PYR testi - Türkiye Halk Sağlığı Kurumu

Basıldığında KONTROLSUZ KOPYA niteliğindedir.
ULUSAL MİKROBİYOLOJİ
STANDARTLARI (UMS)
PYR Testi
(L-Pirolidonil--Naftilamid)
Hazırlayan Birim
Klinik Bakteriyoloji Tanı Standartları Çalışma Grubu
Onaylayan Birim
Türkiye Halk Sağlığı Kurumu
Kategori
Bakteriyoloji
Bölüm
Test Prosedürleri
Standart No
B-TP-19
Sürüm No
1.1
Onay tarihi
01.01.2015
Geçerlilik tarihi
01.01.2018
Sürüm no Tarih
Değişiklik
PYR testi
İÇİNDEKİLER
KAPSAM VE AMAÇ............................................................. 3
KISALTMALAR VE TANIMLAR .............................................. 3
GENEL BİLGİ ................................................................... 3
TEKNİK BİLGİLER ............................................................. 3
1
2
3
4
Test için asgari laboratuvar koşulları ................................ 3
Testin uygulanması ....................................................... 4
Sonuçların değerlendirilmesi/yorumlanması ...................... 5
Olası sorunlar/kısıtlılıklar ................................................ 5
KAYNAKLAR ..................................................................... 6
Sayfa 2 / 6
Ulusal Mikrobiyoloji Standartları
01.01.2015 / Sürüm: 1.1 / B-TP-19 / Test Prosedürleri / Bakteriyoloji
PYR testi
Kapsam ve Amaç
PYR testi başta bazı gram pozitif koklar olmak üzere pek çok bakterinin ayırıcı
tanısı için yaygın kullanılan bir testtir. Bu UMS’nin amacı PYR testinin yapılışına
ve yorumlanmasına dair bir rehber sunmaktır.
Kısaltmalar ve Tanımlar
Karsinojen Kansere neden olabilen etken ya da madde, kanserojen
PYR
L-pirolidonil--naftilamid
Substrat
Enzimin etki ettiği madde
Genel Bilgi
Bazı bakteriler pirolidonil peptidaz enzimi üretirler ve bu enzimin saptanmasında
PYR maddesi substrat olarak işlev görür. Peptidazın aktivitesine bağlı olarak
substratın yıkılması ile -naftilamid oluşur ki, bu ürün ortama %0.01’lik
sinnamaldehit reaktifinin katılması ile kırmızı renk meydana getirir (1).
PYR maddesi potansiyel karsinojen olduğundan substratın laboratuvarda
hazırlanması artık tercih edilmemektedir. Bugün artık yaygın bir şekilde PYR testi
için piyasadan temin edilebilen kitler kullanılmaktadır; bu kitler substrat
emdirilmiş PYR diskleri içerir. Sıvı substrat içeren bazı PYR kitleri de vardır;
bunların stafilokokların tanısında daha uygun olduğu kabul edilmektedir (1).
PYR hidrolizi ilk Streptococcus pyogenes ve enterokokların tanımlanmasında
yararlı bir test olarak kullanıma girmiştir. Bütün S. pyogenes ve enterokok
izolatlarının %99’u PYR pozitiftir (2). Sonraları testin diğer bazı bakterilerin
tanısında da yararlı olabileceği keşfedilmiştir; örneğin, Escherichia coli’nin diğer
oksidaz negatif, indol pozitif, laktoz pozitif, gram negatif çomaklardan ayrımında
da PYR testi yüksek bir doğruluk oranı ile kullanılmaktadır. Ayrıca, koagülaz
negatif stafilokokların kendi aralarındaki ayrımında PYR önemli bir testtir (1,2).
Teknik Bilgiler
1 Test için asgari laboratuvar koşulları
1.1. Laboratuvar güvenliği
Bu UMS’de bahsi geçen tüm organizmalar ile ilgili işlemler asgari BGD2
laboratuvar şartlarında gerçekleştirilmelidir. Bütün kültürler enfeksiyöz kabul
edilmeli ve daima standart önlemler uygulanmalı, önlemler risk değerlendirmesi
ile de desteklenmelidir. Aerosol oluşturması muhtemel tüm laboratuvar
çalışmaları bir biyolojik güvenlik kabininde gerçekleştirilmelidir (ayrıca bkz.
“Ulusal Laboratuvar Güvenliği Rehberi”).
Ulusal Mikrobiyoloji Standartları
Bakteriyoloji / Test Prosedürleri / B-TP-19 / Sürüm: 1.1 / 01.01.2015
Sayfa 3 / 6
PYR testi
1.2. Sorumluluklar ve asgari personel gerekleri
Bu UMS’yi kullanacak laboratuvar personeli; (i) testten önce, amaçlanan kullanım
ile ilgili eğitim almış olmalı; (ii) uygulamaya tüm yönleriyle aşina olmalı, ve; (iii)
daima tüm laboratuvar güvenlik kurallarına uymalıdır.
1.3. Örnek, Reaktif, Donanım
Test mikroorganizmaları

A grubu -hemolitik streptokok şüpheli izolatlar

Enterokok şüpheli izolatlar

Koagülaz negatif stafilokoklar

E. coli şüpheli izolatlar

PYR testi gerekli görülen diğer herhangi bir laboratuvar izolatı
Reaktifler

PYR diskleri – PYR maddesi emdirilmiş diskler piyasadan temin edilir.
Çok sayıda üretici vardır. Diskler karanlıkta, 2-8°C’de saklanır.

Bazı kitler streptokokların tanımlanmasında PYR de dahil, çeşitli spot
testleri bir arada yapma imkanı sağlar.

Bazı kitler sıvı PYR reaktifi içerir. Bunlar stafilokokların tanımlanması
için tercih edilmektedir.

%0.01’lik p-dimetil amino sinnamaldehit
Diğer gereç, donanım




Öze, steril tek kullanımlık veya platin, ya da steril test çubukları
Steril su
Petri kabı
Penset
1.4. Kalite kontrol

Her yeni PYR kiti ve reaktifi kullanıma sokulmadan önce pozitif ve
negatif kalite kontrol suşları ile test edilmelidir.

Kontrol organizmaları (1):
Enterococcus faecalis ATCC 29212 - PYR pozitif
Escherichia coli ATCC 25923 - PYR negatif
2 Testin uygulanması

Bir penset yardımı ile PYR diski Petri kabına konur. Steril su ile hafif
nemlendirilir. Aşırı ıslatılmamalıdır!

Steril çubuk veya öze kullanılarak, bakterinin kanlı agar plağındaki 2448 saatlik üremesinden bir-iki öze dolusu kadar alınır (eski kültürler
kullanılıyorsa daha fazla bakteri alınmalıdır!).
Sayfa 4 / 6
Ulusal Mikrobiyoloji Standartları
01.01.2015 / Sürüm: 1.1 / B-TP-19 / Test Prosedürleri / Bakteriyoloji
PYR testi

İnokulum PYR diski üzerine ezerek sürülür. 2 dk kadar beklenir.
NOT: Bu süre bakterinin PYR diskindeki madde ile reaksiyona girmesi
içindir. Süre yavaş üreme özelliğindeki bakteriler için 10 dakikaya
kadar uzatılabilir.

Süre sonunda 1 damla sinnamaldehit reaktifi damlatılır ve kırmızı renk
oluşup oluşmadığı izlenir.
3 Sonuçların değerlendirilmesi/yorumlanması
3.1. Testin yorumu

Pozitif sonuç – Parlak pembe veya kiraz kırmızısı renk oluşması

Negatif sonuç – Renk değişikliği olmaması veya pozitif indol
reaksiyonuna bağlı mavi renk oluşumu.
NOT: Soluk pembe (zayıf) reaksiyon negatif olarak değerlendirilir.
3.2. Raporlama

Boğaz kültürlerinden tipik grup A morfolojisinde -hemolitik, katalaz
negatif, gram pozitif kok kolonileri – PYR pozitif ise S. pyogenes olarak
identifiye edilir.
(a) Solunum yolu kökenli -hemolitik streptokoklarda negatif PYR testi,
inokulumun az gelmiş olması ihtimali nedeniyle taze pasajlarından
tekrarlanmalıdır ya da ileri incelemelerle teyit edilmelidir.
(b) Solunum yolu harici izolatlarda pozitif PYR testi, negatif safraeskülin, negatif eskülin veya grup A antijenler için serolojik
tiplendirme ile teyit edilmelidir.

Tipik enterokok koloni morfolojisi ile katalaz negatif, gram pozitif
koklar (kısa zincirler yapmış veya diplokoklar şeklinde; fakat tetratlar
veya kümeler halinde değil) PYR pozitif ise Enterococcus olarak
identifiye edilir.

PYR pozitif, koagülaz negatif stafilokok Staphylococcus lugdunensis
olarak tanımlanır. Konfirmasyon için ornitin ve diğer testler kullanılır.

Oksidaz negatif, indol pozitif, laktoz pozitif ve gram negatif çomak
bakteri kolonileri, eğer PYR negatif ise E. coli olarak identifiye edilir.

H2S pozitifliği nedeniyle Salmonella ile Citrobacter arasında ayırıcı tanı
gerektiğinde PYR testi yardımcıdır; Citrobacter PYR pozitif iken
Salmonella PYR negatiftir.
4 Olası sorunlar/kısıtlılıklar

Eğer inokulum seçici besiyerlerinden veya bir biyokimyasal test tüpagardan alınmış ise yanlış negatif sonuç elde edilebilir.

Eğer disk fazla ıslatılmış ise yanlış negatif sonuç elde edilebilir.
Ulusal Mikrobiyoloji Standartları
Bakteriyoloji / Test Prosedürleri / B-TP-19 / Sürüm: 1.1 / 01.01.2015
Sayfa 5 / 6
PYR testi

Staphylococcus aureus’a disk testi uygulandığında soluk renk değişimi
gözlenebilir. Böyle durumlarda başka testlerle doğrulama yapılmalı
veya PYR testi tüpte uygulanmalıdır.

Enterokoklar harici nadir bazı gram pozitif koklar da PYR pozitif
olabilirler. Böyle durumlarda ayırıcı tanı için Gram boyama kullanışlı bir
yoldur; genellikle tetratlar veya kümeler halinde görünürler. Kolonileri
çok küçüktür ve kayda değer patojenler değildirler.
Kaynaklar
1 York MK, Traylor MM, Hardy J, Henry M. Biochemical tests for the identification of aerobic
bacteria. PYR (L-Pyrrolidonyl-ß-Naphthylamide) Test. In: Garcia LS (editor in chief). Clinical
Microbiology Procedures Handbook. 3rd ed. update, ASM Press, Washington D.C. 2010, p.
3.17.41.1 - 3.17.41.3
2 McPherson RA, Pincus MR (eds). Medically Important Bacteria: Gram-positive cocci. In: Henry’s
Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods. 22nd ed., Elsevier Inc., Philadelphia,
PA. 2011, p. 1082-7
Sayfa 6 / 6
Ulusal Mikrobiyoloji Standartları
01.01.2015 / Sürüm: 1.1 / B-TP-19 / Test Prosedürleri / Bakteriyoloji

Download Report