2014.3.15 ニ ッ セ ン ケ ン 分 室 「 思 い つ き ラ ボ 」 No.12 乳 酸 菌 飲 料 の乳 酸 菌 を確 かめてみよう・・・ ニュース報 道 で「白 い割 烹 着 （かっぽうぎ）売 れ行 き急 増 」の見 出 しが目 にとまり記 事 を読 むと 今 何 かと 物 議 を醸 （かも）している万 能 細 胞 「STAP 細 胞 」の研 究 発 表 後 からとあります。「STAP 細 胞 」論 文 の信 憑 性 （しんぴょうせい）については今 後 の動 向 を見 守 りたいと思 いますが 研 究 員 が着 用 していたことで存 在 感 としては地 味 だった割 烹 着 が脚 光 を浴 びることとなりました。我 々の検 査 業 務 担 当 者 も白 衣 を着 用 しているのですが 確 かに前 ボタンより後 ろで留 める割 烹 着 のほうが汚 れよけの意 味 合 いからは理 に適 （かな）っていると思 います。 オシャレ感 がないとして昭 和 の高 度 成 長 期 からずっとエプロンに押 され気 味 になっていたのが オシャレ商 品 としてまた注 目 を浴 びることになりました。これからの研 究 員 たちはみんな割 烹 着 に・・・ということにはな りませんがしばらくはブームになればと思 っています。日 本 伝 統 の衣 料 品 が注 目 を集 めるのは気 分 のいい ものです。「再 生 細 胞 」研 究 とはいきませんが思 いつきラボでもなにかそれ風 な自 由 研 究 がないものかと探 していたところ 立 石 バイオケミカルのメンバーより乳 酸 菌 飲 料 の乳 酸 菌 を調 べてみましょうという提 案 が・・・即 採 用 です。 ということで・・・・・・・・ 混 釈 平 板 培 養 法 ( コ ロニー法 ) を 用 いて 生 菌 数 測 定 を しまし ょう 細 菌 は目 に見 えないほど微 細 な生 物 です。では、どうやって数 えることができるのでしょうか？微 生 物 実 験 においては様 々な測 定 方 法 があります。今 回 は混 釈 平 板 培 養 法 を用 いて生 菌 数 測 定 をしましょう。 混 釈 平 板 培 養 法 とは検 体 あるいは希 釈 した検 体 をシャーレに採 り、液 状 の寒 天 を加 えて混 合 します。こ れを冷 まし、固 まったらインキュベーターで培 養 します。培 養 後 に形 成 されたコロニー (集 落 )の数 を数 え て、もとの検 体 の菌 数 を算 出 する方 法 です。 (イ メ ー ジ ) 検 体 を寒 天 と混 ぜる。この状 態 だと菌 は目 に見 えないぐらい小 さいので、目 に見 える大 きさのコロニー (集 落 )になるまで培 養 する。(1 個 の細 菌 が増 殖 して 1 つのコロニーを形 成 する) もう少 し詳 しい手 順 を例 で見 てみましょう。 一般財団法人ニッセンケン品質評価センター 〒111-0051 東京都台東区蔵前 2-16-11 (本部) TEL: 03-3861-2341 FAX: 03-3861-4280 WEB: www.nissenken.or.jp 2014.3.15 検 体 (20mL)中 の生 菌 数 を 3200 個 とします。 3200 個 ／ 20mL ①よく撹 拌 した検 体 から 1mL シャーレに取 り出 して寒 天 と混 ぜます。 3200 個 ／20mL より 1mL 取 り出 しているので、シャーレ中 には 160 個 の菌 がいる状 態 になります。 160 個 ／mL ②寒 天 が固 まったら培 養 し、形 成 されたコロニーを数 えます。 寒 天 上 には 160 個 の菌 がそれぞれにコロニーを形 成 して、目 で見 て 確 認 できるようになっています。 ※菌 液 中 の生 菌 数 が多 い(または多 いと推 測 される)場 合 上 記 のほかに、希 釈 系 列 を作 って数 えます。(希 釈 系 列 とは、段 階 的 に薄 めた液 のことです。 ) 1mL 系列 1mL 1mL 1mL 9mL 9mL 9mL 9mL 検体 10 倍 希 釈 100 倍 希 釈 1000 倍 希 釈 10000 倍 希 釈 (0) (1) (2) (3) (4) 1mL 1mL 43,000 個 ／ mL 4,300 個 ／ mL 1mL 430 個 ／ mL 1mL 43 個 ／ mL 1mL 4.3 個 ／ mL 多すぎて数えられない コロニー数 が 30～300 個 の平 板 を採 用 し、菌 数 を算 出 します。この場 合 の検 体 1mL あたりの菌 数 は、希 釈 倍 率 の 1000 をかけて、 43 個 ×1000＝43,000 個 ／mL ちなみに、検 体 が 20mL の場 合 、検 体 全 部 では、 43,000 個 ／mL×20mL＝860,000 個 ／20mL となるのです。 一般財団法人ニッセンケン品質評価センター 〒111-0051 東京都台東区蔵前 2-16-11 (本部) TEL: 03-3861-2341 FAX: 03-3861-4280 WEB: www.nissenken.or.jp 2014.3.15 さ あ、 実 際 に 体 験 してみ ましょ う 用 意 するもの ・乳 酸 菌 飲 料 ・生 理 食 塩 水 ・試 験 管 ・シャーレ ・寒 天 培 地 ・マイクロピペット 前 述 の通 り作 業 してみましょう・・・ ①よく手を洗って ②器具を正しく使いましょう ③作業は安全キャビネットの中で ④希釈系列作成中 ⑤試験管撹拌中 ⑥1 億倍まで希釈します 「振動がしびれる～」 ⑦寒天培地を注いで混和中 ⑧ 寒 天 が 固 ま っ た ら 、 イ ン キ ュ ベ ー タ ー で 72 時 間 程 培 養 し ま す 一般財団法人ニッセンケン品質評価センター 〒111-0051 東京都台東区蔵前 2-16-11 (本部) TEL: 03-3861-2341 FAX: 03-3861-4280 WEB: www.nissenken.or.jp 2014.3.15 培 養 後 のようすは・・・ 見 事 に乳 酸 菌 のコロニーが形 成 されていました！この寒 天 培 地 には、乳 酸 菌 が培 地 の栄 養 分 を分 解 し て生 成 する乳 酸 に反 応 して、黄 色 に変 色 するものを使 用 しています。 実 験 の結 果 です。 乳酸菌飲料 Ａ 希釈系列 100 万 倍 希 釈 (×106) コロニー数 数えられない 1000 万 倍 希 釈 (×107) 1 億 倍 希 釈 (×108) ５７ ８ ６９ ５ ６ .３ ×１ ０ ８ 個 ／ mL 生菌数 (製 品 1 本 (65mL)あ た り 約 410 億 個 ) 乳酸菌飲料 Ｂ 希釈系列 コロニー数 生菌数 100 万 倍 希 釈 (×106) 1000 万 倍 希 釈 (×107) 1 億 倍 希 釈 (×108) ２２５ ２２ ２ ２１８ ２３ ３ ２ .２ ×１ ０ ８ 個 ／ mL (製 品 1 本 (65mL)あ た り 約 140 億 個 ) はっ酵 乳 Ｃ 希釈系列 100 万 倍 希 釈 (×106) コロニー数 数えられない 生菌数 1000 万 倍 希 釈 (×107) 1 億 倍 希 釈 (×108) １０５ １５ １００ ９ １ .０ ×１ ０ ９ 個 ／ mL (製 品 1 本 (112mL)あ た り 約 1100 億 個 ) 一般財団法人ニッセンケン品質評価センター 〒111-0051 東京都台東区蔵前 2-16-11 (本部) TEL: 03-3861-2341 FAX: 03-3861-4280 WEB: www.nissenken.or.jp 2014.3.15 乳 酸 菌 飲 料 とは、乳 などを乳 酸 菌 又 は酵 母 で発 酵 させたものを加 工 し、又 は、主 要 原 料 とした飲 料 のこ とをいい、はっ酵 乳 とは、乳 又 はこれと同 等 以 上 の無 脂 乳 固 形 分 を含 む乳 などを乳 酸 菌 又 は酵 母 で発 酵 させ、糊 状 又 は液 状 にしたもの又 はこれらを凍 結 したものをいいます。 考察 今 回 の実 験 では乳 酸 菌 を確 認 できたわけですが、身 の回 りには多 くの菌 類 が存 在 しています。菌 というと何 かと害 のあるもの、避 けるものと思 われていますが、乳 酸 菌 のように食 文 化 に深 く関 わっているものや、古 くから生 活 の役 に立 ってきた菌 類 も多 いのです。日 頃 なかなか目 には見 えないものですが、うまく付 き合 っていくこと が大 切 ですね。 ・・・・・・・なんとも素 晴 らしい自 由 研 究 になりました。乳 酸 菌 は腸 などの消 化 管 にバランスよく存 在 してい ることで腸 内 環 境 の正 常 化 を維 持 しようと努 めてくれている役 に立 つ菌 なのです。今 回 の報 告 で乳 酸 菌 もより身 近 なものになりました。自 由 研 究 協 力 者 のみなさんありがとうございました。また自 由 研 究 テーマ や質 問 などお待 ちしております。 原稿担当 自由研究協力者 立 石 ラボ 神﨑 江麻 竹中 直 （チョク） 立 石 ラボ 村田 貴洋 立 石 ラボ 湯沢 拓也 立 石 ラボ 戸谷 佑衣 蔵 前 ラボ 中西 つばさ 一般財団法人ニッセンケン品質評価センター 〒111-0051 東京都台東区蔵前 2-16-11 (本部) TEL: 03-3861-2341 FAX: 03-3861-4280 WEB: www.nissenken.or.jp
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