Title Author(s) Journal URL №１０：Porphyromonas gingivalis ECF シグマ因子 PGN_０３１９の機能解析太田, 功貴; 菊池, 有一郎; 今村, 健太郎; 吉川, 幸輝; 喜田, 大智; 藤瀬, 和隆; 国分, 栄仁; 齋藤, 淳; 石原, 和幸歯科学報, 115(3): 276-276 http://hdl.handle.net/10130/3677 Right Posted at the Institutional Resources for Unique Collection and Academic Archives at Tokyo Dental College, Available from http://ir.tdc.ac.jp/ ２７６学会講演抄録 №９：EpCAM 陽性エクソソームと親和性界面との相互作用解析１）山本恵史１）２），岩井千弥１）２），吉田光孝１）２），吉成正雄３），矢島安朝１）（東歯大・口腔インプラント）２）３）（がん研究所・蛋白創製研究部）（東歯大・口科研）目的：エクソソームとは，細胞から放出される３０− １００nm 程度の細胞外分泌小胞で，血液，唾液，尿，羊水，腹水などの体液中に多量に存在する。エクソソームは，それを放出する親細胞由来のタンパク質や，RNA を含んでおり，これらの分子はエクソソームを取り込んだ別の細胞内で発現し，機能する。エクソソームは，がんの進展を始めとするさまざまな生物現象に関与していることが次々と明らかにされており，エクソソームを核とした新しい医療が生まれようとしている。本研究ではがんマーカーとして知られている EpCAM（Epithelial Cell Adhesion Molecule）分子に着目し，体液中に存在するさまざまなエクソソームの集団の中から EpCAM 陽性エクソソームを選別する方法の開発を目指している。このために，がん研究所で開発された EpCAM 結合ペプチド「Ep１１４」をポリマーコート剤と複合化した「EpiVeta」を用い，材料表面に EpCAM 親和性界面を形成し，その表面での EpCAM 陽性エクソソームの相互作用を原子間力顕微鏡を用いて評価することを目的とした。方法：「EpiVeta」をポリスチレンプレートへコートし，EpCAM 陽性エクソソームおよび EpCAM 陰性エクソソームとの結合を原子間力顕微鏡（Asylum Research 社）により評価した。エクソソームは HCT１５（EpCAM 陽性），および HT１０８０（EpCAM 陰性）より調製した。また，EpCAM 結合ペプチドを提示しないコート剤として MPC ポリマー（日油社）を用いた。定量的評価は SPIP イメージ解析ソフトウェア（Image Metrology 社）を使って行なった。結果：EpiVeta をコートしたポリスチレンプレートにおいて，EpCAM 陰性エクソソームと比較して EpCAM 陽性エクソソームでは，数倍の結合を確認した。これにより，EpiVeta をコートしたポリスチレンプレートと EpCAM 陽性エクソソームとの特異的な結合を定性的，定量的に評価することができた。考察：EpCAM 結合ペプチドである Ep１１４により構成されるコート剤『EpiVeta』が形成する親和性材料表面が示す EpCAM 陽性エクソソームに特異的な結合力を，原子間力顕微鏡を用いて定量的に評価できることが明らかとなった。 №１０：Porphyromonas gingivalis ECF シグマ因子 PGN_０３１９の機能解析太田功貴１）２），菊池有一郎２）３），今村健太郎１），吉川幸輝１），喜田大智１），藤瀬和隆２）３），国分栄仁２）３），１）２）３）（東歯大・口科研）（東歯大・微生）齋藤淳１）２），石原和幸２）３）（東歯大・歯周）目的：Extracytoplasmic function（ECF）シグマ因子は菌体外の生活環境変化に応答し，遺伝子の転写量を制御することで細菌のストレス応答に関与している。歯周病原細菌 Porphyromonas gingivalis は６種の ECF シグマ因子を保有しており，その一部は DNA 修復や酸化ストレス物質の消去に関与するとの報告がある。また，鉄は細菌の増殖に必須の栄養素であり他のグラム陰性菌においては鉄取り込みに関与する ECF シグマ因子が存在するが，P. gingivalis における ECF シグマ因子と鉄取り込みとの関連性は明らかにされていない。本研究では ECF シグマ因子の遺伝子挿入変異株を作製し，鉄取り込み機構との関連性を検討した。方法：P. gingivalis ３３２７７株の６種の ECF シグマ因子遺伝子内にエリスロマイシン耐性遺伝子カセットが挿入された変異株を作製した。また，そのうち１種の ECF シグマ因子において遺伝子とその周辺部を PT-COW ベクターに組み込み，変異株に導入して相補株を作製した。野生株と変異株において通常時およびヘミン制限条件下における増殖曲線を評価した。また網羅的遺伝子発現を DNA マイクロアレイにて検討後，野生株，変異株および相補株において Real-time RT-PCR にて遺伝子転写量を評価した。結果および考察：ヘミン制限条件下において，野生株と比較し PGN_０３１９変異株の増殖速度の減少が認められた。またマイクロアレイ解析において， PGN_０３１９変異株において外膜タンパク質に関与する遺伝子発現の減少が認められた。Real-time RTPCR の結果，野生株と比較し PGN_０３１９変異株において P. gingivalis の鉄取り込み機構に関与する PGN_０５５７（HmuR）の遺伝子転写量の減少が認められ，相補株において野生株と同等レベルに回復した。以上の結果より ECF シグマ因子 PGN_０３１９は PGN_０５５７（HmuR）の遺伝子発現制御に関与し， P. gingivalis の増殖における鉄取り込み機構に関与することが示唆された。 ― 92 ―