されない成分 2,500 分取したIgG 2,000 1,500 mAU 2 1,000 500 0 -500 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 Min 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0 図2：MAbPac Protein Aカラム（4.0 x 35 mm）によるHCCの中のモノクローナル抗体の精製図3は、一次元目に Protein Aカラムで分取および精製した mAbを、二次元目に Thermo 3 Scientific MAbPac SCX-10（10 µm ）で分析した場合のクロマトグラムです。この分析にはpHグラジエントバッファーを使用し、 pH 5.6 ∼ 10.2のグラジエントを行いました。クロマトグラムより、精製した IgGのバリアントを検出することができました。一次元目および二次元目の分析には、 Thermo Scientific Dionex™ Chromeleon™データシステムを使用しました。このソフトウェアを使用すると、 HCCの二次元分析をオートメーション化できます。 20.0 10.50 17.5 10.00 15.0 9.00 10.0 7.5 8.50 5.0 8.00 2.5 7.50 0.0 -4.0 10.0 pH mAU 9.50 pH実測値 12.5 MAbPac SCX-10, 10 µm, 4 × 250 mm 1 mL/min CX-1 pH gradient buffer A、 10倍希釈(pH 5.6) 移動相B: CX-1 pH gradient buffer B、 10倍希釈(pH 10.2) グラジエント: 時間 %A %B 0 100 0 1 100 0 31 0 100 34 0 100 34.1 100 0 40 100 0 カラム温度: 30 ºC 検出: UV（280 nm）注入量: 100 µL サンプル: 精製したIgG カラム: 流速: 移動相A: 7.00 12.0 14.0 16.0 18.0 20.0 Min 22.0 24.0 26.0 28.0 6.50 30.0 図3：MAbPac SCX-10およびリニアーpHグラジエントバッファーを利用した、mAbのチャージバリアントの分析再現性図4で示すように、 MAbPac Protein Aカラムは非常に再現性のよいデータをご提供します。2000回以上注入を行って、保持時間、ピーク面積値、シンメトリー係数にほとんど変化がありませんでした。ロットの異なる MAbPac Protein Aカラムでも、良好なカラム間の再現性が得られるように、厳しい仕様に基づいて製造されています。それぞれのカラムは、テスト後に QAレポートと共に出荷されます。 MAbPac Protein A, 4 × 35 mm 2 mL/min 50 mM リン酸ナトリウム、150 mM NaCl, 5% アセトニトリル（pH 7.5）移動相B: 50 mM リン酸ナトリウム、150 mM NaCl, 5% アセトニトリル（pH 2.5）グラジエント: 時間 %A %B 0 100 0 0.2 100 0 0.21 0 100 0.8 0 100 0.81 100 0 2.0 100 0 カラム温度: 25 ºC 検出: UV（280 nm）注入量: 20 µL サンプル: ウサギIgG、1 mg/mL カラム: 流速: 移動相A: 1,400 1,200 1,000 mAU 800 #2011 #1811 #1611 600 #1411 #1211 400 #1011 #811 #611 200 #411 #211 #30 -50 0.00 0.25 0.50 0.75 図4：再現性および堅牢性 1.00 1.25 Min 1.50 1.75 2.00 2.25 2.50 注入回数# 保持時間（min）面積（mAu*min）（min） 30 211 411 611 811 1011 1211 1411 1611 1811 2011 0.80 0.78 0.80 0.80 0.80 0.80 0.80 0.79 0.81 0.79 0.79 7.96 7.93 7.88 7.97 7.58 7.77 7.78 7.50 7.50 7.78 7.77 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 PWHH 仕様 MAbPac Protein A 親水性の無多孔性ポリマーリガンド Protein A 粒子径 12 µm バインディングキャパシティ ~3.5 mg IgG/g resin ローディングキャパシティ 100 µg IgG（流速 2 mL/min） Product Specifications 基材仕様と推奨のパラメーターカラム粒子径（µm ）流速（mL/min ）耐圧（psi ）温度限界（℃） pH 範囲 IgG ローディングキャパシティ（µg ） MAbPac Protein A 12 ≤ 2.5 ≤ 1000 ≤ 30 1.9∼7.5 ≤ 100 オーダーインフォメーション ※図3の pH gradient buffer A、Bについては、お問い合わせください。詳細製品番号 MabPac Protein A, Analytical column, 4 × 35 mm 082539 注意 : 本製品を2日以上ご使用されない場合、冷蔵（2 ∼ 8℃ ）で保管してください。 Ⓒ 2014 Thermo Fisher Scientific Inc. 無断複写・転載を禁じます。ここに記載されている会社名、製品名は各社の商標、登録商標です。ここに記載されている内容は、予告なく変更することがあります。詳細については、販売代理店にお問い合わせください。サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社分析機器・消耗品に関するお問い合わせはこちら TEL 0120-753-670 FAX 0120-753 -671 〒221-0022 横浜市神奈川区守屋町3 -9 E-mail : [email protected] www.thermoscientific.jp 販売店 E1409