JP 2006-52171 A 2006.2.23 (57)【要約】【課題】本発明は、安全性が高く食品への適用が可能であり、優れたアンジオテンシン変換酵素阻害活性を有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤を提供することを目的とするものである。【解決手段】製麹原料として大豆を使用して得られる大豆紅麹又はその抽出物をアンジオテンシン変換酵素阻害剤の有効成分として使用する。【選択図】なし (2) JP 2006-52171 A 2006.2.23 【特許請求の範囲】【請求項１】製麹原料として大豆を使用して得られる大豆紅麹又はその抽出物を有効成分とするアンジオテンシン変換酵素阻害剤。【請求項２】大豆が脱脂大豆である、請求項１に記載のアンジオテンシン変換酵素阻害剤。【請求項３】大豆を紅麹菌により製麹することを特徴とする、アンジオテンシン変換酵素阻害物質含有紅麹の製造方法。【請求項４】 10 請求項１又は２に記載のアンジオテンシン変換酵素阻害剤を含有することを特徴とする、アンジオテンシン変換酵素阻害用の食品又は医薬品。【発明の詳細な説明】【技術分野】【０００１】本発明は、優れたアンジオテンシン変換酵素（以下、「ＡＣＥ」と表記する）阻害活性を有するＡＣＥ阻害剤に関する。また、本発明は、当該ＡＣＥ阻害剤を含有する食品又は医薬品に関する。【背景技術】 20 【０００２】ＡＣＥ阻害剤は、アンギオテンシン IIの産生を抑制することにより昇圧系であるレニン −アンジオテンシン系を抑制する作用に加えて、ブラジキニンの分解を阻害することにより降圧系であるカリクレイン−キニン系を活性化する作用があり、高血圧症の治療薬として応用されている。これまでに、ＡＣＥ阻害剤として使用される天然由来の成分や化学合成物が種々報告されており、既に高血圧症の治療薬として臨床的に実用されているものもある。【０００３】従来のＡＣＥ阻害剤の中でも、特に、天然由来成分を有効成分とするものは、その高い安全性から、機能性食品等の食品への応用も期待されている。しかしながら、従来のＡＣ 30 Ｅ阻害作用が知られている天然成分では、ＡＣＥ阻害作用が不十分である、当該成分の生成が困難である等の問題点がある。そのため、優れたＡＣＥ阻害作用を有し、天然由来成分を有効成分とするＡＣＥ阻害剤の開発が望まれている。【０００４】ところで、従来、紅麹には種々の薬理作用があることが明らかにされている。例えば、特許文献１には、白米と共に、大豆類、小麦類又は麦芽類を製麹原料として用いて製造した紅麹には、血圧降下成分が含有されていることが開示されている。しかしながら、特許文献１には、紅麹のＡＣＥ阻害活性の有無や、大豆を単独で製麹原料として用いて製造した紅麹についての薬理特性については、報告されていない。また、特許文献２には、紅麹菌中に存在するジペプチド（ Val− Phe）がＡＣＥ阻害剤として有用であることが開示され 40 ている。しかしながら、特許文献２には、大豆を製麹原料として使用することや、より優れたＡＣＥ阻害作用を有する物質を生成蓄積させるためにどのような技術を採用すればよいかについては開示していない。【特許文献１】特開２０００−２７９１６３号公報【特許文献２】特開２００４−８３５２９号公報【発明の開示】【発明が解決しようとする課題】【０００５】そこで本発明の目的は、安全性が高く食品への適用が可能であり、優れたＡＣＥ阻害活性を有するＡＣＥ阻害剤を提供することである。また、本発明は、当該ＡＣＥ阻害剤を含 50 (3) JP 2006-52171 A 2006.2.23 有する食品及び医薬品を提供することを目的とするものである。【課題を解決するための手段】【０００６】本発明者等は、上記課題を解決すべく鋭意検討したところ、大豆を製麹原料として用い、紅麹菌を使用して製麹して得られる大豆紅麹、及びその抽出物には、特に優れたＡＣＥ阻害活性があることを見出した。本発明は、かかる知見に基づいて、さらに改良を重ねることにより完成したものである。【０００７】即ち、本発明は、下記に掲げる発明を提供するものである：項１．製麹原料として大豆を使用して得られる大豆紅麹又はその抽出物を有効成分とす 10 るアンジオテンシン変換酵素阻害剤。項２．大豆が脱脂大豆である、項１に記載のアンジオテンシン変換酵素阻害剤。項３大豆を紅麹菌により製麹することを特徴とする、アンジオテンシン変換酵素阻害物質含有紅麹の製造方法。項４．項１又は２に記載のアンジオテンシン変換酵素阻害剤を含有することを特徴とする、アンジオテンシン変換酵素阻害用の食品又は医薬品。【０００８】以下に、本発明を詳細に説明する。本発明のＡＣＥ阻害剤は、大豆紅麹又はその抽出物を有効成分とすることを特徴とするものである。【０００９】 20 本発明のＡＣＥ阻害剤の有効成分である大豆紅麹は、製麹原料として大豆を用い、紅麹菌を使用して製麹して得られるものである。【００１０】製麹原料として使用する大豆は、丸大豆及び脱脂大豆のいずれであってもよい。より高いＡＣＥ阻害活性を有する大豆紅麹を製するという観点から、好ましくは脱脂大豆である。当該大豆は、適当な大きさに、細切されたものが望ましい。【００１１】また、上記製麹原料には、紅麹菌の生育を補助する成分が添加されていてもよい。かかる成分としては、例えば、酵母エキス、コースティーリカー、ペプトン、ビタミン、無機質等が挙げられる。 30 【００１２】上記製麹原料の水分含量は、紅麹菌が生育可能であり、ＡＣＥ阻害活性物質が多く生成されるような条件に適宜調節される。具体的には、製麹原料の水分含量としては、製麹原料の総重量に対して、通常３５∼５５重量％、好ましくは４０∼５０重量％が例示される。【００１３】また、上記製麹原料のｐＨについては、紅麹菌が生育可能であることを限度として、特に制限されない。当該ｐＨの一例として、通常４∼７．５、好ましくは４．５∼５．５が挙げられる。このようなｐＨの範囲内にあれば、一層効率的に、ＡＣＥ阻害活性物質を大豆紅麹中に生成させることが可能になる。上記ｐＨに調整するためのｐＨ調整剤としては 40 、例えば、酢酸、塩酸、クエン酸、乳酸等の有機酸が挙げられる。【００１４】上記製麹原料は、製麹に先立って、加熱、加圧加熱等の公知の手段により、殺菌処理されていることが望ましい。なお、当該殺菌処理は、特に制限されないが、上記製麹原料のｐＨ調整前に行うことが望ましい。【００１５】本発明において、上記大豆紅麹を調製する際に使用される紅麹菌は、食品衛生上又は薬学的に許容されるものであれば、特に制限することなく使用できる。当該紅麹菌としては、具体的には、モナスカス属（ Monascus）に属する細菌、より具体的には、モナスカス・プルプレウス（ Monascus purpureus）、モナスカス・アンカ（ Monascus anka）、モナス 50 (4) JP 2006-52171 A 2006.2.23 カス・ピーロサス（ Monascus pilosus）、これらの変種、及びこれらの変異株等が挙げられる。これらの紅麹菌は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を任意に組み合わせて使用してもよい。【００１６】本発明において、上記大豆紅麹の製麹は、上記製麹原料に上記紅麹菌を植菌し、よく混合した後に、好気的条件下で培養を行うことにより実施される。【００１７】製麹時の温度条件としては、上記紅麹菌が生育可能である限り、特に制限されないが、通常２３∼３７℃、好ましくは３０∼３５℃が例示される。【００１８】 10 また、当該製麹に要する時間は、使用する紅麹菌の種類や使用する大豆の種類等によって異なり、一律に規定することはできないが、通常７∼３０日間、好ましくは１４∼２１日間である。【００１９】当該製麹の期間中、製麹期間中１回若しくは数回に分けて、水やｐＨ調整剤を添加し、水分含量やｐＨが上記範囲に保持されるように調節することができる。【００２０】斯くして得られる大豆紅麹には、優れたＡＣＥ阻害活性を有する物質が含有されており、当該大豆紅麹をそのまま、或いは、乾燥、細切、粉砕、粉末化等の処理をしたものを、ＡＣＥ阻害剤の有効成分として使用できる。 20 【００２１】また、本発明のＡＣＥ阻害剤としては、上記大豆紅麹の他に、当該大豆紅麹の抽出物を使用することもできる。【００２２】当該大豆紅麹の抽出物は、当該大豆紅麹から水溶性画分を抽出溶媒を用いて抽出することにより得ることができる。具体的には、当該大豆紅麹の抽出物は、当該大豆紅麹をそのまま、或いは必要に応じて細切や破砕等の処理を施したものを、抽出溶媒で抽出することにより取得できる。当該抽出溶媒としては、冷水、温水、熱水等の水；有機溶剤；又は水と有機溶剤の混合液が例示される。当該抽出溶媒として使用される有機溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール等の低級ア 30 ルコール等を挙げることができる。当該抽出溶媒としては、好ましくは水、及び水とエタノールの混合液を挙げることができる。抽出溶媒として、水と有機溶剤の混合液を使用する場合、該混合液の総重量に対する該有機溶媒の含有割合としては、例えば１∼９９重量％、好ましくは１∼５０重量％となる割合を挙げることができる。【００２３】本発明のＡＣＥ阻害剤は、そのＡＣＥ阻害作用に基づいて、高血圧の治療や心不全の治療に有用である。本発明のＡＣＥ阻害剤は、食品や医薬品の分野において使用され、これによって、ＡＣＥ阻害用の食品や医薬品が提供される。本発明のＡＣＥ阻害剤は、食品成分により構成され、日常的に食されても安全であるという本発明の効果に鑑みれば食品の形態で使用されることが望ましい。 40 【００２４】食品分野では、本発明のＡＣＥ阻害剤は、そのまま、或いは食品素材として各種食品に配合されることによって使用され、これによってＡＣＥ阻害活性を有する食品が提供される。即ち、本発明は、食品の分野においてＡＣＥ阻害用と表示された食品を提供するものである。当該食品としては、一般の食品の他、特定保健用食品、栄養補助食品、機能性食品、病者用食品等を挙げることができる。より具体的には、飲料、菓子類、パン、シリアル、アイスクリーム、お茶、ふりかけ、麺類、惣菜、大豆加工食品（例えば、納豆や大豆等）、食用油、醸造食品（例えば、味噌や日本酒等）、調味料（例えば、醤油等）、マヨネーズ、乳製品（例えば、マーガリン等）、魚肉類練り製品（例えば、ソーセージ等）等を例示できる。また、特定保健用食品や栄養補助食品等の場合であれば、錠剤、粉末、顆 50 (5) JP 2006-52171 A 2006.2.23 粒、カプセル、トローチ、シロップ、液剤等の形態のものであってもよい。これらの中で好適なものとして、錠剤、粉末、顆粒、カプセル、及び液剤を挙げることができる。【００２５】本発明のＡＣＥ阻害剤を含有する食品において、該食品中の該ＡＣＥ阻害剤の配合割合については、該食品の種類、有効成分の種類、対象者の年齢、性別、期待される効果等に応じて、適宜設定すればよい。例えば、ＡＣＥ阻害剤の有効成分として大豆紅麹を使用する場合であれば、食品の総重量に対して、大豆紅麹が、乾燥重量換算で、３∼１００重量％となる割合を挙げることができる。また、例えば、ＡＣＥ阻害剤の有効成分として大豆紅麹の抽出物を使用する場合であれば、食品の総重量に対して、当該抽出物が、乾燥重量換算で、０．５∼１０重量％となる割合を挙げることができる。 10 【００２６】ＡＣＥ阻害剤を含有する食品の摂取量については、年齢、体重、症状等により異なるが、例えば、成人１日当たりの摂取量として、該ＡＣＥ阻害剤が、大豆紅麹の乾燥重量に換算して０．１∼１００ｇに相当する量を挙げることができる。【００２７】また、医薬分野では、本発明のＡＣＥ阻害剤は、薬学的に許容される基材や担体と共に製剤化され、ＡＣＥ阻害用の医薬品に調製され、使用される。当該医薬品には、必要に応じて、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、湿潤化剤、緩衝剤、保存剤、香料等の薬学的に許容される添加剤を任意に配合してもよい。当該医薬組品の形態としては、特に制限されるものではないが、例えば散剤、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤等を挙げることができる 20 。【００２８】ＡＣＥ阻害剤を含有する医薬品の投与量については、有効成分の種類、投与対象者の年齢や体重、症状、投与回数等によって異なり一律に規定することはできないが、例えば、成人１日当たりの投与量として、ＡＣＥ阻害剤が、大豆紅麹の乾燥重量に換算して１∼１００ｇに相当する量を挙げることができる。【００２９】ＡＣＥ阻害剤を含有する医薬品の投与回数については、有効成分の種類、投与対象者の年齢や体重、症状、該医薬品の１回当たりの投与量等に応じて適宜設定できる。【００３０】 30 なお、ＡＣＥ阻害剤を含有する医薬品における該ＡＣＥ阻害剤の配合割合については、該医薬品の形態や前記投与量等に応じて適宜設定すればよい。【発明の効果】【００３１】製麹原料として大豆を用いて製麹した大豆紅麹には、他の製麹原料（例えば、米や小麦等）を使用した場合に比して、顕著に優れたＡＣＥ阻害活性を有する成分が生成されている。そのため、本発明のＡＣＥ阻害剤は、優れたＡＣＥ阻害活性を有しており、実用性が高く有用である。【００３２】また、本発明のＡＣＥ阻害剤は、長年食されている食品成分を原料として使用しており 40 、安全性の点で優れているので、医薬品のみならず、食品としても応用可能である。【発明を実施するための最良の形態】【００３３】以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。【００３４】実施例１−２＜大豆紅麹の調製＞丸大豆に水を添加して、水分含量を４０重量％に調整し、これを加熱殺菌して製麹原料とした。次いで、この製麹原料に、モナスカス・ピーロサス（ NBRC4520、生物遺伝センタ 50 (6) JP 2006-52171 A 2006.2.23 ーより入手）を植菌し、１７日間（３０℃で４日間、次いで２５℃で１３日間）、静置培養を行い、大豆紅麹を製した（実施例１）。また、丸大豆の代わりに、脱脂大豆を使用する以外は、上記実施例１と同様の方法で、大豆紅麹を製した（実施例２）。【００３５】＜大豆紅麹の水抽出物の調製＞上記で得られた大豆紅麹を１０５℃で２０分間加熱処理した。次いで、加熱処理した大豆紅麹を乾燥した後に、粉砕し、これに１０倍量（重量比）の水を添加し、室温で、３０分間撹拌抽出を行った。抽出処理後、遠心分離により、固形分を除去して、大豆紅麹抽出物含有溶液を得た。【００３６】 10 ＜ＡＣＥ阻害活性の評価＞３００ｍＭ塩化ナトリウム含有０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ８．３）に、４．７ｍｇ／ｍｌとなるようにヒプリル − L-ヒスチジル -L-ロイシンを添加して、ヒプリル − L -ヒスチジル -L-ロイシン溶液を調製した。このヒプリル − L-ヒスチジル -L-ロイシン溶液２００μｌに、上記で得られた大豆紅麹抽出物含有溶液又はその希釈液（以下、「試験サンプル」と表記する）５０μｌを添加して、３７℃で１時間プレインキュベートした。次いで、これに、５０μｌのＡＣＥ含有溶液（３００ｍＭ塩化ナトリウム含有０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ８．３））を添加して、液中のＡＣＥ量を４．５ｍＵとして、３７℃で１時間インキュベートした。その後、１Ｎ塩酸を２５０μｌ添加し、反応を停止した後、酢酸エチルを１．５ｍｌ加え、２０秒間撹拌した。次いで、上層の酢酸エチル層を 20 １ｍｌ採取し、これを吸引濃縮乾燥した後、蒸留水を１ｍｌ添加して、生成した馬尿酸を完全に溶解し、２２８ｎｍの吸光度を測定した。なお、コントロールとして試験サンプルを添加しなかったもの、及びブランクとして１Ｎ塩酸を添加した後にＡＣＥ含有溶液を添加したものについても、同様に測定した。測定した吸光度の値から、下記式に基づいてＡＣＥ活性阻害率（％）を算出した。当該ＡＣＥ活性阻害率（％）から、ＡＣＥ活性を５０％阻害する濃度（ＩＣ50）を求めた。ＡＣＥ活性阻害率の算出式ＡＣＥ活性阻害率（％）＝｛（Ｃ−ＣＢ）―（Ｓ−ＣＳ）｝×１００／（Ｃ−ＣＢ）Ｃ：コントロールの吸光度Ｓ：試験サンプルの吸光度 30 ＣＢ：コントロールのブランクの吸光度ＳＢ：試験サンプルのブランクの吸光度。【００３７】得られた結果を表１に示す。この結果、丸大豆及び脱脂大豆を単独で製麹原料として用いて製麹した大豆紅麹には、優れたＡＣＥ阻害活性を有する成分が含有されていることが確認された。【００３８】【表１】 40 【００３９】実施例３−１０平均粒子径２∼５ｍｍ程度に粉砕した丸大豆、及び紅麹菌（モナスカス・ピーロサス、 NBRC4520、生物遺伝センターより入手）を用いて下表２に示す条件で製麹し、大豆紅麹を調製した（実施例３−１０）。次いで、得られた各種大豆紅麹を上記実施例１−２の欄に 50 (7) JP 2006-52171 A 2006.2.23 記載の「大豆紅麹の水抽出物の調製」及び「ＡＣＥ阻害活性の評価」と同様の方法で、大豆紅麹の水抽出物を調製し、そのＡＣＥ阻害活性を評価した。【００４０】得られた結果を表２に併せて示す。この結果、３０∼３５℃で培養して得られた大豆紅麹には強いＡＣＥ阻害活性があることが明らかになった。【００４１】【表２】 10 20 (8) JP 2006-52171 A 2006.2.23 フロントページの続き (51)Int.Cl. Ｃ１２ＮＣ１２ＮＦＩ 1/14 9/99 (2006.01) (2006.01) テーマコード（参考）Ｃ１２Ｎ 1/14 １０１Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｆターム(参考) 4B018 LB01 LB02 LB04 LB06 LB07 LB09 LE01 LE02 LE03 LE05 MD80 ME04 MF01 MF06 MF07 4B065 AA58X AC14 BB27 BC32 BD16 CA41 CA44 4C087 AA01 AA02 AA03 BC10 NA07 ZA42 ZC17 ZC20 4C088 AB61 AC04 AD18 CA25 NA07 ZA42 ZC17 ZC20