プロテインアッセイLOWRYキットタンパク質定量用試薬目的とする生体成分が、タンパク質であることが判っていることを前提とすると、これを分離精製する各段階でタンパク質の回収量をつきとめる必要性があります。一般的にタンパク質の定量法においては、化学試薬に加え、呈色の変化などを分光光度計やマイクロプレートリーダなどで測定し、検量線からタンパク質量を算出する方法が用いられています。当社では様々なタンパク質定量用キットをご用意しており、ここでは、プロテインアッセイLowryキットの紹介を行います。特長 ★本液キットは、Lowry法のタンパク質定量に必要な試液を全て含有 ★５∼１００µg／mlのタンパク質溶液の定量に最適 ★１キット約５００回測定測定原理使用方法 Lowry法は、タンパク質中のペプチド結合がアルカリ性でCu２＋と反応して紫紅色の錯体をつくる性質を利用したビュレット法とチロシン、トリプトファン、システインの側鎖と反応するフェノール試薬（リンモリブデンタングステン酸ナトリウム溶液）とを組み合わせた方法で、タンパク質と反応すると深青色を呈するのを利用してタンパク質を定量します。‐SHおよび‐S‐S‐を含む化合物、フェノール類、アミノ酸、グリセロール、EDTA、TritonX‐ １００などは発色に影響を与えることが知られています。試薬の準備１．銅溶液の調製 B液１mlとC液１mlを十分に混和後、A液４９mlを添加して十分に混和して下さい。これ以外のスケールで銅溶液を調製する場合は、A液：B液：C液を上記の手順に従って、容量比４９：１：１で混合して下さい。２．フェノール試薬 D液をそのまま使用します。３．測定標準液の調製既知濃度の牛血清アルブミン水溶液などを測定標準液として用意します。使用方法１．清潔な試験管にマイクロピペットなどで正確に試料液０．２mlを分取し、マイクロピペットなどで銅溶液１mlを添加して十分に混和後、室温で１０分間静置します。試薬ブランクは、試料液に替えてイオン交換水を用います。２．時間経過後、マイクロピペットなどでフェノール試薬（D液）０．１mlを添加して十分に混和後、室温で３０分間静置します。３．分光光度計で測定波長７５０nmの吸光度を測定します。使用例 Lowry法、CBB法、BCA法との比較およびタンパク質種差による発色程度の違いを紹介します。ウシ血清アルブミンに対する各タンパク質定量法の反応性の違い 1.8 1.6 1.4 Abs 1.2 1 CBB BCA 0.8 Lowry 0.6 0.4 0.2 0 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 Protein conc.(mg/ml) Lowry法 0.8 Abs（750nm） 0.7 0.6 0.5 CBB 0.4 γ-グロブリンオボアルブミン 0.3 0.2 0.1 0 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 Protein conc.(mg/ml) 参考文献 Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., and Randall R.J., J.Biol.Chem. １９３，２６５‐２７５（１９５１） . 使用上の注意 Lowry法の原理から、タンパク質の種類により吸光度が異なります。特定タンパク質の濃度を正確に測定する場合は、測定対象の特定タンパク質の希釈系列により検量線を作成し、吸光度を濃度換算して下さい。試薬ブランクの測定および検量線の作成は、測定毎に行うことを推奨します。マイクロピペットやメスピペットで液分注する際、チップやピペット先端に付着した液をペーパータオルなどで拭い去り、正確に液分注して下さい。銅溶液は、上記の用法に従って必要量を用時調製して下さい。銅溶液は、強アルカリ性です。ゴム手袋、保護メガネなどの保護具を着用して下さい。皮膚に付着した場合は大量の流水で洗い流して下さい。余った銅溶液は、銅廃液として処理して下さい。キット内容価格表名称包装内容容量本数５００ml １本１０ml １本 A液１mol／l水酸化ナトリウム２（W／V）％炭酸ナトリウム／０． B液０．５（W／V）％硫酸銅（ C液１（W／V）％酒石酸ナトリウムカリウム水溶液１０ml １本 D液１Nフェノール試薬５０ml １本製品名 Protein Assay Lowry Kit 生化学研究用）五水和物水溶液規格商品コード容量価格 SP ２９４７０―６０１kit ９，８００